冷冻温度对牛精子复苏率及降温速率变化规律的研究

[目的]为了探讨温度变化对牛精子复苏率的影响,找到降温度变化规律。[方法]利用电脑程控冷冻仪、自动数字测温仪,测定精液在不同温度冷冻精子复苏率变化。[结果]表明,精液在-98℃冷冻精子复苏率最高;在-86- -118℃冷冻精子复苏率较高,精液相变适宜降温速率为35℃/min。[结论]控制精液发生相变阶段的降温速率是冻精制作成败的关键。     

提高茸鹿冻精质量关键技术

为进一步提高茸鹿冻精质量,对影响精液冷冻效果的关键因素进行了试验。结果评估得出:精液冷冻宜采用两步冷冻法,细管距液氮面2~3cm,冷冻时间5~7min;冷冻稀释液优先顺序为TriladyTrisBTrisA,Trilady稀释液从经济适用和冷冻效果上看最优;鲜精质量与冷冻效果密切相关,鲜精活力与冻存复苏率、解冻后精子活力呈正相关,R2分别为0.630 6和0.990 2;平衡时间在4℃宜平衡2~3h;平衡方法宜采用水浴中逐渐降温的方法。结果表明:通过进一步优化精液冷冻关键影响因素,可明显提高茸鹿冻精质量。     

密集浸入式细管精液冷冻方法的研究

为了解决使用简易装置、依靠人工方法而导致冷冻细管精液精子复苏率低及冷冻数量少的问题,利用日本西川式简易急速冻结器和密集浸入式细管精液冷冻仪,采取竖向紧密摆放、垂直浸入冷冻精液细管的方法开展试验.结果表明:密集浸入式细管精液冷冻方法,可使解冻后精子复苏率达到57％ ～ 61％,并可以增加每次冷冻细管精液数量,与国内人工冷冻方法比较差异显著(P＜0.05),国外程控冷冻方法比较差异不显著(P＞0.05);应用计算机程序控制细管精液冷冻的方法,能够精确控制精液的降温速率,精子复苏率和工作效率显著提高.     

改进的昆明犬精液冷冻保存方法

为了对现有的犬精液冷冻方法进行改进,进一步提高精子冷冻保存效率,试验采用4种降温时间(30,60,90,120 min)和2种添加甘油方法(一步加或五步加),以冷冻复苏精子的运动度、复苏率、质膜完整率和顶体完整率为指标,比较不同降温时间和不同添加甘油方法对昆明犬精液超低温冷冻保存的效果。结果表明:在相同降温条件下,五步加甘油进行冷冻的精子,复苏后精子运动度、复苏率和质膜完整率均高于一步加甘油组,顶体完整率高于一步加甘油组或与其相当;降温处理60 min,五步加甘油后进行冷冻的精子,其运动度、质膜完整率显著高于其他组(P0.05),而复苏率比其他组高,但差异不显著(P0.05)。     

不同冷冻程序对萨能奶山羊精液质量的影响

为了探究萨能奶山羊细管冻精最适冷冻程序,本试验设置5个不同的冷冻程序[在5～-10℃温区内,各组降温速率相同（6℃/min）,在-10～-140℃危险温区内设置5个不同梯度的降温速率（25℃/min,35℃/min,40℃/min,55℃/min,65℃/min）]用于程序化冷冻中。试验利用全自动细管精液程控冷冻仪编制冷冻程序,通过casa系统测定精液在不同冷冻程序下精子活力变化,同时利用特异性荧光探针（异硫氰酸镧-花生凝集素,FITC-PNA)检测解冻后精子顶体完整率,用低渗精子肿胀法（HOST)检测解冻后精子质膜完整率。结果表明,冷冻程序C组（5～-10℃,降温速率6℃/min;-10～-140℃,降温速率40℃/min）解冻后精子活力、质膜完整率和顶体完整率最高,分别达到60.75%、38.10%和71.01%,均显著高于其他组（P<0.05）。在危险温区内,降温速率为40℃/min可以较好地保证冷冻萨能奶山羊精子的活力和质膜功能,同时利用程序化冷冻程序C组可显著提高精子的受精能力,C组的降温速率可以提高冷冻萨能奶山羊解冻后精液质量。     

新疆驴细管冻精的制作

试验旨在研究新疆驴细管冻精制作过程中精液冷冻液、降温平衡时间及液氮熏蒸时间对精子冻后活力的影响。研究共设计3个试验。试验1对比了INRA-Freeze、Optidyl、房氏驴精液冷冻保存液、自配马精液冷冻冷冻液等4种精液冷冻液在精子冷冻过程对精子冻后活力的影响,筛选出适合制作新疆驴细管冻精的冷冻液;试验2探索在细管冻精制作过程中平衡90、120、150 min对精子冻后活力的影响;试验3比较在细管冻精制作过程中使用液氮熏蒸5、6、7、8、9、10 min时对精子冻后活力的影响,探索液氮熏蒸的最佳时间。结果显示,使用INRA-Freeze冷冻液或房氏冷冻液在冷冻过程中对精子的损伤最小;冷冻过程中,降温平衡90、120、150 min对精子冻后活力的影响差异不显著（P>0.05）;在冷冻过程中液氮熏蒸7 min时精子冻后活力最高,显著高于熏蒸5、9、10 min的精子冻后活力（P<0.05）,与熏蒸6、8 min时精子冻后活力差异不显著（P>0.05）。研究表明,为降低成本可使用INRA-Freeze冷冻液稀释精液,于冰箱中平衡90～150 min后装入0.5 mL的细管...     

几种因素对鸵鸟冷冻精液精子活力影响的研究

对每组20份精子样品,采取不同冷冻程序,分析了各单因子如:稀释液种类、稀释液中甘油浓度、稀释方法、4℃低温平衡时间、冷冻面与液氮面距离及热平衡时间对鸵鸟冷冻精液的精子解冻复苏活率的影响。结果表明:以含甘油浓度2.8%的(MEM·蛋黄)稀释液,采用两步稀释,低温平衡2.5h,冷冻面与液氮面距离1.5cm进行2min热平衡,鸵鸟精液的冷冻效果较好。     

牛细管精液冷冻温度曲线的研究

牛冷冻精液精子复苏率的高低与原精质量、精子耐冻性、稀释液种类、稀释方法及精液冷冻和解冻速度等因素有关。其中，精液在冷冻过程中温度变化曲线是影响精子复苏率高低的重要因素之一。研究细管精液在不同条件下冷冻，精液温度变化曲线及精子复苏率变化的规律，优选出细管精液最适宜的冷冻温度曲线，可以为提高牛冷冻精液质量提供重要保障。     

液氮蒸汽熏蒸时间对犬精子冷冻效果的影响

本试验研究了0.5 m L细管冷冻保存犬精液过程中液氮熏蒸时间对精子冷冻效果的影响。试验分为5组,将精液细管置于液氮液面上方2 cm处,分别熏蒸0 min(直接投入液氮)、1 min、2 min、4 min、8 min。解冻后通过活率、活力、畸形率及顶体完整率对精子进行评估。结果:液氮蒸汽熏蒸0 min和1 min组精子活率和活力显著低于其它各组(P0.05)。与直接投入液氮相比,在液氮蒸汽中预冷冻超过2 min能够提高精子顶体完整率(P0.05)。本试验表明在使用0.5 m L细管冷冻犬精子时,液氮熏蒸时间在4~8 min较为适宜。     

不同解冻方案对牛冷冻精液质量的影响

解冻是冷冻精子复苏的关键步骤,解冻方案的选择则是冷冻精子复苏的关键点。为筛选出适合目前我国规模化牧场冷冻精液的解冻方案,本研究分别采用6种解冻方案对冷冻精液进行解冻并观察其解冻活率。结果表明,随着解冻温度的升高和解冻时间的缩短,精子活率呈上升趋势,并且当解冻温度达到40℃,解冻时间为20s时,冷冻精子解冻后的活率达到最高。关于6种解冻方案对精液存活时间的影响研究结果表明,当采用38~39℃解冻30s方案时,精子存活6h的活率最好。     

不同冷冻方法对犬细管精液冷冻效果的影响

通过采集6头德国牧羊犬共计24份细管分装精液,分别采用液氮熏蒸法和程序冷冻法进行冷冻,检测解冻后精子的活力、动力学参数、顶体完整率和质膜完整率来比较不同冷冻方法的冷冻效果。结果显示:采用程序冷冻法冷冻后的精子活力(P0.01)、质膜完整率(P0.01)和顶体完整率(P0.05)极显著或显著高于液氮熏蒸法,程序冷冻法解冻后精子动力学参数(平均路径速率、直线速率和曲线速率)高于液氮熏蒸法。结果表明:程序冷冻法优于液氮熏蒸法的冷冻效果。     

冷冻方法对杜泊绵羊冷冻精液品质的影响

试验对绵羊精液分别采用液氮熏蒸冷冻法和冷冻仪冷冻法进行冷冻,通过测定精液解冻后精子活率、顶体完整率、质膜完整率和谷草转氨酶活性及乳酸脱氢酶活性来比较不同的冷冻方法对解冻后精液品质的影响;通过测定精液稀释后、平衡后、冷冻仪法冷冻后的酶活性来比较谷草转氨酶与乳酸脱氢酶在不同阶段的释放量。结果表明,采用冷冻仪法冷冻后的精子活率和质膜完整率极显著高于液氮熏蒸冷冻法（P<0.01）;冷冻仪法冷冻后的谷草转氨酶和乳酸脱氢酶活性极显著低于液氮熏蒸冷冻法（P<0.01）;精液稀释后的谷草转氨酶和乳酸脱氢酶活性极显著低于精液冷冻后的活性（P<0.01）。表明采用冷冻仪冷冻法的绵羊精液品质好于液氮熏蒸冷冻法。精子中谷草转氨酶主要在平衡阶段释放,而乳酸脱氢酶主要在冷冻阶段释放。     

冷冻距离和冷冻保护剂种类对超低温保存新西兰兔精液品质的影响

为了探讨新西兰兔精液超低温冷冻保存的最佳方法,试验采集新西兰成年公兔精液,采用0.25 mL细管冷冻法进行超低温冷冻,以解冻后精液活率、质膜完整性、顶体完整率为指标,研究距离液氮面不同高度和冷冻保护剂种类对冷冻保存兔精液品质的影响。结果表明:冷冻精液距离液氮面3 cm,其精液活率、质膜完整性和顶体完整率明显优于1 cm和5 cm;在冷冻稀释液中添加甘油相对于其他冷冻保护剂对精液品质的保护效果好,甘油浓度为3%时相对其他浓度效果较好。说明了距液氮面3 cm冷冻,冷冻稀释液中添加3%甘油对兔精液的保存效果较好。     

2种稀释液对公猪精液冷冻保存效果的影响

试验为探究2种不同冷冻稀释液对公猪精液稀释冷冻效果的影响。试验采用手握法采集同一头公猪精液,将采集的精液分为2组,进行液氮熏蒸制作细管冻精,分别使用Ⅰ号冷冻稀释液和Ⅱ号冷冻稀释液对猪精液进行冷冻保存,24 h后检测2种冷冻稀释液细管冻精的活力。结果显示,Ⅰ号冷冻稀释液冷冻解冻后的精子活力显著高于Ⅱ号冷冻稀释液(P0.05),同一种稀释液距液氮面5 cm进行熏蒸冷冻的效果较距液氮面4 cm冷冻效果好,但差异不显著(P0.05)。研究表明,利用Ⅰ号冷冻稀释液在距液氮面5 cm处进行液氮熏蒸冷冻可获得较好的公猪冷冻精液。     

种公牛精子耐冻性对比试验

精子耐冻性一般用冷冻精液解冻后精子的复苏率和精子顶体完整率来比较.对于种公牛,冷冻精液解冻后精子的复苏率和顶体完整率越高,其耐冻性越好.为探讨种公牛品种、年龄、个体等因素对耐冻性的影响,进行了试验观察.     

犬精液冷冻解冻技术研究

试验以Tris-果糖稀释液为基础稀释液,研究了甘油浓度(4%、6%和8%)、冷冻起始温度(-80℃和-113℃)、冷冻时精液在液氮面上的高度(2 cm4、cm和6 cm)和解冻方法(30℃、12s和65℃、5 s)对犬精液冷冻保存效果的影响。结果表明,犬的精子冷冻保存以6%的甘油浓度、-80℃的始冻温度、在液氮面上2 cm的高度进行冷冻和65℃5 s的解冻方法为好,冷冻-解冻后精子的活率可达0.450 0±0.044 7。     

黄芩多糖对长白猪精液冷冻保存效果的研究

本研究旨在探讨不同浓度的黄芩多糖添加方案对猪冷冻精液保存效果的影响。猪冷冻处理的精液共6组,分别为空白对照组和添加不同浓度黄芩多糖的试验组（在冷冻稀释液中分别添加0.2、0.4、0.6、0.8、1.0g/L黄芩多糖）,对冷冻-复苏的精液进行精子活力及相关运动参数、精子质膜完整性、顶体完整率等指标检测。结果表明：与空白对照组相比,添加0.4 g/L的黄芩多糖对冷冻-复苏后的精子直线速度、曲线速度、平均路径速度、顶体完整率、DNA完整率和精子抗氧化酶活性均有提高（P<0.05）。0.6 g/L黄芩多糖组精液冷冻复苏后精子的运动参数、顶体完整率及抗氧化酶活性与0.4 g/L黄芩多糖组无显著差异。此外,0.8 g/L黄岑多糖组的质膜完整率及直线性高于其他组（P<0.05）。综上所述,添加不同浓度的黄芩多糖均可提高猪冷冻精液品质,其中提高猪冷冻精液保存质量的最适添加量是0.4 g/L。     

陕北白绒山羊精液冷冻稀释液配方优化

为筛选陕北白绒山羊精液冷冻保存稀释液中最适的甘油及卵黄浓度,试验以三羟甲基氨基甲烷(Tris)6.057 0 g,蔗糖5.134 6 g,果糖1.500 0 g,柠檬酸钠3.318 6 g,青霉素10万IU,双蒸水200 m L配制成基础液,采用双因素正交试验研究不同浓度甘油、卵黄对精液冷冻保存的影响;采用一步稀释法冷冻保存陕北白绒山羊精液,复苏后检测活率、畸形率等确定精液冷冻稀释液最佳配方。结果表明:最佳冷冻稀释液配方为基础液80.5%+甘油6%+卵黄13.5%,精液冷冻、复苏后精子活率达到(37.2±0.5)%,精子畸形率为(11.2±0.5)%,质膜完整率为(64.2±0.5)%,均优于其他组,冷冻效果达到最佳,是保存山羊精液的冷冻稀释液最佳配方。     

不同冷冻保护剂对犬精子冻存的影响

本试验通过对比冷冻保护剂和冷冻程序,优化犬精液冷冻保存方法,比较了不同甘油、乙二醇浓度、不同平衡时间对犬精子冷冻复苏率及精子顶体完整率的影响。结果发现,甘油作为冷冻保护剂时,其对精液冷冻保存后的效果明显优于乙二醇,当甘油浓度为4%时,平均冷冻复苏率最高;冷冻平衡时间为1 h最佳。因此,犬精液在冷冻保存时,甘油浓度为4%,平衡60 min,可获得平均39.21%±0.013%的冷冻复苏率,且比较稳定。     

水牛精液细管冷冻试验

对水牛细管冷冻精液的稀释液、平衡时间、始冻温度、冷冻时间、降温速度、解冻温度和时间以及输精等进行了试验。结果表明,水牛细管冷冻精液解冻后精子活率为0.4～0.6,输精196头的情期受胎牛为63.3％。