寡肽手性膦酸酯硫脲的合成及其抗烟草花叶病毒活性

为了寻找新型具有抗烟草花叶病毒 (TMV) 作用的化合物,在前期研究工作基础上,以取代苄胺、氨基酸及亚膦酸二烷基酯等为原料,按照由C端向N端依次接肽的合成策略,采用缩合剂O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟膦酸酯 (HBTU) 合成酰胺的方法,获得了18个新型寡肽手性膦酸酯硫脲,其结构均经红外光谱、(1H、13C、31P、19F) NMR及元素分析确证和表征,并首次研究了该类化合物抗TMV活性。结果表明:部分目标物对TMV具有较高治疗作用,其中化合物 5i 、 5j 和 5p 在500 μg/mL时对TMV侵染的活体治疗作用效果分别为52.6%、55.7%和56.1%,接近对照药剂宁南霉素 (55.4%)。值得进一步结构改造和构型优化,并在此基础上进行作用机制研究。     

嘧肽霉素抗烟草花叶病毒作用机理初步研究

 以烟草花叶病毒(TMV)/烟草为测试体系,用³H-尿苷和³H-亮氨酸2种同位素示踪的方法研究了4%嘧肽霉素水剂抗TMV的作用机理。通过³H-尿苷示踪实验发现:无论是叶盘法还是整株法测定,嘧肽霉素均能抑制病毒对³H-尿苷的利用,抑制率分别为72.43%和68.95%;而对寄主植物RNA合成,2种方法的抑制率分别为8.09%和11.02%。通过³H-亮氨酸示踪结果可以看出:嘧肽霉素较强地抑制了病毒对³H-亮氨酸的吸收,但能促进寄主对³H-亮氨酸的吸收。³H-尿苷和³H-亮氨酸分别是RNA和蛋白质合成的前体物,因此,嘧肽霉素通过抑制病毒RNA复制和蛋白质的合成来扰乱病毒的增殖,从而减弱病害的发生。     

白色霞水母刺细胞毒素抗烟草花叶病毒活性

为探索从水母毒素中获取抗植物病毒物质的应用前景,采用半叶枯斑法、整株法和漂浮叶圆片法,对白色霞水母Cyanea nozakii Kishinouye刺细胞毒素的抗烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)活性进行了检测。结果表明,白色霞水母刺细胞毒素对TMV具有很强的直接钝化作用,枯斑抑制率随钝化时间的延长而增大。0.99 mg/m L毒素体外钝化TMV 30 min,枯斑抑制率达98.85%,将TMV与0.80 mg/m L毒素体外混合后立即接种,枯斑抑制率仍达89.57%;20~70℃之间,毒素对TMV的钝化作用随温度升高而降低,但又表现出一定的高温耐受性,70℃下处理30min,1.33 mg/m L毒素对枯斑的抑制率为61.73%。毒素对病毒初侵染有一定的预防作用,并可抑制TMV的增殖;1.93 mg/m L毒素处理接种TMV的叶圆片2 d后,对TMV的增殖抑制率为49.41%;但该毒素对TMV所致病害的治疗效果不明显。该毒素还具有较强的蛋白水解酶活性,可能与其抗TMV活性相关。表明白色霞水母刺细胞毒素抗TMV作用明显,其抗植物病毒活性值得深入研究。     

烟草品种对烟草花叶病毒和黄瓜花叶病毒的抗性鉴定

 2010-2011年采用大田人工接种鉴定的方法,对生产中大面积推广使用的24份烟草品种进行了烟草花叶病毒（TMV）和黄瓜花叶病毒（CMV）的抗性鉴定。结果表明,供试品种对TMV和CMV的抗病性存在较大差异,对TMV表现抗病的有Coker86、吉烟5号、Coker176、CV87、辽烟8号、CV91、中烟90等7份材料;表现中抗的有秦烟98、双抗70、C151等3份材料;表现中感的有秦烟96、G80、金星6007、龙江981、K326、秦烟201、NC89等7份材料;表现感病的有G28、云烟97、净叶黄、红花大金元、RG11、云烟85、云烟87等7份材料。对CMV表现抗病的有Coker86、龙江981、C151、秦烟201、云烟87等5份材料;表现中抗的材料是金星6007;表现中感的有CV91、RG11、Coker176、中烟90、K326、红花大金元、净叶黄、G80、G28等9份材料;表现感病的有秦烟98、云烟85、秦烟96、NC89、双抗70、云烟97、CV87、辽烟8号、吉烟5号等9份材料。其中兼抗TMV和CMV两种病毒病的材料有2份,分别是Coker86和C151。同时研究还发现,抗病性不同的烟草品种在受到病毒危害以后,对烟叶的产量和品质的影响也不同。明确了中国24个烟草品种的抗病性水平,为抗病品种的利用与品种合理布局提供科学依据,同时为烟草抗病毒病育种的亲本选择提供抗源信息。     

商陆中三萜皂苷类成分抗烟草花叶病毒活性研究

从垂序商陆中筛选具有抗烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)活性的小分子化合物,为开发高效、低毒和环境友好的天然抗病毒剂提供依据。通过现代化分离、纯化技术,采用活性追踪的方法,对采自于贵州省的垂序商陆中的化学成分进行抗TMV活性逐级筛选,获得了两个抗TM V活性较强的三萜皂苷类化合物—商陆皂苷丁和商陆皂苷H,利用光谱解析手段确定了化合物的结构。生物活性测定结果表明:商陆皂苷丁和商陆皂苷H均具有一定的活体钝化与抑制病毒增殖作用,其中活体钝化及病毒增殖抑制作用均强于对照药物宁南霉素。该研究首次发现垂序商陆中的三萜皂苷类化合物具有抗TMV的活性,为下一步系统研究该种植物提供了科学依据。     

丁香酚对烟草抗烟草花叶病毒的诱导作用初探

为探讨植物源化合物丁香酚对烟草抗烟草花叶病毒(TMV)的诱导作用,初步研究了丁香酚对接种TMV的烟草叶片中叶绿素和丙二醛(MDA)含量,防御酶苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)和超氧化物岐化酶(SOD)活性,以及病程相关蛋白基因 PR-1 、PR-3 、PR-5 表达的影响。结果表明:丁香酚处理可促进叶绿素的合成,减轻烟草体内MDA的积累,提高PAL、POD和SOD的活性,增强 PR-1 、PR-3 、PR-5 基因的表达。表明丁香酚可提高植物的诱导抗病性,进而减轻TMV对烟草的危害。     

磷酸氢二钾诱导烟草抗花叶病毒作用的研究

磷酸氢二钾(K2HPO4)喷雾处理烟草叶片,可诱导烟草获得对烟草花叶病毒(TMV)的抗性。用不同浓度的K2HPO4溶液处理心叶烟Nicotiana glutinosa,以测定其抑制病斑的最佳浓度,并测定烟草N.tabacum品种K326体内防御酶系的变化。结果表明,K2HPO4浓度为40mmol/L,对病斑的抑制效果最好,抑制率达到38.39%。K2HPO4在心叶烟上的防效在诱导处理后7d达到最佳。K2HPO4处理可导致烟草品种K326叶片的苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)活性不同程度的提高,表明K2HPO4可诱导烟草对TMV的抗性,提高烟草的免疫能力。     

壳寡糖诱导烟草抗烟草花叶病毒的超微结构研究

 电镜检查表明,接种烟草花叶病毒(TMV)表现系统侵染的烟草植株叶肉细胞和筛管内有大量病毒粒子和病毒结晶体,细胞质中出现髓鞘样结构、多泡体和次级囊泡。叶片薄壁细胞内叶绿体、线粒体等细胞器变形解体,膜结构增生。经壳寡糖(50 μg/mL)诱导处理的烟草,系统症状减轻,叶肉细胞和筛管中病毒粒子显著减少,偶见病毒结晶体;叶肉细胞中细胞器基本完好,但叶绿体内出现较大的淀粉粒;液泡内和细胞间隙出现大量电子致密物质。在未接毒和未经壳寡糖处理的植株中未见此种电子致密物,其产生可能与诱导抗病性表达有关。     

烟草花叶病毒丁香分离物的分离与鉴定

 从表现花叶症状的丁香病株上获得一病毒分离物,其在电镜下为约300 nm×18nm的杆状粒子;电泳分析表明感病组织中ds RNA大约为6.4kbp,而其外壳蛋白分子量约为17.6k Da。以上实验结果初步将该病毒分离物鉴定为烟草花叶病毒属(Tobamovirus)。根据该属病毒复制酶基因序列设计通用引物,进行RT-PCR检测,扩增出约1000 bp的预期特异片段(Gen Bank AY566703)。将PCR产物克隆后测序,序列分析表明,与从蚕豆中分离的TMV-B株系序列(Gen Bank AJ011933.1)同源性为99.90%。根据烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的RNA CP基因序列设计引物,进行RT-PCR,扩增出约800 bp的预期特异片段(Gen Bank AY56672),序列分析表明,与TMV-B株系序列(Gen Bank AJ011933.1)同源性达99%,上述实验结果表明,该病毒分离物为TMV。由于该分离物与TMV-B在指示植物上的症状存在明显差异,所以,作者把该分离物暂命名为TMV-S。     

侵染扶桑的烟草花叶病毒分离物鉴定

从表现叶斑驳症状的扶桑病株上获得一病毒分离物,电镜下可见约300 nm×18 nm的杆状粒子,其与烟草花叶病毒抗血清呈明显的阳性反应,dsRNA约为6.4 kbp。根据烟草花叶病毒(tobacco.mosaic virus,TMV)的RNA序列设计引物,进行RT-PCR检测,扩增出约800 bp的预期特异片段。将PCR产物连接pMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α,得到了含有目的片段的重组子。序列分析表明,与周雪平等报道的序列(GenBank AJ011933.1)同源性达99％。通过生物学、病毒粒子观察、血清学以及分子生物学实验结果,确定该病毒分离物为TMV。     

抗TMV生防菌YNLP-2的筛选与鉴定

采用局部枯斑法从云南罗平植烟区烟草根际土壤中筛选了一株对烟草普通花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)具有显著拮抗活性,且具有Amp筛选抗性的细菌菌株YNLP-2.通过菌体形态鉴定、16S rDNA序列比对和生理生化测定表明该菌株为蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus).菌株浓度在5.6×108 cfu/mL时,对TMV抑制效率高达99％以上.透射电镜观察显示B.cereus YNLP-2菌株对TMV病毒粒体的破坏作用表现为该菌株可将TMV典型的杆状病毒粒体破坏成小片段.SDS-PAGE电泳发现该菌株对TMV病毒外壳蛋白无破坏作用.田间抗病毒小区试验显示该菌株对病毒病综合防治效果达到45.65％,与宁南霉素效果相当.     

抗病毒剂对烟草花叶病毒与烟草叶绿体互作的影响

通过测试被烟草花叶病毒（ＴＭＶ）侵染的烟叶片叶绿素含量与荧光光谱特征的变化,发现叶绿素含量随ＴＭＶ侵染时间的延长而降低,Ｆ６８５／Ｆ７４０比值随ＴＭＶ侵染时间的延长而增加。用叶绿素含量、荧光光谱特征可作为筛选抗植物病毒剂的指标。实验结果表明：８种植物抽提物中,紫草、月季抽提物抑制ＴＭＶ与叶绿体的结合活性高。     

臭椿病毒病病原鉴定

臭椿(Ailanthus altissima)属苦木科(Sima-roubaceae)落叶乔木,为我国常用中草药;以根皮入药,具有消炎、杀菌、杀虫、抗肿瘤及抗病毒等作用;亦可用在建筑、能源、环保和造纸等方面,具有广阔的开发和应用前景。已有研究表明,引起臭椿花叶症状的病毒病原主要     

感染烟草花叶病毒(TMV)的烟叶在显症前的荧光光谱变化

通过测试ＴＭＶ侵染叶片的叶绿素含量与荧光光谱特征的动态变化，分析影响荧光光谱的因素，在以４８０ｎｍ作为激发波长时，叶片６８５ｎｍ与７４０ｎｍ荧光强度之比（Ｆ６８５／Ｆ７４０）随着病毒侵染时间的延长而增加，叶绿素含量则随着病毒侵染时间的延长而降低，因此提出可用Ｆ６８５／Ｆ７４０与叶绿素含量之比作为ＴＭＶ早期诊断的指标。     

Antiphytoviral activity of bruceine-D from Brucea javanica seeds

BACKGROUND: Brucea javanica (L.) Merr. is widely distributed throughout the southern parts of China and has been used in traditional medicine to treat a variety of diseases. The objective of the present study was to identify the active antiphytoviral compound in the seeds of B. javanica and evaluate the inhibitory activity of the compound against plant virus. RESULTS: Bioassay-guided fractionation of the most active extract from the seeds led to the isolation of an antiphytoviral compound which was identified as bruceine-D by conventional spectroscopy methods. The compound exhibited significant inhibitory activity against the infection and replication of tobacco mosaic virus (TMV), with IC(50) values of 13.98 and 7.13 mg L(-1) respectively. The compound also showed a strong inhibitory effect on the infectivity of potato virus Y (PVY) and cucumber mosaic virus (CMV). Furthermore, the compound could effectively inhibit systemic TMV infection in the host tobacco plant under glasshouse conditions.CONCLUSION: The results suggested that bruceine-D from Brucea javanica may have the potential to be used as a natural viricide, or a lead compound for new viricides.     

烤烟‘K326’抗TMV防御物质初探

烤烟主栽品种‘K326’在打顶后,随着次生代谢产物的积累,烟草花叶病症状呈减轻趋势。本试验利用半叶枯斑法对‘K326’的全株、根、茎、叶甲醇提取物及根部不同极性溶剂萃取物进行抗烟草普通花叶病毒活性筛选,结果表明:在浓度为1mg/mL时,‘K326’各部位甲醇提取物中,根部甲醇提取物的活性最强,对TMV体外钝化、初侵染和复制增殖作用的抑制率分别为74.50%、68.82%和47.76%;利用不同极性溶剂对根部甲醇提取物萃取处理后,乙酸乙酯萃取物活性增强明显,对TMV体外钝化、初侵染和复制增殖作用的抑制率分别为76.81%、78.02%、61.42%;经普通烟‘K326’进一步验证,根部甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物活性最强。综上,‘K326’中抗病毒防御物质可能存在于根部甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物中。     

臭椿球针壳后熟过程中的形态学观察

对采自甘肃、北京和成都的臭椿白粉病标样进行了病原菌形态观察比较,结果显示,三个地区采集的标样为同一病原,均为子囊菌亚门、球针壳属真菌———臭椿球针壳。生物学研究表明,成熟的闭囊壳直径为180~225μm;附属丝的数量一般为3~14根,长度4.5~22.5μm,为闭囊壳直径的0.1。成熟的闭囊壳内含有子囊6~35个,多为15~30个。子囊的大小为(45.1~101.3μm)×(22.5~45.2μm)。成熟的子囊孢子多为2个,少见有3个。子囊孢子的大小为(18.5~45.3μm)×(11.25~22.5μm)。温度是影响球针壳后熟的关键因素。4℃条件下,球针壳的成熟速度明显快于室温条件。