患根结线虫病番茄根内生固氮菌的筛选、鉴定和系统发育分析

植物内生固氮菌能通过自身的固氮作用,把空气中的氮气转化为植物可利用的氨态氮,促进植物生长以及提高作物产量。以患根结线虫病的番茄根组织为材料,采用梯度稀释和划线法分离纯化番茄根内生菌,通过无氮固体培养基连续培养筛选固氮菌,并扩增固氮细菌的16S rRNA基因序列进行鉴定和系统发育分析,初步了解患根结线虫病的番茄根内菌的种类和分布。结果表明,在挑选和分离纯化得到的33株番茄根内生菌中,经过在无氮培养基平板上连续的传代培养,最终得到3株具有稳定固氮能力的内生菌株。分子鉴定和序列分析表明筛选出的内生固氮菌菌株中包括8株芽孢杆菌、1株黄单胞菌和1株根瘤菌。与先前发表的番茄根内生菌优势OTU的聚类分析结果表明,根瘤菌是患根结线虫病番茄根中优势的内生固氮菌种群。     

青藏高原矮火绒草内生细菌多样性及生物功能分析

[目的]探究矮火绒草(Leontopodium nanum)内生细菌的群落结构多样性及其生物学功能,为开发相应功能的生物菌剂提供参考,并为青藏高原生态农牧业生产提供有价值的内生细菌资源.[方法]采用组织分离法对矮火绒草植株内生细菌进行分离纯化,基于16S rDNA序列分析确定分离菌株的系统发育地位;通过平板对峙法检测分离菌株拮抗病原真菌活性;检测分离菌株的产吲哚乙酸(IAA)、溶磷和固氮能力;测定分离菌株除草活性、低温适生性及促种子萌发特性.[结果]从矮火绒草植株根、茎、叶和种子部位共分离获得52株内生细菌,基于16S rDNA序列分析发现52株菌株可归属于4门7纲10目14科18属.其中假单胞菌属细菌为根部优势属,约占根部细菌总数的52.17%;茎中以芽孢杆菌为优势属,约占茎部细菌总数的41.18%;各部位的内生细菌数量分布表现为根>茎>种子>叶.在52株内生细菌中,11株有拮抗病原真菌能力、9株具有产IAA能力、7株有溶磷活性、7株具有固氮活性、20株具有除草活性、13株具有耐低温能力和8株具有促生作用;从植株部位分布来看,7种类型的功能菌在根、茎和种子部位均有分布,拮抗菌和除草菌在根部所占的比例较高,溶磷菌株在各植株部位所占比例均较低;在叶中未分离到拮抗菌、产IAA菌、固氮菌和促生菌.各功能菌株分布在17个属,多样性较高,其中假单胞菌属和芽孢杆菌属中含有多种功能菌株,在植株4个部位所占比例也较高.[结论]矮火绒草植株不同部位内生细菌的数量分布具有差异性,但均可分离到不同类型的功能菌株,功能菌株涵盖17个属,其中以假单胞菌属和芽孢杆菌属居多.     

2种植物内生固氮菌对燕麦种子萌发及幼苗生长的效果

为探明不同来源内生固氮菌对燕麦植株的促生能力,为植物内生固氮菌的应用开发提供参考,以陇燕3号接种沙蓬内生固氮菌产酸克雷伯氏菌(Klepsiella oxytoca Msp2c)和苜蓿内生固氮菌荧光假单胞杆菌(Pseudomonas fluorescence LM531)菌液,研究2种植物内生固氮菌对燕麦种子萌发及幼苗生长的效果。结果表明:接种产酸克雷伯氏菌菌液的燕麦出苗率、发芽率、株高、根长、根体积、叶面积、地上部鲜重、地下部鲜重均最高,分别达93.67%、89.00%、284.3 mm、242.3 mm、0.5 cm3、663.8 mm2、0.3998 g和0.3058 g,均显著高于无菌水处理对照组和接种荧光假单胞杆菌处理组。荧光假单胞杆菌处理组的株高、根长低于对照组,除出苗率高于对照组外其余指标均低于对照组且差异不显著。产酸克雷伯氏菌对燕麦幼苗有显著促生作用,可用于沙漠地区燕麦固氮促生菌剂的研制。     

茶树根际土壤解磷细菌的筛选及解磷活性分析

为了获得具有高效解磷活性和应用潜力的根际促生菌,从河南省信阳黄棕壤茶区采集茶树根际土壤样品,采用选择性培养基,以稀释培养法筛选具有解磷能力的细菌。结果表明,共筛选获得具有较强解磷能力的根际细菌36株,其中,解无机磷细菌23株,解有机磷细菌13株;解磷细菌主要分布于芽孢杆菌属、类芽孢杆菌属、伯克氏菌属、肠杆菌属、不动杆菌属和假单胞菌属,其中,芽孢杆菌和类芽孢杆菌为优势种群。解磷特性和活性测定结果表明,蜡样芽孢杆菌、类芽孢杆菌和伯克氏菌兼具解无机磷和有机磷的作用,而假单胞菌仅具有解有机磷的作用;23株解无机磷细菌中,18株的解磷活性大于100μg/mL,13株解有机磷细菌的解磷活性均大于40μg/mL。     

香蕉根际促生菌的抑菌活性及对作物生长的促进作用

【目的】研究4种香蕉根际促生菌对香蕉枯萎病镰刀菌和几种重要作物病原菌的抑菌活性,及其对番茄和玉米的促生作用.【方法】在培养皿中测定根际促生菌对作物病原菌的拮抗作用,通过盆栽试验测定根际促生菌发酵液对作物生长的促进作用.【结果和结论】从健康香蕉根际土中分离获得的枯草芽孢杆菌Bacillus.subtilis、解淀粉芽孢杆菌B.amyloliquefaciens、耳炎假单胞菌Pseudomonas.otitidis和绿针假单胞菌Ps.choloeaphtis对香蕉枯萎病镰刀菌4号小种Fusarium oxysporum f.sp.cubense具有强烈的抑菌活性,对番茄早疫病菌Alternaria solani、玉米纹枯病菌Rhizoctonia solani、荔枝炭疽病菌Colletotrichum gloeosporioides Penz.、香蕉炭疽病菌C.musarum Cooke et Mass、青瓜枯萎病菌F.oxysporum(Schl.)f.sp cucumerinum Owen、小麦赤霉病菌F.graminearum和荔枝霜霉病菌Penorophythora litchi Chen等作物病原菌也具有很好的抑菌活性;4种香蕉根际土壤细菌中耳炎假单胞菌生长最快、抑菌效果最好,其生长半径分别是枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、绿针假单胞菌的2.75、2.61和2.70倍,其对香蕉枯萎病、番茄早疫病菌、玉米纹枯病菌、荔枝炭疽病菌、香蕉炭疽病菌、青瓜枯萎病菌、小麦赤霉病菌和荔枝霜霉病的抑菌率分别达到50.70%、62.95%、70.85%、68.10%、58.58%、59.30%、51.34%和63.08%;用耳炎假单胞菌发酵液培养植物使番茄和玉米株高分别提高16%和33%,并且使番茄叶片总叶绿素含量增加40%.以上结果表明,香蕉根际微生物耳炎假单胞菌对作物病原菌有很好的抑菌活性,并且促进番茄和玉米的生长.     

黑钙土细菌种群组成特征

报道了采自吉林省农安县新刘家镇刘家村三社黑钙土中的细菌种群组成：（枯草芽孢杆菌、蕈状芽孢杆菌、类产碱假单胞、荧光假单胞菌变种Ⅰ、施氏假单胞菌、放射形土壤杆菌变种Ⅰ、放射形土壤杆菌变种Ⅱ、约氏不动杆菌、乙酸钙不动杆菌、喜盐微球菌、产黄纤维单胞菌、粪肥纤维单胞菌、柠檬色节杆菌、球形节杆菌、黄黄色杆菌等）及其鉴别特征，并根据其在土壤中的数量组成和分离出现率确定了柠檬色节杆菌、球形节杆菌、放射形土壤杆菌变种Ⅰ、类产碱假单胞、荧光假单胞菌变种Ⅰ、枯草芽孢杆菌、蕈状芽孢杆菌、粪肥纤维单胞菌为黑钙土的优势细菌种群。     

芒草根际、内生可培养细菌多样性及促生潜力研究

为研究芒草不同部位细菌群落组成,采用稀释梯度平板法分离芒草根际土壤、根部、茎部和叶部可培养细菌,并分析其植物促生活性。16S rRNA基因序列分析表明,分离的86株芒草根际、内生细菌由放线菌门(Actinobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、厚壁菌门(Firmicutes)和变形菌门(Proteobacteria)4个门、7个纲、22个属组成,不同部位细菌组成有所差异,其中短小杆菌属(Curtobacterium)在根际土壤和植物内部广泛存在,芽孢杆菌属(Bacillus)和根瘤菌属(Rhizobium)为根际土壤优势种群,伯克霍尔德菌属(Burkholderia)为根部优势种群,鞘脂单胞菌属(Sphingomonas)为茎部优势种群。分离菌株的植物促生特性分析表明,芒草根际和植物组织内部蕴含着丰富的产吲哚乙酸、产精氨酸脱羧酶和溶解难溶性磷酸盐等生物活性细菌,广泛分布于短小杆菌属、根瘤菌属、芽孢杆菌属、伯克霍尔德菌属、鞘脂单胞菌属等优势种群,且不同部位菌株促生特性和种类有所差别。     

黄瓜种子及幼苗内生细菌分离鉴定

分离不同品种黄瓜种子和幼苗中内生细菌,共得到79个菌株,经鉴定分属于芽孢杆菌属、土壤杆菌菌属、黄单胞菌属、假单胞菌属、欧文氏菌属及短小杆菌属。内生细菌数量测定表明,不同组织中内生细菌的数量不同,根中最多,平均含量2.63×105CFU/g鲜组织,其次为茎,再次为子叶,种子中较少;品种间内生细菌优势种群结构相同,但细菌数量略有不同。     

三七连作根际微生物多样性研究

【目的】针对三七土传病害根腐病日益突出的问题,探讨三七根际土壤和根内生微生物多样性、生物群落组成及代谢活性与根腐病发生的相关性。【方法】对连作3年三七和连作4年三七的健康植株和感病植株根际土壤进行Biolog ECO代谢功能多样性分析,对三七根际土和根组织采用多种培养基进行微生物的分离培养,根据细菌16S r DNA序列和真菌ITS区序列的通用引物进行PCR扩增、Blast同源比对及其系统进化树分析。【结果】健康植株组与感病植株组根际土壤微生物群落的丰富度和均匀度存在显著差异(P0.05),健康植株组土壤微生物群落的生理活性高于感病植株组;从根际土壤中培养出172株菌株,其中,健康植株组土壤以芽孢杆菌(Bacillus)、假单胞菌(Pseudomonas)、节杆菌(Arthrobacter)等为优势菌群;感病植株组土壤以黄杆菌(Flavobacterium)、毛霉菌(Mucor)和镰刀菌(Fusarium)等为优势菌群;从根组织中分离出121株菌株,其中,健康植株根部以芽孢杆菌(Bacillus)、假单胞菌(Pseudomonas)为优势菌群,感病植株根部以镰刀菌(Fusarium)、拉恩氏菌(Rahnella)、欧文氏菌(Erwinia)等为优势菌群。【结论】三七土传病害根腐病的发生与植株根际微生物群落结构组成及代谢功能多样性密切相关,为从微生态角度改善三七土壤健康状况及控制三七根腐病的发生提供科学理论依据。     

小麦、水稻、玉米、白菜、芹菜内生固氮菌及其系统发育

【目的】了解小麦、水稻、玉米、白菜、芹菜内生固氮菌的主要类群,确定内生固氮菌的系统发育地位。【方法】样品表面灭菌后采用无氮培养基分离、培养内生固氮菌,乙炔还原法测定菌株固氮酶活性;PCR扩增得到菌株16S rDNA,通过序列测定和相似性分析研究菌株的系统发育。【结果】从大田小麦体内分离到内生固氮菌34株,固氮酶活性在0.30-30.24 nmol C2H4/h•mg蛋白,基于16S rDNA序列最大相似性,这些菌株分属于假单胞菌（Pseudomonas）、根瘤菌（Rhizobium）、芽孢杆菌（Bacillus）、黄杆菌（Flavobacterium）等13属21种,种群分布较为广泛;从大田水稻体内分离到内生固氮菌25株,固氮酶活性在3.12-254.12 nmol C2H4/h•mg蛋白,属于芽孢杆菌、伯克霍尔德氏菌（Burkholderia）、肠杆菌（Enterobacter）、克雷伯氏菌（Klebsiella）等9属16种,伯克霍尔德氏菌、肠杆菌和克雷伯氏菌是水稻内生固氮菌特有种群;从大田玉米体内分离到内生固氮菌9株,固氮酶活性在7.27-59.58 nmol C2H4/h•mg蛋白,属于根瘤菌、鞘氨醇单胞菌（Sphingomonas）等5属6种;从盆栽试验小白菜体内分离到内生固氮菌14株,固氮酶活性在2.33-205.21 nmol C2H4/h•mg蛋白,属于根瘤菌、节杆菌（Arthrobacter）等6属8种;从市售芹菜体内分离到内生固氮菌10株,固氮酶活性在1.23-46.70 nmol C2H4/h•mg蛋白,属于鞘氨醇单胞菌、假单胞菌等5属8种。【结论】在生长期小麦、水稻、玉米和部分蔬菜体内普遍存在内生固氮菌,菌株固氮酶活性差异较大,在0.30-254.12 nmol C2H4/h•mg蛋白,系统发育地位分属于假单胞菌、根瘤菌、芽孢杆菌等25个属的56个种,这些内生固氮菌对于农业生产有巨大潜能。     

烟草内生细菌多样性研究

为了揭示烟草内生细菌多样性,选择K326、云85 和红花大金元3 个烤烟品种进行内生细菌的 分离和16S rDNA 序列分析鉴定,获得不同品种烟草内生细菌的多样性特征。结果显示,27 株内生细菌分 别属于枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis（33%）、蕈状芽孢杆菌Bacillus mycoides（4%）、芽孢杆菌属Bacillus sp.（11%）、肠杆菌属Enterobacter sp.（4%）、寡养单胞菌Stenotrophomonas sp.（4%）、热带根瘤菌Rhizobium tropici（4%）、假单胞菌属Pseudomonas sp.（4%）、土地芽孢杆菌属Terribacillus sp.（4%）,芽孢杆菌属 Bacillus sp. 为优势细菌类群。3 个品种的 Shannon index（H′）以K326 最高、为2.02,其次是云85、为1.48,红 花大金元最低、为1.3。     

拮抗棉花枯、黄萎病菌的甘草内生细菌初步研究

采用无菌操作技术从野生健康甘草(Glycyrrhiza uralensis)根、茎、叶、种子、根瘤等组织中分离出内生细菌(Endophyticbacteria)125株,其中31株对棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)具有较强的拮抗活性,这31株内生细菌分属于气芽孢杆菌属(Aerobacillussp.)、气单胞菌属(Aeromonassp.)、芽孢杆菌属(Bacillussp.)、黄单孢杆菌属(Xanthomonassp.)、假单胞杆菌属(Pseudomonassp.)、土壤杆菌属(Agrobacteriumsp.)     

新疆甘草内生细菌的分离及其系统发育分析

采用组织分离法和研磨分离法从甘草的根、茎、叶中共分离到129株内生细菌,经鉴定属于13个属,分别为芽孢杆菌属、伯克霍尔德氏菌属、棒杆菌属、柠檬酸细菌属、肠杆菌属、库克菌属、微杆菌属、类芽孢杆菌、叶杆菌属、假单胞菌属、沙雷氏菌属、葡萄球菌属和寡养单胞菌属.同时运用纯培养法和基于16S rRNA 基因序列的系统发育分析对新疆胀果甘草中可培养内生细菌进行了研究.     

盐碱土壤中耐盐细菌的分离与鉴定

从盐碱土壤中分离筛选耐盐菌株12株,经鉴定分别为假单胞菌属(Pseudomonas),黄杆菌属(Flavobacterium),盐单胞菌属(Halomonas),微球菌属(Micrococcus)和芽孢杆菌(Bacillus)。各菌株均耐盐至10%,且对小麦、番茄、辣椒和黄瓜没有潜在致病性。     

烤烟K326种子可培养内生细菌的分离与鉴定

采用NA、KB、R2A和TSA 4种培养基分离烟草品种K326种子中的可培养内生细菌,并选择其中的50株外观形态特征有显著差异的菌株进行了16S r DNA测序与分析。结果表明,烟草K326种子中携带有大量可培养内生细菌,培养获得菌落总数约为8.1×105cfu/g;主要分为假单胞菌属、寡养单胞菌属、芽孢杆菌属、贪铜菌属和杆菌属等5个属,其中优势内生菌为嗜麦芽寡养单胞菌、假单胞菌和芽孢杆菌,分别占菌种总数的34%、32%和26%。     

芽孢杆菌SL-23和SL-44对加工番茄防病促生效果的研究

从加工番茄根际土壤中分离到两株具有促生拮抗作用的芽孢杆菌SL-23和SL-44.分别用两株芽孢杆菌的发酵液处理番茄的立枯丝核菌菌片,其电导率与呼吸强度均出现先升后降的变化.在防治加工番茄苗期立枯病的盆栽实验中,芽孢杆菌SL-23和SL-44的防治效果分别可达49.96;和20.65;.而化学试剂五氯硝基苯的防治效果仅为0.81;.种子发芽试验和幼苗促生试验表明,芽孢杆菌SL-23和SL-44可促进加工番茄幼芽和苗期的生长,分别提高发芽率12.5;和18.75;,苗期SL-44的促生效果尤为显著,植株鲜重和干重的增加量分别可达70.9;和53.14;.     

棉花根际促生菌筛选菌株的分类鉴定

从棉花根际中分离到的大量细菌，经多次盆栽和田间试验，筛选到６株对棉花具有防病促长促菌株，编号为ＣＳ８５、ＺＲ、ＰＦ２、ＺＳ１、１８和Ｓ１４。根据它们的形态和培养特征以及生理生化牧场生等的鉴定结果。将６５株菌分别归属为荧光假单胞杆菌、恶臭假单胞杆菌、假单胞杆菌ＰＦ２、野油菜黄单胞菌、枯草芽孢杆菌和腊状芽孢杆菌。     

蝴蝶兰组培苗内生细菌的抑菌与促生作用研究

旨在探讨蝴蝶兰组培苗内生细菌的抑菌活性及其促生作用。从蝴蝶兰组培苗分离内生细菌,并分别对其进行摇瓶培养,采用其发酵液做体外抑菌试验并将菌苗共培养,结果发现,从蝴蝶兰组培苗分离到6株内生细菌,其中菌株H6对大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和变形杆菌(proteus species)表现出较强的抑菌作用,同时该菌株对组培苗也有显著的促生作用,植株平均鲜重增长率达到135.52%。研究表明,蝴蝶兰组培苗内生细菌代谢产物具有抑菌活性和促生作用,为植物组织培养污染防治和兰科植物潜在有益共生菌的挖掘提供新的方法,也是开发新型药物、生物防腐剂的筛选源和内生菌技术的应用具有重要意义。     

基于高通量测序的肉牛垫料养殖床中细菌群落分析

利用Roche 454GSFLX+高通量测序平台分析了肉牛垫料养殖床中的细菌群落结构,结果显示,从发酵床样品中共获得17 772条有效序列,其中优质序列有13 301条,在97%相似水平上聚为1 603个OTU分类单元;目水平上,细菌优势种群集中在芽孢杆菌目(21.70%)、红螺菌目(18.20%)、乳杆菌目(14.90%)、梭菌目(14.10%)、黄杆菌目(10.50%)、伯克氏菌目(5.50%)、黄单胞菌目(3.00%)、放线菌目(2.10%)和根瘤菌目(1.80%);属水平上,细菌的优势种群主要集中于醋酸杆菌属(15.17%)、金黄杆菌属(9.50%)、乳杆菌属(6.90%)、芽孢杆菌属(6.30%)、乳球菌属(6.0%)、高温放线菌属(3.50%)、类芽孢杆菌属(2.40%)、梭菌目(2.10%)、伯克氏菌属(2.10%)和葡萄糖醋杆菌属(1.80%)。     

陕北地区苹果根际促生菌的筛选及其促生效应

为进一步开发苹果根际促生菌资源,以陕北苹果树根际土壤为材料进行根际促生细菌的筛选。以溶磷、解钾和产铁载体作为标准,测定初筛菌株的多种促生能力,并通过16S rDNA序列同源分析,对筛选出的促生效果最好的菌株进行分类鉴定,并采用单菌单独接种和多菌混合接种的小麦盆栽试验,测定其促生效应。结果表明：从陕北不同产地苹果根际土壤中筛选获得131株细菌,具有溶磷能力的菌株共17株,占总分离菌株的10.68%,其中11株细菌能够溶解无机磷,6株细菌能够溶解有机磷;可产铁载体的有24株,占总分离菌株的18.32%,YS-28和YC-31具有解钾能力。基于16S rDNA序列比对和系统发育分析将其中的24株归属于芽孢杆菌属(Bacillus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、白色杆菌属(Leucobacter)、红球菌属(Rhodococcus)。从中筛选出属于芽孢杆菌属(LC-22、YC-31、LC-19)和假单胞菌属(LC-2)的高活性菌株的小麦盆栽试验结果表明,与对照组相比,经LC-22、YC-31和LC-19混合菌液处理,小麦幼苗鲜质量增加96.12%;经LC-22、LC-19和LC-2混...