IWF诱导小麦悬浮细胞H2O2迸发及其产生机制初探#br#

【目的】采用具有激发子活性的感染叶锈菌的小麦叶片细胞间隙液IWF-260刺激小麦洛夫林10悬浮细胞,探讨细胞感受激发子刺激引发的H2O2迸发情况及其产生的可能分子机制。【方法】采用化学发光法以及荧光探针DCFHDA、HE来研究H2O2的迸发以及NADPH氧化酶的活化。同时借助药物学试验探讨Ca2+和活性氧的关系。【结果】IWF-260可以引起悬浮细胞H2O2爆发,其在IWF-260刺激诱发的细胞死亡过程中发挥重要作用。而质膜NADPH氧化酶的激活以及胞外钙离子的内流与H2O2爆发有密切关系。【结论】IWF-260能够诱导细胞产生活性氧,质膜NADPH氧化酶和胞外钙离子内流参与了活性氧爆发过程。     

IWF诱导小麦悬浮细胞产生NO及其与Ca2+的关系

 【目的】以感染叶锈菌的小麦叶片细胞间隙液IWF-260作为激发子,刺激小麦洛夫林10悬浮细胞,探讨悬浮细胞受激发子刺激引发的NO变化情况及其产生的可能分子机制。【方法】采用Greiss试剂法及荧光分子探针DAF-2DA标记法检测胞内NO的动态变化,同时借助药物学试验探讨Ca2+和NO的关系。【结果】IWF-260能诱导小麦悬浮细胞产生NO,NO在IWF-260刺激诱发的细胞死亡过程中发挥重要作用。药物学抑制剂试验证明NOS和NR及胞外钙离子内流均与IWF-260刺激小麦悬浮细胞产生的NO有密切关系,且在NO的产生途径中,NR途径为主要途径。【结论】IWF-260能够诱导小麦悬浮细胞产生NO,NOS、NR及胞外Ca2+内流参与了此过程。     

过氧化氢诱导小麦悬浮细胞程序性死亡

为研究过氧化氢对小麦洛夫林10悬浮细胞的影响,分别采用溴酚兰染色、改良苯酚品红染色和琼脂糖凝胶电泳对不同浓度的过氧化氢处理小麦悬浮细胞后的细胞死亡率、细胞核形态变化及基因组DNA的完整性进行了观察和检测。结果表明:随着过氧化氢浓度的增加以及处理时间的延长细胞死亡率逐渐上升,并且伴随有细胞核染色质的凝集,琼脂糖凝胶电泳检测到DNA Ladder。证明过氧化氢能够诱导小麦悬浮细胞发生程序性死亡。     

感染叶锈菌的小麦细胞间隙液对小麦悬浮细胞程序性死亡的诱导

以小麦悬浮细胞为材料,分别用感染叶锈菌小种165的小麦细胞间隙液(IWF165)和未接菌的小麦细胞间隙液(IWFck)对其进行处理,处理后不同时间点取样进行形态学观察和DNA电泳。结果表明,用IWF165处理后的悬浮细胞可观察到明显的染色质凝聚化、边缘化和细胞核解体等现象;同时DNA电泳结果显示IWF165处理后的细胞基因组DNA发生降解并形成明显的DNA梯状条带。而用IWFck处理的悬浮细胞,其细胞核结构完整,染色质分布均匀;DNA电泳没有出现DNA梯状条带。在感染叶锈菌的小麦细胞间隙液中存在着激发子,它能够诱导小麦悬浮细胞发生程序性死亡。     

白藜芦醇抑制过氧化氢诱导的IPEC-J2细胞凋亡及其机制

为了研究白藜芦醇抑制过氧化氢诱导的IPEC-J2细胞凋亡及其机制,利用过氧化氢(Hydrogen peroxide,H_2O_2)建立IPEC-J2细胞凋亡模型,然后分别使用不同浓度的白藜芦醇(Resveratrol,Rel)对IPEC-J2细胞预处理,通过MTT、流式细胞术和蛋白质免疫印迹试验,检测白藜芦醇对H_2O_2诱导的IPEC-J2细胞凋亡的保护作用及其机制。结果表明:50μmol/L的白藜芦醇通过ERK1/2和AKT信号,可以明显抑制50μmol/L过氧化氢诱导的IPEC-J2细胞凋亡。     

小麦叶片中H_2O_2的3种测定方法比较

比较研究了目前正在应用的植物叶片中H2 O2 含量定量测定的 3种方法 ,结果表明 ,Ti (IV) H2 O2 比色法有严重背景干扰 ,测定结果偏高 ;而 5 %TCA (三氯乙酸 )提取 ,活性炭脱色 ,Ti (IV) PAR H2 O2 比色法中 ,活性炭吸附了部分H2 O2 ,测定结果偏低 ;改用萃取脱色时 ,有高回收率 (95 %以上 ) ,干扰小的特点 ,适宜植物叶片中微量H2 O2 的定量测定     

汞盐诱导烟草悬浮细胞产生细胞编程死亡

【目的】阐明氯化汞处理烟草悬浮细胞产生的细胞死亡具有细胞编程死亡（programmed cell death,PCD）的特征和分子机制。【方法】采用形态和生物化学方法观察氯化汞处理细胞后的变化,并采用药理学方法,通过添加抑制剂和抗氧化剂阐明氯化汞引发的信号转导途径。【结果】氯化汞诱导产生的细胞死亡具有PCD特征,包括染色质浓缩、细胞核的TUNEL检测呈阳性和DNA ladder的形成。氯化汞诱导烟草悬浮细胞过氧化氢积累,过氧化氢酶和抗坏血酸等抗氧化剂能降低细胞死亡率。蛋白激酶抑制剂、磷脂酶C和磷脂酶D的抑制剂能显著地降低氯化汞引起的细胞死亡和过氧化氢积累。【结论】氯化汞引起的细胞死亡是一种PCD,蛋白激酶和磷脂信号介导的过氧化氢积累参与细胞死亡过程。     

钙和热加钙处理对桃冷藏期间H_2O_2清除系统的作用

本文分析了钙处理及热加钙处理对桃冷藏期间Ｈ＿２Ｏ＿２含量以及其清除系统中的重要物质ＧＳＨ（谷胱甘肽）、抗坏血酸含量和ＧＲ（谷胱甘肽还原酶）活性的影响，结果表明：钙处理降低了桃中Ｈ＿２Ｏ＿２的积累，对抗坏血酸含量变化无影响，延迟了ＧＳＨ含量的积累，增加了ＧＲ活性，热加钙处理降低了桃中Ｈ＿２Ｏ＿２的含量，提高了抗坏血酸的含量，推迟了ＧＳＨ含量高峰出现的时间，降低了ＧＲ活性     

外源H_2O_2处理对两种小麦叶绿素荧光和叶绿素的影响

[目的]研究不同浓度H2O2处理对2种小麦幼苗叶绿素荧光和叶绿素的影响。[方法]以小麦品种宁春四号和西旱二号幼苗为材料,采用室内水培试验。[结果]对于宁春四号,200μmol/L H2O2处理使得初始荧光(F0)、最大荧光(Fm)、PSⅡ处调节性能量耗散的量子产量Y(NPQ)、光化学淬灭(qP)和非光化学淬灭(NPQ)明显低于对照;不同浓度的H2O2处理使得幼苗叶片叶绿素a(Chla)、叶绿素b(Chlb)和叶绿素总量均显著降低。50、100和200μmol/L H2O2处理下西旱二号幼苗叶片Chla含量和F0显著降低,PSⅡ的最大量子产量(Fv/Fm)、实际光化学反应效率(Y(Π))、电子传递速率(ETR)、qP和NPQ均增大,而Chlb和叶绿素总量无显著变化。[结论]与宁春4号相比,外源H2O2胁迫使西旱2号小麦幼苗叶片PSⅡ反应系统更开放,光合机构的损伤较严重。     

过氧化氢诱导蚕豆气孔保卫细胞一氧化氮的产生

过氧化氢(H2O2)和一氧化氮(NO)已被证明是植物中的信号分子,生物和非生物胁迫都可以导致H2O2和NO的产生.以蚕豆下表皮为材料,通过表皮条生物分析方法和激光扫描共聚显微镜显微技术,检测了H2O2诱导蚕豆气孔关闭过程中NO的产生.H2O2以浓度依赖的方式诱导气孔关闭,NO也有类似的作用.100 μmol/L H2O2诱导的气孔关闭作用可明显地被25 μmol/L一氧化氮合酶(L-NAME)专一性抑制剂或200 μmol/L一氧化氮清除剂(cPTIO)逆转.但L-NAME和cPTIO单独处理时对气孔开度几乎无影响.表皮条经100 μmol/L H2O2处理,再用NO分子探针乙酰乙酸盐-4,5-二氨基荧光黄(DAF-2 DA)孵育后,与对照相比,保卫细胞胞质中荧光强度明显增加.结果表明NO可能参与H2O2诱导的气孔关闭,保卫细胞中H2O2可能是通过NOS途径诱导NO的产生,而且H2O2可能作为上游信号分子诱导NO的产生.     

过量表达Trxs对H_2O_2胁迫下大麦幼苗叶片抗氧化酶活性的影响

[目的]分析过量表达Trxs对大麦幼苗叶片抗外源氧化剂胁迫的影响,为分析Trx参与植物抗氧化胁迫机制提供理论依据。[方法]以转Trxs基因大麦株系（LSY—11—1—1）及其非转基因对照株系为试材,研究了在1．5mmol／LH,0,胁迫条件下,Trxs过量表达对大麦幼苗叶片抗氧化酶活性的影响。[结果]在H：0：胁迫下,转基因大麦的聊,Tm与fV而值高于对照,而丙二醛与H2O2含量低于对照;转基因大麦的过氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）与谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—PX）活性普遍高于对照;转基因大麦与对照的SOD与GSH—PX活性变化趋势不一致;转基因大麦出现2次活性高峰,而对照仅1次。[结论]过量表达Trxs能够通过增强抗氧化酶活性有效地缓解H2O2胁迫对转基因大麦幼苗生长所造成的氧化损伤。     

胞外ATP对泡桐花粉萌发和花粉管伸长的效应及其与H2D2的关系

[目的]研究胞外ATP（eATP）对泡桐（Paulownia tomaentosa Steud.）花粉萌发和花粉管伸长的效应及其与过氧化氢（H2O2）的关系。[方法]eATP浓度分别为0、0.2、0.4、0.6 mmol/L,处理时间分别为1、2、3 h;H2O2浓度分别为0、1、2、3、4、5 mmol/L,处理时间分别为1、2、3 h。[结果]eATP和H2O2均显著抑制花粉萌发和花粉管伸长,且表现出明显的浓度和时间依赖效应。过氧化氢清除剂（ASA）和过氧化氢酶（CAT）能够部分阻止eATP对花粉萌发和花粉管伸长的抑制作用,显示eATP抑制花粉萌发和花粉管伸长与其诱导H2O2产生有关。[结论]eATP对花粉萌发和花粉管伸长的效应能够通过诱导H2O2产生而实现。