同一厂家不同批号抗原试剂检测猪O型口蹄疫抗体结果出现差异的思考

有效控制口蹄疫的关键在于早期检测,准确的检测是防制口蹄疫的重要环节。世界动物卫生组织(OIE)推荐用液相阻断ELISA(酶联免疫吸附试验)监测口蹄疫抗体,而我国目前应用最广的是部颁标准正向间接血凝试验(IHA)监测口蹄疫抗体[1]。笔者在同一个操作标准和质量控制的条件下,试剂来源同一厂家不同的批号,检测结果出现了一定的差异。笔者分别对不同批号检测的抗体结果进行了比较,现报告如下。     

云南省红河州猪衣原体病血清学调查

1．1 被检血清对红河州12个县有猪繁殖障碍症状的部分乡、村、种猪场和农户的能繁母猪和种公猪采血分离血清，冷冻保存。1．2检测试剂及方法由兰州兽医研究所提供的衣原体微量IHA试验的抗原、对照阳性血清和阴性血清（批号均为200111），试验在96孔Ⅴ型聚苯乙烯板上进行，检测方法及判定标准按照试剂说明书的要求进行。     

ELISA技术在实际应用中的改进

由于ELISA技术灵敏度高、特异性强,无需昂贵的仪器和避免了同位素放射性危害等特点,目前已被广泛应用,我们通过近几年来在基层开展大批量乙型肝炎病毒检测的工作,对ELISA技术在实际应用中作了一些改进。一、ELISA药盒的选择:ELISA测定涉及多个环节,而试剂质量的优劣是决定检测成败的关键。市售的试剂药盒中,不同生产单位或同单位不同批号的药盒质量相差很     

三种方法检测克伦特罗确保猪肉食用安全

本篇文章主要提出用三种方法:试剂条法、ELISA法、液相串联质谱法做为检测克伦特罗的重要手段。我们利用6个尿样和6个组织样品分别做了添加回收。用试剂条法检测6份添加浓度分别是3μg/L、6μg/L猪尿样品,其结果显示是阳性。用ELISA法对添加浓度分别是100ng/kg、300ng/kg的6份组织样品进行检测,回收率是98.9%～99.4%,液相串联质谱法检测猪肉组织中添加浓度为50ng/kg,100ng/kg,300ng/kg,500ng/kg的组织样品,检测回收率为99.4%～103.4%,验证结果证明三种方法均能满足实际检测的需要。     

鸡白痢/禽伤寒沙门菌抗体检测试剂的比较与评估

对市面上现有鸡白痢/禽伤寒沙门菌抗体平板凝集检测试剂及其不同批次,微量凝集检测试剂和ELISA共4种检测试剂进行比较与评估。用4种试剂以及试剂A的不同批次检测来自11个种鸡场的1 650份血清,计算不同试剂检测种鸡场的抗体阳性率,2种试剂之间的阳性符合率、阴性符合率和总符合率,并以Kappa检验判断不同检测方法及其试剂之间的一致性程度。平板凝集试剂A的不同批次间以及平板凝集试剂A和B之间具有高度一致性(Kappa系数=0.714~0.746),但阳性符合率不足80%。平板凝集试剂A、微量凝集试剂C、ELISA试剂D之间仅具有中度或弱一致性(Kappa系数=0.392~0.542)。不同鸡白痢/禽伤寒沙门菌抗体检测试剂间存在差异,平板凝集试剂不同批次间也存在差异,提示试剂生产厂家应加强质量控制,同时研发敏感性、特异性、稳定性更好的替代试剂,而种鸡场在进行抗体监测时应固定使用1种检测试剂,避免影响检测结果的准确性和连续性。     

影响HBV标记物检测的物理因素

乙型肝炎是我国主要传染病之一。目前对其研究不仅局限于人医，而且已扩展到兽医。近年来已先后报道了从多种动物中检出HBV各种标记物[1、2、3]。由于HBV标记物检测受检验方法、试剂来源及其它因素影响甚大。本文就物理因素对HBV标记物的影响进行初步探讨，现将结果报告如下。1．材料与方法1．1待测阳性血清：待测阳性血清来自本单位肝炎门诊和市第一医院门诊同位素科，用于ELISA或RIA法检测的阳性血清标本。1．2检测所用的ELISA和RIA试剂盒：由三维生物工程有限公司生产，批号为960501和960503，均在有效期内使用。1．3检测方法1…     

福林酚试剂法与缩二脲试剂法测定饲用蛋白酶活力的比较分析

本试验采用福林酚试剂法和缩二脲试剂法分别测定10种饲用蛋白酶活力,并比较两种方法测得牛血清蛋白(BSA)和酪氨酸(Tyr)标准曲线的线性相关性和两种方法测定蛋白酶活力的准确性、灵敏度及变异度。结果表明,两种方法测得的两种标准曲线的线性相关性均较好,同时两种方法测得蛋白酶活力的精确度及变异度也均较好;相对于缩二脲试剂法,福林酚试剂法测定蛋白酶活力的灵敏度较高,检测限较低,同时福林酚试剂法测定中性或碱性蛋白酶活力准确性较高,但测定酸性蛋白酶活力准确性较低。普通氨基酸含量的测定可以选用福林酚试剂法,而双缩脲试剂法可以很好地测定饲料中蛋白质含量,故在实际工作中应根据需要选择合适的方法。     

金川区奶牛结核病检测技术试验

同时采用单纯皮内变态反应试验(SICT)和结核病抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)对金川区3家奶牛场450头奶牛进行结核病检测,根据试验结果,评价两种检测方法的优缺点,探讨最佳的检测方案。试验结果表明,两种检测方法得出的结果存在误差,可能检测出假阳性。因此,对于结核病的净化,使用"SICT+ELISA"相结合的检测方法,可以提高检测结果的敏感性及特异性。     

应用猪瘟单抗酶联试剂进行猪瘟免疫和疫情监测的试验

应用中国兽药监察所研制的猪瘟弱毒和强毒单抗酶联试剂，对猪瘟免疫抗体和猪瘟疫情进行监测。试验结果表明，一月龄一次接种两头剂和一月龄，二月龄时各接种一头剂猪瘟疫苗的猪均有良好的免疫应答。未吸初乳仔猪的抗体水平较低，而一旦吸初乳后，其ＯＤ值可达０．２０以上。对２０日龄和６０日龄进各接种４头剂猪瘟兔化弱毒疫苗的猪，检测其免疫水平表明，在特定的条件下，大剂量接种疫苗有一定的必要性。用猪瘟弱毒单抗酶联试剂对现     

浅谈如何提高ELISA测定的准确性

文章就酶联免疫吸附试验(ELISA)从检测试剂的选择、使用条件到样品处理及相关操作做出了详细分析介绍。     

河北省中小规模猪场猪瘟流行病学调查

2006年下半年,我们重点对河北省中小规模猪场的猪瘟免疫状况和发病情况进行了实地调查和实验室诊断,并对其免疫效果进行了评估,较为全面地分析了河北省目前中小规模猪场猪瘟流行状况。1材料与方法1.1试验材料1.1.1器械:采血器、ELISA实验所需试剂及器械。1.1.2诊断试剂:猪瘟病原检测试剂盒(CHEKIT-HCV-Antigen ELISA TEST KIT HCV Ag),IDXXX公司生产,批号43220-441;LSI猪瘟抗体ELISA检测试剂盒(CI VTESTSUIS HC/PPC),海博莱公司生产,批号700085-01。1.1.3试验样品:(1)免疫效果评估:血清样品采自K规模猪场,共85份。…     

不同诊断试剂对隐性乳房炎的诊断效果观察

采用CMT方法(加利福尼亚隐性乳房炎检验法)与1%、2%、4%过氧化氢方法进行对比试验,CMT法采用诊断盘,过氧化氢法采用的是玻片法.通过试验验证各种方法的优缺点,并且为该场诊断隐性乳房炎提供依据.试验结果是CMT试剂比过氧化氢试剂检测效果更直接、方便、准确、可靠,建议奶牛场以后定期对牛群用CMT试剂进行检测,来降低奶...     

不同抗原对猪瘟病毒抗体ELISA检测效果的影响

为研究不同抗原对猪瘟病毒抗体ELISA检测效果的影响,通过原核表达获取猪瘟病毒重组E2蛋白、E0蛋白、C蛋白和NS5B蛋白,大小分别约为35 kD、42 kD、16 kD和80 kD。经Ni-NTA亲和层析柱纯化并利用BandScan软件进行计算,纯度均在90%以上,满足ELISA检测包被用原料纯度的要求。将上述4种蛋白作为包被抗原进行ELISA,以10份企业阳性质控品血清和10份企业阴性质控品血清为检验指标比较不同抗原对猪瘟病毒抗体ELISA检测效果的影响。结果以E2蛋白为原料的包被板检测质控血清时,灵敏度和特异性均达到80%以上,能够满足猪瘟病毒抗体ELISA检测的要求,故选择E2蛋白作为包被抗原并进行相关检测试剂的研制。用研制的试剂与国际知名度高、产品质量好的美国IDEXX同类试剂对432份临床猪血清进行符合性检测,结果与美国IDEXX试剂的阳性符合率为95.53%,阴性符合率为86.56%,总符合率为91.67%,两种试剂检测结果具有较高的一致性。试验表明,用E2蛋白为包被抗原对猪瘟病毒抗体进行ELISA检测的效果最好,制备的检测试剂可用于临床猪瘟病毒血清抗体的检测,为今后猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂的进一步研制奠定了基础。     

猪瘟抗体免疫金标试纸条在预防猪瘟中的应用

目前监测猪瘟抗体的检测方法主要有ELISA试验、正向间接血凝试验和免疫金标试纸条试验。ELISA试验，操作条件严格，在实验过程中使用了有毒的显色底物溶液，操作步骤程序多，从试剂的配制到实验结果的出现需2～3d，且费时费力，不具有快速、简便的方法原理；正向间接血凝试验，从操作至结果出现的时间为1．5～2h，虽有快速的特点，但试验用的诊断液     

影响猪瘟ELISA抗体检测结果的因素分析

猪瘟ELISA抗体检测试验是目前实验室检测猪瘟病毒血清抗体的常用方法,具有敏感性高、特异性强等优点,同时也存在操作步骤多,易受人为因素、仪器因素、试剂保存、样品的处理等诸多方面因素影响的缺点。笔者对这些影响因素进行归纳分析,以期提高猪瘟ELISA抗体检测结果的准确性。     

应用葡萄球菌蛋白A的酶联免疫吸附试验用作检测病毒抗体

研制了一种用辣根过氧化物酶标记葡萄球菌蛋白A的改良间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法。用辣根过氧化物酶标记蛋白A结合物取代抗球蛋白酶结合物作间接酶联免疫吸附试验,检测马、牛、猪、猫、狗、兔和人血清中的病毒抗体。该试验结果与血清—病毒中和试验作比较。并讨论了在实验室中应用该试验对各种动物血清作血清学试验的可能性。自从在1971年Engvall和Perlmann与Van Weemen和Schunrs研制了酶联免疫吸附试验(ELISA)以来,该方法已广泛用于抗体或抗原的检测。因为ELISA和放射免疫测定法同样敏感,且所用试剂稳定,又不需要复杂设备,故当今已于许多诊断实验室中应用。与大多数其它常用方法比较,ELISA方法价廉、快速、简单。各种改良ELISA试验证明是有用的,特别间接方法适用于传染病研究。然而,因为许多实验室工作用各种动物血清,故需要各种抗球蛋白酶结合物,而商业上制备的结合物种类是有限的。显然,如果有一种能够检测各种动物免疫球蛋白的结合了酶的试剂,将大大促进了间接ELISA试验的多种用途。虽然早已知道葡萄球菌蛋白A与大多数动物种类的IgG结合,但这种现象得到广泛应用仅仅是近年的事。在放射免疫电泳,免疫铁蛋白技术和免疫荧光试验中,这种蛋白已用作代替抗IgG血清。本报告的目的是叙述在间接ELISA方法中,酶标记蛋白A的应用。这种改良方法用单一种试剂可以检测多种动物的抗体。强调了此种方法便于对多种动物病进行实验室诊断。     

应用斑点酶联免疫试验快速检测绵羊布鲁氏菌病

Dot- ELISA首先为 Hankes和 Harbrink等建立。Pappas等正式称其为 Dot- ELISA。鉴于本方法无需复杂设备 ,目前已作为一种免疫酶技术在医学领域广泛应用。将本技术应用于绵羊布鲁氏菌( Brucella ovis)病的诊断 ,目前尚未见资料报道。本文旨在建立本学科的试验方法 ,并证明其方法的可靠性和可行性。1　材料与方法1 .1　载体　混合纤维素酶微孔滤膜 (上海产 ,批号870 82 9)。1 .2　试剂　 Br.ovis菌体抗原、热酚抗原、超声提取抗原、碱提取抗原均为新疆流研所刘志文制备。酶标记兔抗羊 Ig G由上海生物制品研究所提供。1 .3　制膜　取前…     

羊伪结核棒状杆菌的分离鉴定及ELISA检测方法的建立

从疑似山羊干酪性淋巴结炎羊的肩前淋巴结脓肿内分离到2株菌,经鉴定均为羊伪结核棒状杆菌。利用羊伪结核棒状杆菌标准菌株(ATCC19410株)制成外毒素作为检测抗原,通过酶标抗体、阳性血清、外毒素抗原最适浓度的选择试验,确定适当的抗原、抗体和酶标抗体稀释浓度,建立了间接ELISA方法用于检测抗体。用建立的ELISA方法检测100份待检羊血清,其中阳性血清4份,阳性检出率为4％。     

抗菌肽对猪源大肠杆菌和猪链球菌体外抑菌活性研究

<正>1材料和方法1.1材料(1)试验菌株。8株猪大肠杆菌(E.coil)分离自大肠菌感染的猪体,8株猪链球菌株分离自感染的病猪,均来源于河南省内猪场,由河南农业大学牧医工程学院传染病实验室自行分离保存。(2)试剂和药物。抗菌肽和牛肉膏(生化试剂)购自北京奥星生物技术有限公司,批号20070720;蛋白胨(生化试剂)购自北京奥星生物技术有限公司,批号20081102;氯化钠(分析纯)购自天津北方天医化学试剂厂,批号20080924;磷酸氢二钾(分析纯)购自上海恒信化学试剂有限公司,批号20080602。     

确定ELISA试验阳性临界值的探讨

固相免疫酶技术建立二十多年来，在血清学和病原诊断研究中应用广泛。围绕ELISA不能深入发展的主要问题之一是至今结果判定尚无统一标准，直接影响其敏感性和特异性。在ELISA具体操作中，确定临界值随机性很大，受主观因素影响较大，易造成试验判定出现偏差。ELISA操作中存在的误差有三：技术误差，操作误差和统计误差。技术误差主要指抗原抗体间的非特异交叉反应，及抗原抗体的纯度、效价和使用浓度等。操作误差主要指试验器材处理方式和加样准确性，显色反应是结果判定是否准确的关键。在诸试验条件一致情况下，co值还受当时的温度…