RNA干涉研究进展

生物体内导入双链RNA后会引起体内同源基因特异性的沉默,这种现象被称为RNA干涉(RNAi).本文对RNA干涉的研究历史、作用机理和实践应用等方面的研究进展进行了综述与讨论.     

RNAi技术的研究进展和发展前景

生物体内导入双链RNA后会引起体内同源基因特异性的沉默,这种现象称为RNA干涉。文章主要介绍RNAi的特征、作用机制及应用等方面的情况。     

Dc-Chol/DOPE介导siRNA对HeLa细胞的高效转染

如何把小干涉RNA有效地递送到体内特异的靶细胞是RNA干涉技术发展中的主要障碍。阳离子脂质体DC-Chol／DOPE已经成功地用于DNA药物的体内递送。研究表明DC-Chol／DOPE介导siRNA对HeLa细胞的转染与商品化的转染试剂Lipofectamine 2000一样高效，而对细胞的毒性则要小得多。     

Dc-Chol/DOPE介导siRNA对HeLa细胞的高效转染

如何把小干涉RNA有效地递送到体内特异的靶细胞是RNA干涉技术发展中的主要障碍.阳离子脂质体DC-Chol/DOPE已经成功地用于DNA药物的体内递送.研究表明DC-Chol/DOPE介导siRNA对HeLa细胞的转染与商品化的转染试剂Lipofectamine 2000一样高效,而对细胞的毒性则要小得多.     

RNA干涉原理及其应用

RNA干涉是指外源dsRNA引发生物体内的基因的同源序列降解，从而表现出的基因转录后的沉默现象，它与植物中的共抑制和真菌中的基因压制可能具有相同的作用机制。在这一过程中，需要eIF2c类似蛋白因子、RNA螺旋酶、RNA依赖性RNA多聚酶、核糖核酸酶、ATP和转膜蛋白参与。RNA干涉可以用于功能基因组学研究，也可用于克服转基因生物的基因沉默现象，使外源基因在遗传改良生物中能更好地表达，还用于基因治疗，抑制有害基因的表达等。     

RNA干涉机制研究进展

RNA干涉(RNA interference,RNA i)是由双链RNA(doub le stranded RNA,dsRNA)引起的序列特异性基因沉默,主要是通过siRNA(sm all interfering RNA)介导的靶mRNA降解,调节和关闭基因的表达。本文综述了RNA i的作用机制,主要包括siRNA介导的靶mRNA特异降解机制和干涉信号的扩增与传递机制。     

麦长管蚜重要基因的RNA干扰

选用12个蚜虫生长发育的关键基因,利用喂食的方法将其双链RNA(dsRNA)引入麦长管蚜体内,以死亡率为评价指标,对基因RNA干扰(RNAi)沉默效应进行分析。结果表明,水通道蛋白基因(Wsa)、ATP合酶基因(v Ad1-78)的RNA干涉能够显著提高蚜虫死亡率,而葡萄糖脱氢酶编码基因(Gl D-17)的RNA干涉则使蚜虫死亡率明显降低。基因表达荧光定量PCR分析结果显示,喂食dsRNA后5 d内,水通道蛋白基因(Wsa)和ATP合酶基因(v Ad1-78)表达水平分别下降了74.8%和44.6%;而葡萄糖脱氢酶编码基因(Gl D-17)表达水平则上调了209.0%,基因表达水平变化规律与蚜虫死亡率变化趋势一致。在所有供试基因中,水通道蛋白基因(Wsa)的RNA干涉沉默效应效果最突出,导致蚜虫死亡率提高到37.5%,基因表达量下调74.8%,可以作为利用RNAi技术培育抗蚜虫小麦新品种有效的靶基因。     

水稻osvdac基因RNAi表达载体的构建及遗传转化

[目的]构建水稻osvdac3和osvdac5基因RNA干涉表达载体,获得转干涉载体的转基因水稻植株。[方法]采用TRIzol法提取水稻幼苗总RNA,以反转录的cDNA为模板,扩增得到osvdac3和osvdac5的分别靠近5’端和3’端约500～600bp的特异序列,用Gateway重组克隆技术构建RNA干涉表达载体,采用农杆菌介导的愈伤组织侵染法进行遗传转化。[结果]成功构建水稻2个osvdac3和2个os-vdac5基因RNA干涉表达载体,并获得转osvdac3干涉载体的阳性植株。[结论]干涉osvdac3和osvdac5的植株为研究其功能提供材料。     

RNA干涉与基因功能研究进展

RNA干涉是通过双链RNA的介导，在基因的转录后水平上，特异性抑制具有相应序列的基因表达，即通过双链RNA的介导特异性降解相应序列的mRNA，从而导致转录后水平的基因沉默。迄今，在真菌、植物、动物等真核生物中都发现存在这一基因沉默机制。RNA干涉对于抵抗病毒入侵、抑制转座子活动、生物体的发育和基因表达调控都有重要作用；它也为基因功能的研究开辟了一条新途径。文章综述了RNA干涉的机制及其在基因功能研究方面的最新进展。     

dsRNA引发的基因沉默

双链RNA(double-stranded RNA，dsRNA)导入细胞后引起细胞内特定的信使核糖核酸(messenger RNA，mRNAs)降解，从而导致基因沉默，并使生物体产生相应的功能缺陷型，这种由dsRNA介导的基因沉默称为RNA干涉(RNAi)，RNAi普遍存在于植物、动物、真菌中，它的发现改变了人们对细胞如何保护其基因组的理解，并发展了研究基因功能的新战略．对RNAi的发现历史、作用特点、作用机制以及应用前景进行了简述．     

秀丽线虫缺氧相关剪接调节因子的筛查

【目的】基于RNA干涉文库,寻找与秀丽线虫缺氧损伤表型相关的剪接调节因子。【方法】利用喂饲RNA干涉(RNA interference,RNAi)文库筛选技术,对秀丽线虫基因组中的351个RNA结合蛋白(RNA bindingprotein,RBP)基因进行筛选。【结果】经过2次筛选共得到5个与缺氧相关的RBP编码基因,其中剪接因子1个,参与mRNA翻译过程的基因4个。【结论】剪接调节因子可能在mRNA的剪接和翻译水平上参与低氧应答。     

RNA干涉技术及其应用

RNA干涉(RNA interference,RNA1)是由双链RNA导入而引起的转录后基因沉默,它可以作为一种有力的工具在多种有机体中抑制特异性基因的表达。文章简要介绍了RNA干涉的发现史、作用机制、特点及该项技术的用途。RNA1的作用机制可以分为起始阶段和效应阶段。双链RNA被Dicer消化成siRNAs(small interfermg RNAs),进一步形成RNA诱导沉默复合物(RNA-mduced silencmg complex,or RISC),在siRNAs的引导下切割靶mRNA。RNAi技术在疾病的基因治疗、功能基因组学及细胞信号通路分析等力面具有广阔的应用前景。     

RNA干涉技术及其在水产科学中的应用

介绍了RNA干涉的作用机制和特点,从抑制水生动物病毒、研究水生动物基因功能等方面综述了RNA干涉技术近年在水产科学领域中的应用。     

RNA干扰在植物寄生线虫上的运用

综述RNA干扰作为一种有效的研究植物寄生线虫功能基因组的反向遗传学技术及其相关特征,以为通过植物介导的RNA干涉成功运用于研究及植物抗线虫育种提供新策略。     

RNA干涉作用机制及应用前景展望

从RNA干涉(RNA interference,RNAi)的起始阶段、效应阶段、扩增阶段3个方面对其机制原理作了阐述,并对其应用前景进行了展望,同时提出了存在的问题。     

双价RNA干扰载体的构建及dsRNA体外饲喂褐飞虱的研究

RNA干涉作为一种重要基因沉默技术,已广泛用于昆虫基因功能的研究。通过人工饲喂或显微注射dsRNA介导RNAi在许多昆虫中取得了成功。为利用RNAi技术进行褐飞虱防治研究,本试验通过重组PCR,获得了编码V-ATPase D亚基和编码V-ATPase H亚基基因片段的融合基因,在此基础上构建了该融合基因发夹结构的RNAi表达载体,通过体外合成dsRNA喂食褐飞虱若虫后导致褐飞虱体内目标基因的表达下降和死亡率的增加。因此双价RNAi载体的构建为利用RNA沉默技术进行植物抗飞虱研究奠定了基础。     

反义寡核苷酸干涉家蚕非编码RNA的研究

[目的]研究反义寡核苷酸干涉家蚕非编码RNA表达的情况。[方法]构建Bm-15的反义寡核苷酸探针,通过脂质体转染昆虫Sf9细胞干涉Bm-15的表达。[结果]转染后细胞中Bm-15的表达量下降了63%,差异达显著水平,表明反义寡核苷酸探针对Bm-15基因表达有较好的抑制作用。[结论]该研究为进一步研究非编码RNA的功能奠定了良好的基础。     

寄主诱导的基因沉默在改良作物抗病虫性方面的应用

根据RNA干扰(RNA interference,RNAi)原理,在生物体内表达双链RNA(ds RNA)可以高效沉默生物体内基因的表达。在寄主中形成病原真菌和昆虫特异基因的小RNA会进入其体内从而产生寄主诱导的基因沉默(Host-induced gene silencing,HIGS)。病虫害对全球粮食安全构成极大的威胁,利用HIGS技术为提高农作物抗病虫性提供了有效的途径。综述了HIGS技术在提高农作物抗病虫性中的应用,总结了沉默信号在寄主与病虫间的可能的传递方式以及提出该技术存在的优缺点。     

RNAi技术在植物功能基因组学中的研究进展

文章主要综述了RNA干涉(RNAi)技术在植物功能基因组学中的研究策略及研究现状,包括RNA干涉的作用机制及技术特征,引发植物RNAi机制的转基因RNAi技术以及病毒介导的基因沉默技术。转基因RNAi技术方面,包括载体结构的优化策略、高通量载体的构建方法以及该技术的优缺点。病毒介导的基因沉默技术方面包括病毒载体及宿主种类,病毒感染方法,试验对照的建立、环境因素的影响以及该技术的优缺点。     

核内小RNA的研究进展

针对目前分子生物学研究比较热的核内小RNA进行了综述,分别介绍了核内小RNA的发现、主要特征、作用机制、真核生物原核生物和病毒体内的核内小RNA和对核内小RNA的研究技术进行展望。