二色补血草硫氧还蛋白过氧化物酶基因LbTPx的克隆及其表达

从二色补血草(Limonium bicolor)cDNA文库中分离出一个新的硫氧还蛋白过氧化物酶基因(LbTPx)全长cDNA序列.基因全长1016 bp,其中:5'非翻译区146 bp,3'非翻译区69 bp,开放读码框(ORF)801 bp,共编 码266个氨基酸;编码蛋白的分子质量为47.99× 10-24...     

二色补血草中2个金属硫蛋白基因的克隆及分析

从二色补血草中分离出2个金属硫蛋白基因的cDNA全序列,分别命名为LbMT1和LbMT2。LbMT1全长为569bp,其中5′非编码区23bp,3′非编码区300bp,开放读码框(ORF)长246bp,编码含81个氨基酸的蛋白,相对分子质量为8070,等电点为4.7;LbMT2全长为523bp,其中5′非编码区61bp,3′非编码区216bp,开放读码框长246bp,编码81个氨基酸,编码蛋白的相对分子质量为8000,等电点为5.0。这2个基因编码的氨基酸都含有14个半胱氨酸Cys,分布在蛋白质的N端和C端,呈CC、CXC和CXXC形式排列。疏水性分析表明:这2个蛋白都存在35~48个氨基酸之间较强的疏水区。通过对多种植物的MT蛋白序列比对分析表明,金属硫蛋白家族在氨基酸数目上保守性差,但半胱氨酸残基(Cys)的位置和数目保守性达到100%,揭示了Cys对金属硫蛋白的功能十分重要。这2个基因已经在Genbank上注册,LbMT1基因的登录号为EF103574,LbMT2基因的Genbank登录号为EF103575。     

二色补血草凝集素（Lectin）序列分析及表达

从二色补血草cDNA文库中分离出一个凝集素(Lectin)基因全长cDNA序列.该基因全长977 bp.其中:5′非翻译区(UTR)103 bp,3′非翻译区(UTR)208 bp,开放阅读框(ORF)全长663 bp,编码由221个氨基酸组成的蛋白质,该蛋白的相对分子质量为25 kD,理论等电点为8.82.利用实时定量RT-PCT方法进一步研究了二色补血草在植物病原菌(尖孢镰刀菌)侵染条件下不同时间点该基因的表达情况.结果表明,在尖孢镰刀菌胁迫处理的条件下,能诱导Lectin基因在二色补血草的根、叶中表达,说明该基因与植物抗病相关.     

二色补血草核型分析

采用孚尔根试剂染色压片技术对二色补血草(Limoniumbicolor(Bunge)Kuntze)体细胞染色体进行了核型分析。结果表明:二色补血草体细胞染色体数2n=16,为二倍体植物。二色补血草的8对染色体中有7对为中部着丝点染色体(m型),1对为近中部着丝点染色体(sm型)。核型公式为:二色补血草2n=2x=16=14m 2sm。染色体绝对长度变化范围为3.002～4.684μm,相对长度变化范围为9.82%～15.33%,最长染色体与最短染色体之比为1.56。     

二色补血草LbGST基因的原核表达载体构建与表达

从二色补血草(Limonium bicolor)中分离出一个编码谷胱甘肽硫转移酶(LbGST)基因,并将该基因构建到pGEX-4T-2原核表达载体,转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中,利用0.1 mmol/L的IPTG诱导该基因在大肠杆菌BL21中进行表达.SDS-PAGE检测表明,出现了特异的...     

二色补血草软化着色技术的研究

二色补血草是内蒙野生天然干花材料,自然干燥后花碰易落,且花色单调,针对这两个问题我们进行了软公着色技术的研究。本文主要阐述了材料的采摘时间、处理方法、处理时间、处理时的外界条件及枝条保色等技术问题,从而掌握了对二色补血草进行软化和染色的方法。     

二色补血草海藻糖-6-磷酸磷酸酯酶基因的克隆及分析

以二色补血草叶片组织为材料构建了cDNA文库,文库的初始滴度为2.0×106pfu,重组率为95%,平均插入片段为0.8 kb,扩增后文库的滴度为4.0×109pfu.mL-1。通过随机测序从文库中获得的海藻糖-6-磷酸磷酸酯酶(trehalose-6-phosphate phosphatase,TPP)基因的全长cDNA序列,该序列长1 986 bp,其中5’非翻译区163 bp,3’非翻译区680 bp,开放读码框长1 143 bp,编码380个氨基酸,蛋白分子质量为42KD,理论等电点为6.68。海藻糖-6-磷酸磷酸酯酶在海藻糖合成过程中起关键作用,该基因的克隆为研究海藻糖在二色补血草中的合成奠定了基础。     

二色补血草组织培养快速繁殖技术研究

对二色补血草组培快繁技术进行研究,结果表明,以MS培养基中加入6-BA1.0mg/L、NAA0.2mg/L的激素组合处理后的叶丛增殖倍数最大,达2.94。生根培养时以采用不含IBA的培养基为宜,生根率可达80%。经强光直射炼苗的二色补血草试管苗的移栽成活率达到82.5%,显著高于未经强光炼苗的试管苗移栽成活率。     

二色补血草多糖的提取及抗氧化功能研究

为探讨用超声-微波协同提取法提取二色补血草多糖的工艺条件,并确定其抗氧化功能的特性,以水为提取剂,通过正交试验对二色补血草多糖的提取工艺进行了筛选。通过测定羟自由基的清除率确定二色补血草多糖的抗氧化功能,结果认为：料液比1：60、提取温度70℃、提取时间600s为二色补血草多糖的最佳提取工艺,提取量可达46．45mg／g;二色补血草多糖对羟自由基有明显的清除作用,且随着多糖浓度的增加,清除效果增强。与传统热水浸提法相比,超声-微波协同提取法可以大大缩短提取时间,提高提取的效率;二色补血草多糖具有明显的抗氧化功能。     

二色补血草几丁质酶基因对病原菌胁迫的应答

从二色补血草cDNA文库中分离出了一个几丁质酶基因Lbchi31。利用实时定量RT-PCR方法研究了二色补血草在尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)中胁迫处理不同时间,Lbchi31基因在二色补血草根、叶器官中的表达情况。结果表明,尖孢镰刀菌的处理能强烈诱导Lbchi31基因在二色补血草根、叶中的表达。立枯丝核菌处理能够诱导Lbchi31基因在二色补血草叶器官中的表达,但在根中Lbchi31基因表达量没有显著改变。研究显示,Lbchi31基因能够响应病原菌的胁迫,可能参与了二色补血草对病原菌入侵的抵抗。     

二色补血草黄酮的提取工艺及抗氧化功能研究

[目的]研究二色补血草黄酮的抗氧化功能及其最佳提取工艺。[方法]采用超声-微波协同法及L9（3^4）正交试验设计优化二色补血草黄酮的提取工艺,利用羟自由基抑制和油脂抗氧化试验判断二色补血草中黄酮的抗氧化功能。[结果]二色补血草中黄酮的最佳提取工艺为：乙醇浓度40%,料液比1∶50,温度50℃,提取时间20 min;此条件下提取量为50.97 mg/g。二色补血草黄酮类提取物对羟自由基.OH有明显的清除作用,并可抑制油脂的酸败,且作用效果随着浓度的增加而增强。[结论]该研究为二色补血草的综合开发和在保健食品及医药工业中的应用提供理论依据。     

二色补血草的组织培养和离体快繁研究

[目的]为二色补血草的快速繁殖技术提供科学指导。[方法]以二色补血草的子叶与胚轴作为外植体,建立快速繁殖体系,研究不同激素浓度对诱导愈伤组织、不定芽以及生根率的影响。[结果]不同激素浓度的培养基均能使外植体不同程度地生成愈伤组织及不定芽;生根培养基中只有A、B、H、I组有不定根产生,其余组均无不定根产生。[结论]以子叶为外植体,愈伤组织和不定芽的最佳诱导培养基分别为：Ms＋O．7mg/L6-BA＋0.1mg/L NAA、MS＋0．5mg／L6-BA＋0．1mg／LNAA;以胚轴为外植体,愈伤组织和不定芽的最佳诱导培养基为：MS＋0．3mg／L6-BA＋0．5mg／LNAA。诱导不定根的最佳培养基为：MS0。