鳗鲡肠道产蛋白酶菌株的筛选、鉴定及酶学性质研究

采用酪蛋白平板透明圈法,结合以鱼粉为底物的蛋白酶活力测定法,从欧洲鳗鲡肠道中分离筛选出1株高产蛋白酶的菌株MJ15。通过形态学观察、Biolog鉴定以及16SrRNA基因序列分析,该菌株鉴定为乳酸乳球菌乳酸亚种Lactococcus lactis subsp.Lactis。对菌株MJ15所产蛋白酶性质进行初步分析,结果显示,其最适作用温度和pH值分别为40℃和5.0,酶的热稳定性以及碱稳定性较差;K~+、Na~+、Cu~(2+)、Fe~(2+)对蛋白酶有激活作用,但Zn~(2+)、Pepstatin A对该酶有抑制作用;该酶的Km值和Vmax值分别为8.77 mg·mL~(-1)和53.48μg·min~(-1)·mL~(-1)。     

乌昌地区传统酸牛奶中乳酸菌的分离鉴定

[目的]新疆酸奶中菌种资源丰富,因地域性差异,其中所含乳酸菌也有所不同,进一步了解乌昌地区菌种资源,为该区酸奶发酵剂的开发提供参考.[方法]采集新疆乌昌地区酸奶样品,采用传统形态学、生理生化特性方法对分离并纯化出的20株乳酸菌进行鉴定.[结果]经传统形态学、生理生化特性方法鉴定为7株德氏乳杆菌乳亚种(L.delbrueckii subsp.lactis),3株干酪乳杆菌(L.casei),2株发酵乳杆菌(L.fermentum),3株乳酸乳球菌(L.lactis subsp.lactis),2株乳酸粪肠球菌(Enterococcus faecalis),1株唾液链球菌(S.salivarius),2株未鉴定到种.[结论]结合生理生化鉴定结果,对样品中分离出的CJ2、QT1、QT2、DBC1四株乳酸菌进行16S rDNA基因序列分析,构建系统发生树.经分析QT2和DBC1两株乳酸菌为Lactobacillus delbrueckii subsp.indicus,CJ2和QT1两株为Enterococcus faecalis.     

高产γ-氨基丁酸乳酸菌菌株的筛选及诱变育种研究

以乳酸菌作为出发菌株,将其接入豆浆(大豆?水=1?8)进行发酵,根据发酵过程中γ-氨基丁酸(GABA)产量,筛选出GABA的高产乳酸菌菌株,然后利用紫外线对高产菌株进行诱变处理,筛选得到稳定高产GABA突变菌株.结果表明,保加利亚乳杆菌L2为高产GABA乳酸菌菌株,GABA产量达到1.066 g·L-1.对L2进行紫外诱变处理的最佳照射时间为50 s,在此照射时间下,获得高产GABA突变菌株L2-4,其在含有1% L-谷氨酸的改良MRS培养基和豆浆中的GABA产量分别为4.235和1.394 g·L-1,比原菌株的GABA产量分别提高了25.63%和30.77%     

丙酸产生菌的筛选、鉴定及培养条件

以富含丙酸茵与乳酸茵的奶酪为茵源材料,利用乳酸茵不能以乳酸为碳源这一特点,对丙酸产生菌株进行富集,经过初筛、复筛,从178株菌株中筛选得到5株丙酸产生菌株,其中XZ1号菌株丙酸产量最高且发酵性能稳定,被确定为下一步研究的出发菌株.对该菌株进行生理生化特性鉴定及16SrDNA全序列分析表明,该菌为费氏丙酸杆菌(Propionibacterium freudenreichii),将其命名为P.freuden-reichii XZ1;不同玉米浆浓度及不同碳源对丙酸生产的影响考查表明,玉米浆的最适浓度为40g·L-1,当以20 g·L-1葡萄糖及20 g·L-1的乳酸为混合碳源时,丙酸产量最高达18.94 g.L-1.     

阿鲁科尔沁草原牛乳中乳酸菌生物学特性的研究——肠球菌属等的鉴定（第2报）

本项研究从科尔沁草原的阿鲁科尔沁牧区南北4个苏木16个牧户中采集43个乳样。从43个乳样中分离到64株乳酸菌，对其中的47株进行鉴定，结果分离到肠球菌属（Enterococcus)13株，乳球菌属（Lactococcus)2株，片球菌属（Pedio-coccus)3株。对其中8株分离株进行了种的鉴定，结果为殊异肠球菌（E.dispar)1株，蒙特氏肠球菌（E.mundtii)1株，类鸟肠球菌（E.pseudoavium)1株，屎肠于菌（E.faecium)3株，乳球菌乳脂亚种（L.lactis subsp cremoris)1株，乳球菌乳亚种（L.lactis subsp Lactis)1株，嗜盐片球菌（P.halophilus)1株。通过研究发现，被鉴定菌株的生物学特性基本符合各属和种的鉴定标准，均属于中温性乳酸菌。     

虹鳟致病性杀鲑气单胞菌的分离鉴定及其毒力因子的检测

为研究虹鳟Oncorhynchus mykiss致病性杀鲑气单胞菌Aeromonas salmonicida的致病机理,利用微生物学及分子生物学方法,从患皮肤溃疡病的虹鳟病灶处分离纯化获得1株优势菌株RBWF-1,通过人工感染试验证实其具有较强的致病性。结果表明:菌株RBWF-1对虹鳟的半致死浓度(LD50)为5.5×10~6CFU/m L;通过对菌株RBWF-1 16S r DNA基因序列扩增、测序及Blast对比,发现其与杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种Asalmonicida subsp.masoucida菌株NBRC 13748及无色亚种A.salmonicida subsp.achromogens菌株NCIMB 1110的16S rDNA基因序列同源性最高,一致性均为99.6%;构建系统发育树显示,菌株RBWF-1与杀鲑气单胞菌杀鲑亚种A.salmonicida subsp.salmonicida、杀日本鲑亚种、无色亚种和史氏亚种A.salmonicida subsp.smithia聚为一支;为进一步明确菌株的分类地位,利用Biolog微生物鉴定系统结合传统生理生化试验对菌株RBWF-1各项理化指标进行检测,经对比,与杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种吻合度最高,因而判断该分离株为杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种;同时,对分离菌株的气溶素、溶血素、封闭带毒素、DNA酶、丝氨酸蛋白酶、磷脂酶、S层蛋白7个毒力相关基因进行了PCR检测,检测结果均呈阳性;酶活性检测结果显示,菌株RBWF-1胞外产物具有蛋白酶、淀粉酶、脂酶、DNA酶和溶血活性。本研究结果可为中国虹鳟养殖过程中杀鲑气单胞菌的感染特征、分类鉴定和疫苗研制提供必要的数据和参考。     

乳酸乳球菌N3816发酵培养基的优化研究

以乳酸乳球菌株（Lactococcus lactis subsp. lactis N3816）为出发菌株,通过单因子试验和正交设计方法对该菌株产Nisin发酵培养基进行优化。结果表明：该菌株产Nisin的最适碳源、复合氮源和生长因子分别为：蔗糖0.8%、蛋白胨2.0%、酵母膏1.0%、Tween801.5%。     

内蒙古双峰驼乳及乳制品中乳杆菌的分离及其

本实验主要对11份双峰骆驼乳样品进行了乳酸杆菌的分离和生物学特性的研究。将分离到的16株革兰氏阳性、过氧化氢酶试验阴性杆菌，分别鉴定为Lactobacillus casei subsp. casei(5株)、Lactobacillus plantarum(4株)和Lactobacillus delbruekii subsp.lactis等同型发酵乳杆菌和2株异型发酵乳杆菌(AZ41-1和AZ44-1)。多数菌株为15℃生长良好，以中温性菌株占优势。脱脂乳中产酸量较低。     

细脚拟青霉RCEF0788菌株抑制MAO活性产物的培养工艺研究

研究细脚拟青霉RCEF0788菌株抑制单胺氧化酶(MAO)活性产物的培养工艺.结果表明.综合MAO抑制率和发酵液提取物得率情况,较合适的氮源为酵母粉和蛋白胨;较舍适的碳源为麦芽糖和乳糖;适宜的pH值为6.5.正交设计结果验证该菌株抑制MAO活性的最佳培养工艺为20 g·L-1酵母粉,20 g·L-1乳糖,10 g·L-1蛋白胨,10 g·L-1麦芽糖,1 g·L-1磷酸二氢钾和1 g·L-1硫酸镁,26.5℃,培养9 d.     

洋葱伯克霍尔德溶磷菌的筛选和溶磷培养条件优化

【目的】从磷矿区植物根围土中,筛选出具有较高溶磷能力的菌株及优化溶磷培养条件.【方法】通过稀释凃板法分离、筛选菌株,并进行全细胞脂肪酸分析和16S r DNA测序鉴定;正交试验优化溶磷培养条件.【结果和结论】筛选出22株具有溶磷能力的菌株,其中菌株YN2014102的溶磷能力最强,在10 g·L-1的磷矿粉培养基中能释放244.75 mg·L-1水溶性磷.经全细胞脂肪酸分析和16S r DNA测序,该菌株被鉴定为洋葱伯克霍尔德菌.正交试验的结果表明,在质量浓度10 g·L-1的磷矿粉、28℃、摇床转速为180 r·min-1的条件下培养5 d,溶磷效果最好,达277.08 mg·L-1.     

爬山虎内生菌的鉴定及其谷氨酸脱羧酶酶学特性

从爬山虎茎中分离到5株内生菌,其中菌株EJC-1具有谷氨酸脱羧酶(GAD)活性.当湿菌体与10 g·L-1谷氨酸钠溶液比例为1∶10(W∶V)时,在30 ℃和120 r·min-1下振荡反应24 h,细胞转化液中γ-氨基丁酸浓度为(3.07±0.23)mmol·L-1.通过形态特征、生理生化特征和16S rDNA序列分析鉴定EJC-1为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium).同时基于16S rDNA构建了系统进化树,并对EJC-1进行了系统发育分析.B.megaterium EJC-1 GAD的最适反应温度和pH分别为50 ℃和5.6.低于40 ℃,GAD在pH 5～6范围内较稳定.2.5 mmol·L-1 Mg2 对GAD活力具有显著的促进作用,活力提高了13.85%.     

Viili中乳酸菌的初步分离和鉴定

[目的]分离和鉴定Viili中的主要乳酸菌,为开发新型乳制品提供依据。[方法]首先,对Viili中的细菌进行活化、分离和纯化;然后,接种于相应的培养基上进行培养,从生长特性、形态特征以及生理生化特性对分离菌进行鉴定。[结果]Viili中主要含有乳酸乳球菌乳酸亚种（L.lactissub sp.lactis）、乳酸乳球菌乳脂亚种（L.lactissub sp.cremoris）、乳酸乳球菌乳酸亚种二乙酰乳酸亚种（L.lactissub sp.diacetylactis）和肠膜明串球菌乳脂亚种（L.mesenteroidessub sp.cremoris）。[结论]Viili中乳酸菌的种类比较丰富,其中乳酸乳球菌二乙酰乳酸亚种和肠膜明串球菌乳脂亚种在我国乳制品中很少分离到。     

不同培养条件对乳酸链球菌肽菌株产生抑菌作用的影响

以乳酸链球菌素效价和菌体生物量为检测指标,通过单因素试验研究碳源、氮源、磷酸盐、金属离子和发酵条件对乳酸链球菌肽菌株(Lactococcu lactis subsp.lactics)W4摇瓶发酵产生乳酸链球菌素的影响.结果表明:葡萄糖是W4菌株发酵的最佳碳源,酵母膏为最佳氮源,K2HPO4、Fe2+、Mg2+对其发酵有促进作用,而Cu2+有强抑制作用;初始pH6.5、2%接种量、35℃下振荡培养有利于W4菌株生长和乳酸链球菌素的产生.     

产芽孢乳酸菌Lsp-1的抗逆性及产酸产消化酶能力分析

[目的]本研究考察嗜酸乳杆菌(L.a)和地衣芽孢杆菌(B.lich)的融合子产芽孢乳酸菌Lsp-1的抗逆性、产乳酸能力和产消化酶的能力。[方法]通过对Lsp-1和其亲本菌株L.a、B.lich的耐酸耐胆盐能力、产乳酸、产消化酶(蛋白酶、淀粉酶)、产丁二酮能力以及胆固醇清除能力的对比,比较Lsp-1与两亲本菌株的差异。[结果]在pH 2.0或含0.3%胆盐的MRS培养基中培养2.5 h后,Lsp-1的活菌数比亲本菌株L.a和B.lich高10～100倍。B.lich不产乳酸,Lsp-1的产乳酸量48 h后与L.a基本相同。各菌株产胞外中性蛋白酶能力B.lich(8.84 U·mg~(-1))>Lsp-1(5.54 U·mg~(-1))>L.a(4.59 U·mg~(-1));产胞外酸性蛋白酶能力B.lich(4.74 U·mg~(-1))>Lsp-1(3.30 U·mg~(-1))>L.a(2.54 U·mg~(-1));产淀粉酶能力(透明圈直径/菌落直径)B.lich(5.03)>Lsp-1(2.70)>L.a(2.32);产丁二酮能力L.a(10.25μg·mg~(-1))>Lsp-1(8.21μg·mg~(-1)),B.lich没有检测到;胆固醇清除能力Lsp-1(19.7%)显著高于两亲本菌株。[结论]Lsp-1抗逆性提高增强了其肠道存活率和定植能力,融合子遗传了L.a的高产酸能力和B.lich的高产消化酶能力,为其抑制病原菌生长和提高肠道吸收率等提供了保障。     

Nisin产生菌的筛选及鉴定

从新鲜牛奶样品中用M17G筛选培养基定向筛选出20株目的菌株.应用琼脂扩散法,以黄色微球菌(Micrococcus flavus)NCBI8166为指示菌对其发酵产物进行效价测定,经反复筛选,获得1株稳定的高产菌株KY08,产Nisin效价为813IU·mL-1.用细菌鉴定系统Vitek-32进行生化特征鉴定,并参照了<伯杰氏细菌学鉴定手册>(第八版),将KY08菌株初步鉴定为乳酸链球菌种的一个亚种.     

内蒙古双峰驼乳及乳制品中乳杆菌的分离及其生物学特性的研究

本实验主要对11份双峰骆驼乳样品进行了乳酸杆菌的分离和生物学特性的研究。将分离到的16株革兰氏阳性、过氧化氢酶试验阴性杆菌，分别鉴定为Lactobacillus casei subsp.casei(5株）、Lactobacllus plantarum(4株）和Lactobacillus delbrueki subsp.lactis等同型发酵乳杆菌和2株异型发酵乳杆菌（AZ41－1和AZ44－1）。多数菌株为15℃生长良好，以中温性菌株占优势。脱脂乳中产酸量较低。     

外源GABA对西伯利亚白刺幼苗盐胁迫伤害缓解效应

为探讨外源γ-氨基丁酸(GABA)对盐胁迫下西伯利亚白刺幼苗伤害缓解效应,研究不同浓度GABA(0～10 mmol·L-1)对200 mmol·L-1 NaCl胁迫下西伯利亚白刺幼苗生长、生理特性、渗透调节及GABA支路中关键代谢物含量和关键酶活性的影响.结果表明,NaCl胁迫下白刺幼苗生长指标显著下降,丙二醛(MDA...     

野生巨大口蘑1株新菌株ITS鉴定及菌丝培养基优化

【目的】鉴定1株巨大口蘑Tricholoma giganteum新的野生菌株,并优化其菌丝的最适培养基.【方法】以1株野生巨大口蘑为研究对象,采用组织分离法,从野生巨大口蘑子实体中分离纯化得到纯菌丝,利用分子生物学方法进行鉴定,通过测定菌丝生长速度、菌丝长势等指标对其进行培养条件研究,并运用均匀设计法对培养基进行优化,采用二次多项式逐步回归方法对试验结果进行分析.【结果和结论】该野生菌株经鉴定为巨大口蘑,Gene Bank编号为JX193694,命名为SCAU3,其菌丝生长的最适温度为30~32℃,最适p H为7~8,最佳碳源为麦芽糖,最佳氮源为酵母膏.经均匀设计法优化得到最适培养基组合:麦芽糖26 g·L-1,酵母膏2 g·L-1,Mg SO42.7 g·L-1,KH2PO41.8 g·L-1,维生素B1 16 mg·L-1,p H7.7.     

长寿老人源双歧杆菌的鉴定及发酵胡萝卜饮品的研制

为研究新型益生菌产品,开发研制多功能发酵饮料,通过生理生化鉴定、16S rRNA结合tuf基因鉴定确定一株分离自广西巴马长寿老人肠道的菌株为长双歧杆菌长亚种（Bifidobacterium longum subsp. longum Blm)。采用该菌株发酵胡萝卜汁,通过L9(34)正交试验分别对培养成分和发酵条件进行优化,得到最佳发酵工艺为胡萝卜与水的质量比为1∶3,脱脂牛乳添加量为5%,蔗糖添加量为2%,接种量5%,发酵温度37℃,起始pH为6.8,在此最优条件发酵获得的双歧杆菌发酵饮品,活双歧杆菌菌数高达1010 CFU/mL。发酵后饮料中维生素B1、B2、B6、B12的含量较发酵前显著增加,分别为264 μg/g、10.3 μg/g、220 μg/g和21.4 μg/g。长双歧杆菌Blm发酵胡萝卜汁饮料活菌数高,维生素和氨基酸含量丰富,感官品质良好,具有开发为活菌饮品的潜质。     

屎肠球菌HS3细胞转化法生物合成γ-氨基丁酸的研究

在发酵食品中分离了1株产γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的乳酸菌HS3,用vitek32鉴定系统进行生化鉴定,鉴定HS3为屎肠球菌(Enterococcus faecium)。采用菌株HS3细胞转化L-谷氨酸制备γ-氨基丁酸,通过对转化反应温度、pH、金属离子、底物浓度和菌体浓度的影响进行考察,确立了最优转化条件:湿菌体25g/L,Zn2+5mmol/L、L-谷氨酸钠20g/L、L谷氨酸40g/L,在40℃、pH4.8,120r/min搅拌下反应40h,转化液GABA的浓度达38.02(±1.09)g/L,摩尔转化率为94.50(±2.71)%。