DAPK在胃粘膜肠上皮化生和胃癌组织中的异常表达及意义

目的:检测胃粘膜肠上皮化生组织与胃癌组织中死亡相关蛋白激酶(DAP-Kinase,DAPK)的异常表达,探讨DAPK与细胞凋亡的关系及其在胃癌发生发展过程中的作用。方法:用原位杂交法检测DAPK1 mRNA在30例胃黏膜肠上皮化生、50例胃癌组织中的表达水平。结果:在肠上皮化生组织、胃癌组织中DAPK1的阳性表达率分别为100%、28%,差异具有极显著性(P<0.001);DAPK1在高分化癌的阳性表达率为占55.6%,而在低分化癌为12.5%,差异具有显著性(P<0.05)。结论:DAPK作为一种促细胞凋亡的正性调节因子,其表达低下或缺失与胃癌的发生发展密切相关;检测DAPK1蛋白可以作为判断胃癌细胞的分化程度及肿瘤类型的新的生物分子学指标;为临床诊断、治疗提供新的靶点。     

p16、p53基因蛋白在胃粘膜肠上皮化生与胃癌组织中的异常表达

目的:探讨抑癌基因与胃癌发生的关系及其在胃癌早期诊断中的价值.方法:采用免疫组化s p法,检测p16、p53突变蛋白在不同类型的肠上皮化生和不同组织类型的胃癌组织中异常表达.结果:p16、p53突变蛋白在不同类型的肠上皮化生和胃癌组织中的表达差异显著.结论:p16、p53蛋白突变与肿瘤细胞的增殖、分化有密切关系,可作为胃癌早期诊断的细胞生物学标志.     

胃癌SOCS-1基因异常甲基化及其意义

目的：探讨SOCS-1基因在胃癌和癌旁组织中的表达及其启动子甲基化状态与胃癌发生、发展和转移等的关系。方法：采集45例胃癌病人的肿瘤标本、18例癌旁胃粘膜组织以及10例正常胃粘膜组织,运用甲基化特异性PCR反应研究胃癌组织中SOCS-1基因CpG岛甲基化状态,同时运用实时定量PCR分析SOCS-1基因的表达。结果：45例胃癌标本中有21例（46．7％）SOCS-1基因呈CpG岛甲基化,癌旁组织中为2例（11．1％）,而10例正常胃粘膜组织中则未发现SOCS-1基因CpG岛甲基化;SOCS-1基因CpG岛甲基化组的SOCS-1基因表达量与无SOCS-1基因CpG岛甲基化组相比,其基因相对表达量明显减少（P〈0．05）,表明SOCS-1基因CpG岛甲基化可抑制SOCS-1基因表达。与病人临床病理特征相结合比较,发现SOCS-1基因CpG岛甲基化与年龄、性别无关,与肿瘤分化程度及TNM分期等因素有关。结论：在胃癌中存在SOCS-1基因CpG岛甲基化,且由于CpG岛甲基化而促使基因表达抑制。SOCS-1基因CpG岛甲基化在胃癌的发生、发展中可能具有一定的意义。     

P^73蛋白在胃癌及癌旁正常组织中的异常表达

目的：检测胃癌及癌旁正常组织中P^73。蛋自的表达,探讨P^73蛋白的表达在胃癌发生发展中的作用。方法：应用免疫组织化学S-P法检测50例胃癌组织中P^73。蛋白表达并与30例癌旁正常组织中P^73。蛋白的表达进行比较。结果：癌旁正常组织中P^73。蛋白表达率为21％;高分化胃癌与低分化胃癌组织中P^73。蛋白的表达率分别为55．5％、68．8％,呈递增性高表达。经统计学分析得出癌旁正常组织与胃癌组织P^73。阳性表达率有显著性差异（P〈0．01）。结论：P^73。蛋白异常表达在胃癌的发生、发展过程中起重要作用。并可作为胃癌早期诊断,判断预后的新的分子生物学指标。     

胸苷激酶1在胃癌诊断及预后评估中的意义

目的 了解胸苷激酶1(TK1)在诊断胃癌及评估患者预后的意义.方法 对60例胃癌患者(胃癌组)以及胃溃疡(胃溃疡组)、萎缩性胃炎(萎缩性胃炎组)、胃息肉(胃息肉组)各20例患者的血清TK1水平进行检测,分析血清TK1对胃癌的诊断效能;检测胃癌组织及良性胃病变组织中TK1阳性表达情况,分析胃癌患者临床特征与胃癌组织内TK...     

内皮素-1及其受体基因在前列腺癌组织中的表达及意义

目的 :探讨内皮素 1 (ET 1 )及其受体A、B(ETAR、ETBR)在前列腺癌 (Pca)组织中的表达及临床意义。方法 :应用免疫组化和RT PCR方法检测Pca组织ET 1、ETAR及ETBRmRNA的表达 ,并同正常前列腺组织 (NP)比较。结果 :ET 1、ETARmRNA在Pca组织中的吸光度分别为 (1 .84± 0 .1 2 )与 (2 .4 1± 0 .1 6 ) ;与NP组织中的吸光度 [分别是 (0 .6 1± 0 .0 7) ,(0 .36± 0 .0 6 ]相比差异有显著性 (P <0 .0 1 ) ,而ETBRmRNA在Pca与NP组织中的表达差异无显著性 [吸光度分别为(0 .4 5± 0 .0 5 )与 (0 .5 5 2± 0 .0 7) ],P >0 .0 5。结论 :ET 1及ETAR在前列腺癌的发病过程中起一定作用     

Syk和VEGF在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的观察脾酪氨酸激酶（Syk）和血管内皮生长因子（VEGF）在胃癌组织中的表达情况,分析它们与胃癌病理临床特征之间的关系。方法应用免疫组化法检测100例胃癌患者手术切除的癌组织和癌周正常组织中Syk和VEGF表达水平。结果Syk在正常胃组织中表达率为100．0％（100／100）,在胃癌组织中的表达率为40．0％（40／100）;VEGF在正常胃组织中表达率为0．0％（0／100）,在胃癌组织中的表达率为50．0％（50／100）,两者比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。Syk蛋白表达水平与胃癌浆膜浸润、肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移有关（P〈0．05）,VEGF蛋白表达水平与胃癌浆膜浸润、TNM分期、淋巴结转移有关（P〈0．05）。结论同时检测胃癌组织中Syk与VEGF表达水平,对判断胃癌浸润转移潜能及评估患者预后有一定的参考价值。     

Hsa＿circ＿0003449在人胃癌中表达及对胃癌细胞增殖和迁移作用

环状RNA是一种特殊的非编码RNA,在肿瘤发生发展中起着重要作用。通过高通量测序技术对5对确认为癌组织及癌旁正常组织进行检测,分析筛选出差异性环状RNA hsa＿circ＿0003449,通过qRT-PCR进行验证后,使用siRNA进行基因敲减,利用细胞克隆试验、平板划痕试验及transwell试验等检测胃癌细胞功能的改变,通过生物信息网站预测基因靶点TP73蛋白,敲减hsa＿circ＿0003449后检测蛋白质水平上的改变。结果表明：在人胃癌组织中,hsa＿circ＿0003449表达水平明显高于癌旁正常组织;在胃癌患者血清中,hsa＿circ＿0003449表达水平也高于健康体检者血清中表达水平;在胃癌细胞株(SGC-7901、BGC-823、HGC-27、MGC-803)中,hsa＿circ＿0003449表达水平均高于正常人胃黏膜上皮细胞株(GES-1)。在人胃癌细胞株中通过siRNA对hsa＿circ＿0003449的敲减引起肿瘤增殖及迁移能力下降。同时胃癌细胞株中hsa＿circ＿0003449的敲减会引起靶点TP73蛋白的表达水平下降。这一研究成功验证了hsa＿circ＿...     

SIRT1在5-FU耐药胃癌细胞中的表达及其对细胞化疗耐药的影响

目的探讨沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)在5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)耐药胃癌细胞(SGC-7901/5-FU)中的表达情况及其对细胞化疗耐药的影响。方法通过定量RT-PCR和Western blot方法检测SIRT1 mRNA与蛋白在5-FU敏感的SGC-7901亲本细胞、SGC-7901/5-FU细胞及在SIRT1-siRNA转染后的SGC-7901/5-FU细胞中的表达;选择高干扰效率的SIRT1-siRNA转染SGC-7901/5-FU细胞,CCK8法检测5-FU对转染细胞的活性影响,流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响,Western blot法检测其对细胞p-Akt、Bax、Bcl-2和P-pg表达的影响。结果 SGC-7901/5-FU细胞中的SIRT1 mRNA与蛋白表达水平均显著高于SGC-7901亲本细胞(P0.001);SIRT1-siRNA转染SGC-7901/5-FU细胞后,SIRT1的mRNA与蛋白表达均显著降低(P0.001);5-FU作用后,SIRT1-siRNA转染组的SGC-7901/5-FU细胞增殖活性明显下降(P0.001),细胞凋亡明显增加(P0.001),且细胞中的p-Akt、Bcl-2和P-pg含量明显下降(P0.001),Bax含量明显上升(P0.001)。结论 SIRT1在5-FU耐药胃癌细胞中高表达,干扰SIRT1表达后可通过抑制细胞增殖与促进细胞凋亡来提高耐药胃癌细胞对5-FU的敏感性,这可能与细胞增殖通路相关蛋白、凋亡以及细胞多药耐药性相关蛋白变化相关。提示抑制SIRT1可作为降低胃癌多药耐药性及提高胃癌对化疗药物敏感性研究的一个新思路。     

TNFAIP3和TNIP1基因在寻常型银屑病中的表达及意义

目的检测轻度和中重度寻常型银屑病患者的皮肤中肿瘤坏死因子-α诱导蛋白质3（TNFAIP3）和TNFAIP3相互作用蛋白质1（TNIP1）mRNA表达。方法采用实时荧光定量PCR来检测20例寻常银屑病患者皮损和正常皮肤中TNFAIP3和TNIP1 mRNA表达。结果与正常皮肤相比,10例轻度银屑病患者皮损中出现TNFAIP3基因表达下调和TNIP1基因表达上调（P〈0.05）。10例中重度银屑病患者的正常皮肤和皮损中,TNFAIP3和TNIP1 mRNA表达差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 TNFAIP3和TNIP1 mRNA表达异常可能在寻常性银屑病的早期发挥作用。     

ICAM-1在妊娠早期和流产大鼠子宫中的表达和意义

采用免疫组织化学SP法检测了妊娠早期和流产大鼠子宫中ICAM-1的分布与表达。发现ICAM-1在各组大鼠子宫腔上皮、腺上皮、子宫基质或蜕膜、子宫肌层及部分血管内皮上均有表达。妊娠早期大鼠子宫基质、肌层和蜕膜细胞中ICAM-1的表达比发情期增加,且植入期和植入后期增加极显著（P〈0．01）,植入期较植入前期在以上部位中增加极显著（P〈0．01）,达到最高峰;植入后期肌层中ICAM-1的表达较植入期显著降低（P〈0．01）。流产大鼠蜕膜中ICAM-1的表达显著降低（P〈0．01）,但子宫含胎儿部分蜕膜上皮细胞中ICAM-1的表达较强。结果表明ICAM-1主要在植入期发挥作用,其在妊娠早期的异常表达可能与流产有关。     

猪FABP1和FABP2基因的分子特征及组织表达分析

【目的】明确脂肪酸结合蛋白(FABPs)对香苏杂交猪脂肪沉积的影响,为后续进一步探究猪脂肪细胞内FABP1和FABP2基因对脂肪酸代谢的调控作用打下基础。【方法】采集香苏杂交猪和柯乐猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大肠、小肠、背最长肌及脂肪等组织样品提取总RNA,利用PCR克隆香苏杂交猪FABP1和FABP2基因编码区(CDS)序列,通过ProtParam、ProtScale、SOPMA、SWISS-MODEL、PSORT Ⅱ Preadict及SignalP-5.0等在线软件进行生物信息学分析,并采用实时荧光定量PCR检测FABP1和FABP2基因在香苏杂交猪和柯乐猪各组织中的表达情况。【结果】香苏杂交猪FABP1和FABP2基因CDS序列分别为384和399 bp,分别编码127和132个氨基酸残基,对应的编码蛋白相对分子量为14107.23和15217.34 Da,均为亲水性蛋白;其二、三级结构均以β-折叠和无规则卷曲为主,无信号肽剪切位点,主要定位于细胞质。香苏杂交猪FABP1和FABP2氨基酸序列表现为与人类、牛、山羊的FABP1和FABP2氨基酸序列高度同源,对应的相似性均在80.0%以上,除斑马鱼外,与其他参考物种的相似性也在74.0%以上,故推测FABP1和FABP2基因序列的保守性较高;STRING预测结果显示,与这2个蛋白可能互作的蛋白有FABP5、FABP7、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、猪载脂蛋白A4(APOA4)、APOA1及脂酰辅酶A氧化酶1(ACOX1)等。FABP1和FABP2基因在香苏杂交猪和柯乐猪的各组织中均有表达,且以在肝脏、小肠和脂肪中的相对表达量较高,而背最长肌中的相对表达量最低;此外,FABP1和FABP2基因在香苏杂交猪肝脏和小肠中的相对表达量极显著高于其在柯乐猪对应组织中的相对表达量(P<0.01)。【结论】FABP1和FABP2基因在猪的各组织中均有表达,且以在甘油三酯和脂肪酸合成代谢的相关组织(肝脏、小肠和脂肪)中特异性高表达,可能对脂肪的合成代谢起重要调控作用。     

尼罗罗非鱼Dmrt1基因克隆及在不同组织中的表达

Dmrt1基因是Dmrt基因家族的一个重要成员,在动物性别决定过程中发挥重要作用。参照小鼠Dmrt1基因DM保守区及有关文献,设计了1对简并引物．扩增了尼罗罗非鱼的Dmrt1基因．并对扩增产物进行了亚克隆与测序。结果在雌雄尼罗罗非鱼个体中各获得1个预期的基因片段．长度为140bp．序列无性别差异。序列同源性分析表明,尼罗罗非鱼Dmrt1基因DM盒区核苷酸序列与人和鼠相应基因的同源性为78％：编码的氨基酸序列与人和鼠相应基因编码序列的同源性为89％．充分显示了Dmrt1基因在进化上的高度保守性。进一步根据获得的Dmrt1序列,设计1对特异引物,采用RT—PCR技术对尼罗罗非鱼不同组织Dmrt1基因的表达进行了研究。结果发现,Dmrt1只在精巢中特异表达,在卵巢、眼、肠、鳃及心脏组织中无表达,提示该基因在性别分化和功能维持上可能具有重要作用。     

仿刺参β-actin基因的克隆及在各组织中的表达

参考海葵Nematostella vectensis在GenBank中的β-actin基因mRNA部分序列(XM_001630533)设计引物,对仿刺参Apostichopus japonicus进行特异的PCR扩增,将扩增产物测序分析,再根据测序结果设计仿刺参专用β-actin引物ACT1/ACT2,对不同退火温度和循环次数条件下的该基因RT—PCR产物进行了对比。本研究中首次克隆了仿刺参的β-actin基因,为今后仿刺参目的基因表达的半定量分析研究奠定了基础。     

仿刺参β-actin基因的克隆及在各组织中的表达

参考海葵Nematoste Uavectensis在GenBank中的β-actin基因mRNA部分序列（XM_001630533）设计引物,对仿刺参Apostichopusjaponicus进行特异的PCR扩增,将扩增产物测序分析,再根据测序结果设计仿刺参专用β-actin引物ACT1／ACT2,对不同退火温度和循环次数条件下的该基因RT-PCR产物进行了对比。本研究中首次克隆了仿刺参的β-actin基因,为今后仿刺参目的基因表达的半定量分析研究奠定了基础。     

尼罗罗非鱼Dmrt1基冈克隆及在不同组织中的表达

Dmrt1基因是Dmrt基因家族的一个重要成员,在动物性别决定过程中发挥重要作用.参照小鼠Dmrt1基因DM保守区及有关文献,设计了1对简并引物,扩增了尼罗罗非鱼的Dmrt1基因,并对扩增产物进行了亚克隆与测序.结果在雌雄尼罗罗非鱼个体中各获得1个预期的基因片段.长度为140bp.序列无性别差异.序列同源性分析表明,尼罗罗非鱼Dmrt1基因DM盒区核苷酸序列与人和鼠相应基因的同源性为78%;编码的氨基酸序列与人和鼠相应基因编码序列的同源性为89%,充分显示了Dmrt1基因在进化上的高度保守性.进一步根据获得的Dmrt1序列,设计1对特异引物,采用RT-PCR技术对尼罗罗非鱼不同组织Dmrt1基因的表达进行了研究.结果发现,Dmrt1只在精巢中特异表达.在卵巢、眼、肠、鳃及心脏组织中无表达,提示该基因在性别分化和功能维持上可能具有重要作用.     

美仁牦牛Akirin1基因克隆及在不同组织中的表达

【目的】Akirin1基因是调控成肌细胞分化的关键基因,克隆美仁牦牛Akirin1基因编码区（CDS）序列进行生物信息学分析,并检测该基因在各组织间的表达特征,为研究调控牦牛肌肉生长的基因功能提供理论依据。【方法】利用RT-PCR技术克隆美仁牦牛Akirin1基因CDS区序列,通过生物信息学软件分析蛋白理化性质和结构,预测蛋白信号肽和磷酸化位点及构建系统进化树;通过qPCR技术检测Akirin1基因在美仁牦牛成年牛各组织间及胎牛肌肉中mRNA的表达水平。【结果】美仁牦牛Akirin1基因CDS区全长579 bp,编192个氨基酸,蛋白相对分子质量为21 879.86 u,理论等电点8.91,总平均亲水性-0.822,为亲水性蛋白;系统进化树表明：美仁牦牛与普通牛和印度水牛亲缘关系最近,同源性分别为100%、98.44%;Akirin1蛋白有29处磷酸化位点,无信号肽和跨膜区,主要在细胞核中发挥生物学功能;美仁牦牛Akirin1蛋白主要是由α-螺旋和无规则卷曲组成。Akirin1基因在美仁牦牛脂肪组织中表达量最高,与其他组织比较差异显著（P<0.05）,且肌肉和心脏组织中的表达量最...     

MDM2和p53在大肠癌组织中的表达及其意义

目的：探讨抑癌基因mdm2、p53在大肠癌组织中表达情况及与临床病理之间的关系。方法：采用免疫组化SABC法检测大肠癌79例,大肠腺瘤样息肉34例,正常大肠粘膜组织15例中MDM2、p53的表达。结果：MDM2在正常大肠组织、大肠腺瘤、大肠癌中表达阳性率分别为6.67%（1/15）、41.18%（14/34）、63.29%（50/79）;p53阳性率分别为0、35.29%（12/34）、67.09%（53/79）。MDM2、p53在正常组织、大肠腺瘤、大肠癌组织中表达率逐渐增加（P〈0.01）,两者与DukesC期、D期及远处转移相关,与年龄、性别及组织细胞分化程度无关。MDM2与p53表达之间呈正相关。结论：MDM2、p53高表达与大肠癌的发生、发展和预后相关。     

核转录因子在卵巢癌组织及细胞系的表达和意义

培养11株卵巢癌细胞系,收获细胞,对其进行胞质、胞核蛋白质提取,Western-blotting观察核转录因子(NFkB)家族蛋白及其抑制物的表达;采用免疫组化方法检测卵巢良性上皮性肿瘤、卵巢交界性上皮性肿瘤和卵巢癌中NFkB蛋白的表达。结果表明:111个卵巢癌细胞系P50、P65和IkB-α胞质表达阳性率分别为63.6%、45.5%、81.9%,胞核表达阳性率分别为63.6%、54.5%、18.2%。2在卵巢良性上皮性肿瘤、卵巢交界性上皮性肿瘤和卵巢癌中NFkB的阳性表达率分别为33.3%、37.5%和65.0%;3在卵巢癌组织,P65核染色阳性与分化程度、淋巴结转移、临床分期及肿瘤大小明显相关(P<0.05)。NFkB与卵巢癌细胞的发生、发展有关,NFkB可望成为判断卵巢癌预后新的标志物。     

粘附分子CD44v6在宫颈癌组织中的表达及意义

目的:了解粘附分子CD44v6在宫颈癌组织中的表达及其意义。方法:采用免疫组织化学法(SP法)检测CD44v6在69例宫颈癌组织及20例正常宫颈组织中的表达。结果:正常宫颈组织中的CD44v6呈阴性表达。69例宫颈癌组织中CD44v6的阳性表达率为68.1％(47/69)。CD44v6的阳性表达在不同的病灶大小、临床分期、细胞分化程度及有无淋巴结转移的宫颈癌组织中差异有统计学意义(P<0.05～0.01);在不同的病理类型及年龄的患者中差异无统计学意义(P>0.05)。结论;CD44V6可能在宫颈癌的生长、浸润及转移过程中起重要作用,可望作为反映宫颈癌恶性潜能的新指标。