应用斑点免疫金渗滤法检测羊东毕吸虫病的研究

应用自行研制的胶体金探针标记ＳＰＡ，建立了诊断羊东毕吸现的新方法－斑点免疫金渗滤法（ＤＩＧＦＡ），该法与ＥＬＩＳＡ法具有良好的相符性，将抗原、等检血清滴加于膜上进行反应，数分钟内即可用肉眼进行结果判定。     

应用斑点免疫金渗滤法检测猪旋毛虫病的试验

为建立检测旋毛虫病的新方法,应用自行制备的直径约１５ｎｍ的胶体金标记ＳＰＡ,建立了检测猪旋毛虫病的滴金免疫测定法,与河南省农科院畜牧所生物技术研究室制备的旋毛虫病快速酶标试剂盒进行对比,结果有良好的一致性,两法符合率为９６．８％（３１／３２）。本法中抗原、抗体通过渗滤在膜上进行反应,数分钟内即可用肉眼观察结果。操作简单,试剂稳定、安全。     

斑点免疫金渗滤法检测赤羽病抗体的研究

以亲和层析原理为基础,将提纯的AKAV抗原包被在硝酸纤维膜上,利用胶体金标记SPA显色,建立了斑点免疫金渗滤法诊断赤羽病抗体的方法。其中最佳点样抗原质量浓度是0.099mg/mL,封闭液选择含1%BSA,0.5%Tween-20的0.01mol/LpH7.2的PBS缓冲液,SPA胶体金最佳稀释度为1∶4。特异性试验表明,该方法特异性好,与牛病毒性腹泻病毒、牛传染性鼻气管炎、牛白血病、口蹄疫、蓝舌病等阳性血清不发生交叉反应。将DIGFA与ELISA进行对比,差异不显著。研究结果表明,该方法操作简单,结果易于判断,适用于赤羽病的临床诊断和流行病学调查。     

斑点金标渗滤法检测猪囊虫病

以亲和层析原理为基础,用猪囊虫纯化抗原作为检测用抗原,胶体金直接标记抗原,建立了斑点金标渗滤法诊断猪囊虫病的方法。其中囊虫抗原与胶体金溶液结合的最佳pH值为7.5,最佳浓度为52 mg/mL,检测时血清的最佳稀释度为1∶10。建立的斑点金标渗滤法检测猪囊虫病血清均为阳性,正常猪及其他病猪血清均显示为阴性,整个检测时间只需要5 min左右。试验结果显示,该方法操作简便、快速、特异性好,适用于猪囊虫病的临床诊断和流行病学调查。     

斑点免疫金渗滤法检测猪瘟抗体的研究

以猪瘟抗原包被硝酸纤维素膜，然后用胶体金标记SPA，建立检测猪瘟抗体水平的斑点免疫金渗滤法检测试纸盒。通过胶体金标记金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)直接显色，阳性者出现红色斑点，结果易于判断。整个试验过程仅需5min，操作简单，与猪兰耳病、猪伪狂犬病、猪细小病毒、新城疫和禽流感等阳性血清不发生交叉反应。同时将该法与目前猪瘟的常规检测方法Dot—ELISA法和间接血凝试验同时对200份猪血清进行猪瘟抗体检测比较，符合率达98．4％和98．9％。说明该法微量、特异、敏感可靠，检测时间短，效果直观，非常适用于猪瘟的早期诊断和普查以及疫苗免疫效果后抗体水平的检测。     

斑点金免疫渗滤测定法检测耕牛血吸虫病的效果观察

免疫胶体金技术是以胶体作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型免疫标记技术，没有潜在致癌物质的酶显色底物。斑点金免疫渗滤测定法是将斑点酶标与免疫胶体金结合起来的一种新型免疫标记技术。该测定方法是将被检抗体（血清或血纸浸出液）直接点样在硝酸纤维素膜上，滴加胶体金标记的血吸虫抗原，特异性抗原与抗体很快结合，在反应处发生金颗粒聚集，1min左右形成肉眼可见的红色斑点，判定检测效果。     

斑点金标免疫渗滤法快速检测牛血吸虫病抗体的效果观察

目的观察斑点金标免疫渗滤法检测牛血吸虫病抗体的效果。方法使用斑点金标免疫渗滤诊断试剂盒检测粪检血吸虫病牛血清(血纸)146头份,疫区耕牛血清(血纸)562头份,并用间接血凝法(indirect haem aggluti-nation assay,IHA)法作对比。结果146头份粪检阳性血清(血纸)检测为阳性者140头份,阳性检出率95.9%,IHA法检测为阳性者141头份,阳性检出率96.6%。结论斑点金标免疫渗滤法检测牛血吸虫病具有快速、简便、灵敏度高、特异性强等优点,但仍有一定漏检,有待于进一步研究提高。     

斑点金标免疫渗滤法诊断家畜血吸虫病的效果

我县从2005-2006年推广应用斑点金标免疫渗滤法(DIGFA)诊断家畜血吸虫病新技术,该项新技术具有快速、简便、准确、省时、省力等优点,使阳性病畜得到及时治疗,取得了满意的效果。1材料与方法1.1诊断试剂DIGFA诊断试剂及Dot-ELISA诊断试剂均由浙江省农业科学院畜牧兽医研究所提供     

斑点酶标法与斑点金标免疫渗滤法检测牛血吸虫病初探

目的比较宽点酶标法与癍点金标免疫渗滤法检测牛血吸虫病的效果。方法选择疫区水牛,耳静脉取血制备血纸,作为待检样品。分别采用斑点金标免疫渗滤法与癍点酶标法检测,比较检测结果。结果癍点金标渗滤法检测仅需30min,而斑点酶标法则需160min。结论疵点金标免疫渗滤法检测牛血吸虫病,操作简便易行、快捷,省时、省工,工作效率成倍提高。     

斑点免疫金渗滤法检测猪生殖与呼吸综合征抗体的研究

应用提纯的猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原包被硝酸纤维素膜，然后用胶体金标记的金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)建立了检测PRRS抗体水平的斑点免疫金渗滤法(DIGFA)。该法通过胶体金标记SPA直接显色，阳性者出现红色斑点，整个试验过程仅需5min即可判断结果；与猪瘟、猪伪狂犬病、猪细小病毒病阳性血清不发生交叉反应；纯化PRRSV抗原的最低检测量为0．0553mg／mL，即55．3ng／点。对200份猪血清用该法与ELISA同时进行PRRS抗体检测，两种方法的符合率达98％。     

酶标抗原Dot－ELISA检测鸭肝炎病毒抗体

酶标抗原Dot－ELISA检测鸭肝炎病毒抗体@杨奎@陈溥言...     

酶标抗原Dot－ELISA检测鸭肝炎病毒抗体

酶标抗原Dot－ELISA检测鸭肝炎病毒抗体@杨奎@陈溥言...     

用点酶法检测鱼类致病性嗜水气单胞菌HEC毒素

本试验建立的检测嗜水气单胞菌HEC毒素的点酶法,可在嗜水气单胞菌培养上清和临床病料中检出HEC毒素,可检出的最低水平为95ng/ml。用该法检测大肠杆菌、沙门氏菌、鳗弧菌、荧光假单胞菌、温和气单胞菌等的培养上清及患草鱼出血病的病鱼病料,均为阴性反应,仅与豚鼠气单胞菌、杀鲑气单胞菌新亚种及吕克氏耶尔森氏菌有轻度的交叉反应。对72株病鱼分离菌及33份病鱼组织的检测结果表明,点酶法与溶血试验的符合率分别为80.7%和90.9%。以上试验重复3次,结果完全一致。综上可见,用点酶法检测嗜水气单胞菌HEC毒素,无须作复杂的细菌鉴定,并能直接用于病料,是一个快速、敏感、特异、有效的方法,显示出广阔的应用前景。     

银加强胶体金技术检测猪细小病毒的研究

本研究首次成功地建立了检测猪细小病毒（ＰＰＶ）抗原的银加强胶体金检测法（ＳＥＣＧＡ），并确定了操作流程中的最佳试验条件。应用该法对纯化ＰＰＶ抗原的最低检出量为０．３１２５ｎｇ／点，其敏感性分别为间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和ＨＡ的８倍和１０００倍。特异性阻断试验和交叉反应试验证明ＳＥＣＧＡ具有较高的特异性。２０份样本ＳＥＣＧＡ的检测结果与病毒分离和鉴定结果完全相符。ＳＥＣＧＡ和间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ对７７份样本检测的阳性率分别为８３．１％和８０．５％，其阳性符合率为９６．９％。研究结果表明本法具有经济、敏感性、特异性强等优点，可用于ＰＰＶ感染的特异诊断。为胶体金技术应用于畜禽传染病的诊断和研究奠定基础。     

幼虫发育试验对羊毛圆科线虫抗药性的检测

目的了解内蒙古部分地区散养户羊群毛圆科线虫的抗药性。方法将丙硫咪唑、伊维菌素配制成不同浓度的药液,利用幼虫发育试验对羊毛圆科线虫进行检测,统计数据,建立直线回归方程,计算出幼虫发育半数抑制量(LD50)。结果包头土右旗羊伊维菌素和丙硫咪唑的LD50平均值分别为0.0 039μg/mL和0.0 052μg/mL,最高值分别为0.0 055μg/mL和0.0 085μg/mL;鄂尔多斯达旗羊两者平均值0.0 034μg/mL,0.0 036μg/mL,最高值分别为0.0 078μg/mL和0.011μg/mL;同时将上述地区羊丙硫咪唑LD50最高值同宁夏地区抗苯并咪唑类虫株相应的LD50值进行了对比,前者的LD50值明显低于后者。结论上述被检地区散养户羊群毛圆科线虫尚不具有抗药性。     

快速检测A型流感病毒的Taq Man实时荧光定量RT-PCR方法的建立

根据A型流感病毒基质蛋白（matrix protein,M）基因保守序列设计并合成特异性引物和TaqMan BHQ探针,建立快速检测A型流感病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。通过RT-PCR方法克隆A型流感病毒M基因靶序列并将其连入pMD-18T载体,制备阳性标准品,优化反应条件,以10倍系列稀释的标准品绘制标准曲线,其相关系数为0.998。检测结果显示,该方法的灵敏度可达10 copies/μL或1 EID50病毒且特异性良好,除A型流感病毒外,对猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪输血传播病毒检测结果均为阴性。该方法重复性好,批内和批间变异系数均小于3%。对40份实验感染样品的检测结果表明,该方法与病毒分离结果一致,比常规RT-PCR检测方法灵敏度更高,特异性更强。     

耕牛四种寄生虫病的联合诊断技术应用报告

该文报告了在湖北省武穴、蕲春、浠水、团风、黄梅、黄州６ 县血吸虫病流行区,采用斑点酶联技术（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测耕牛的血吸虫、捻转血矛线虫、伊氏锥虫、肝片吸虫,并与病原学检查法比较,结果阳性符合率分别为９７．８％ 、９５．５％ 、９４．３％ 和９７．３％ 。说明Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ 有实际应用意义和价值,且方法快速,简便。     

动物性饲料中沙门氏菌快速检验的研究——协同凝集试验及HRP-SPA酶染色法的应用

本研究确定了适用于动物性饲料中沙门氏菌检验的增菌程序、协同凝集试验(COAG)及HRP—SPA染色法(酶染法)的最适实验条件。以这种条件进行增菌,并以COAG及酶染法进行检查,具有快度、敏感、特异性强的优点。应用COAG、酶染法及沙门氏菌常规分离鉴定法,对236份动物性饲料标本进行了检测。结果两种快速法与常规法有较好的符合率,酶染法在检出阳性标本上优于常规法.且可在16～18h内报告结果,比常规法的时间明显缩短。因此认为,COAG和酶染法适用于动物性饲料中沙门氏菌的快速检测。动物性饲料的沙门氏菌污染,依饲料的种类不同而异,其中鱼粉为31.5％、血粉25％骨粉10.3％,平均为17.4％,而且存在着多种血清型的沙门氏菌,其中以鼠伤寒沙门氏菌占优势。因此认为动物性饲料中的沙门氏菌污染在人畜沙门氏菌的流行病学上具有重要的作用。     

吖啶橙免疫荧光菌团法对肉品和鲜乳中小肠结肠耶氏菌快速检出的实验研究

对应用吖啶橙免疫荧光菌团法(培养法和沉淀法)快速检出小肠结肠耶氏菌的敏感性和特异性进行了实验研究,进而应用先增菌再菌团法的检测程序,对肉品模拟标本和198份肉品和鲜乳实际样品进行了检测,并与常规分离培养法作了对比,证明菌团法于13.5×10~2～10~3个攻/ml以上时,出现典型荧光菌团,与13种杂菌不形成菌团交叉;与杂菌比在1:400以下菌团形成不受干扰;与常规培养法的阳性检出率无显著差异(P>0.05);40h以内即可获得结果,较常规分离培养时间(一般4d左右)大为缩短。     

用免疫荧光、酶标技术检测赭曲霉毒素A的研究

该项研究采用本课题组提纯的赭曲霉毒素A(Ochratoxin A·简称OA)和研制的兔抗OA抗体等,进行间接荧光法和ELISA间接法检测OA的试验。通过对不同浓度的OA纯品和含毒饲料浸提液及中毒死亡鸡内脏的间接荧光染色,均能检出分布均匀、大小有别的黄绿色荧光亮点;用OA为被检抗原和兔抗OA抗体与羊抗兔IgG-HRP进行ELISA间接法试验,对含不同浓度OA的试验孔和对照孔的检测,结果均正确稳定。研究结果证明,以上两种检测方法检测OA均具有灵敏、特异、快速等优点。