RNA干扰的研究进展

RNA干扰（RNA interference,RNAi）是多种生物体内由双链RNA（double stranded RNA,dsRNA）介导同源mRNA降解的现象。这种现象广泛存在于生物界,是生物体抵御病毒或其它外来核酸入侵以及保持自身遗传稳定的保护性机制,以其高效率、高特异性等特性,较反义核酸、核酶、三链RNA等基因沉默技术显示了独特优势及广泛的应用前景。本文就其发现、分子机制及其应用等方面的研究进行综述。     

RNAi技术的应用

将双链RNA导入细胞内会引起与其同源的基因的沉默，这种现象称为RNA干扰（RNA interference，RNAi）。作者从RNAi技术的历史、作用机制、应用以及前景4个方面，其中主要就其应用方面的研究作一综述。     

分子病毒学相关技术在预防兽医学上的应用

病毒（Virus）是广泛存在于人类、动物、植物及微生物体内的一类细小生物，结构非常简单，外面包以蛋白质组成的衣壳，核心为一种核酸DNA或RNA。这种核酸DNA或RNA储存着病毒生命特性的全部遗传物质——基因组。动物分子病毒学的研究于20世纪80年代末由结构基因组时代发展到功能基因组时代或称为后基因组时代。随着对动物分子病毒学研究的深入，     

快速提取病毒核酸用于PCR或RT-PCR

PCR或RT—PCR因其操作简便快速、灵敏度高已越来越广泛的应用到病毒核酸的检测中，但其检测效率在很大程度上受到核酸提取速度和质量的影响。经典的病毒核酸提取方法主要包括变性剂裂解、蛋白酶K处理、有机溶剂抽提、乙醇或异戊醇沉淀等操作。众多的步骤和多次的转移操作以及在每个步骤上消耗的时间往往会降低核酸提取的效率。本文介绍了一种改进的异硫氰酸胍法，经多次提取鸭瘟疱疹病毒（Duck plague herpesvirus，DPV）的基因组DNA和鸭肝炎病毒（Duck hepatitis virus，DHV）的基因组RNA，显示出该法具有简单快速、安全可靠、低成本和高效率的特点。     

RNAi及沉默通路调控研究进展

RNA干扰（RNA interference,RNAi）是由双链RNA（double-stranded RNA,dsRNA）介导的细胞内双链mRNA特异性降解的现象,属于转录后的基因沉默机制。迄今为止,RNAi已经是一种广泛应用于研究基因功能的最新和最有效的方法,并且在治疗人类和动物疾病中也有很大潜力。作者主要综述了RNAi的过程、小RNA的生物发生学及沉默通路的保护和调控。     

反义技术及其选择性应用研究进展

反义技术利用DNA或RNA分子通过Watson Crick碱基配对原则与目的基因的mRNA互补结合，通过各种机制使其降解或抑制其编码蛋白的翻译，从而抑制目的基因的表达，包括反义寡核苷酸技术、核酶技术和小干扰RNA技术。与基因敲除等功能缺失性研究方法相比，反义技术具有投入少、周期短、操作简单等优点，因此受到了广泛的关注。文中介绍了反义RNA技术、核酶技术和反义寡核苷酸技术等反义核酸技术的原理及其主要应用，对几种常用反义技术的选择性应用及存在的问题进行概述。     

核酸疫苗的特点及在畜禽疫病防制上的应用前景

核酸疫苗，又称基因疫苗，包括DNA疫苗和RNA疫苗，其中DNA疫苗又称为裸体DNA疫苗或裸DNA疫苗。与传统疫苗相比，核酸疫苗具有很多优点，被誉为是第三次疫苗革命。本文主要就核酸疫苗的特点、免疫机制与在畜禽疫病防制上的应用前景等方面简述如下，供参考。     

柔嫩艾美耳球虫病毒的鉴定

鸡球虫病是由艾美耳属（Eimeria）的一种单细胞寄生性原虫引起的严重危害养禽业发展的重要疾病之一,遍及世界各地。感染鸡的艾美耳属球虫中,国外已报道在巨型艾美耳球虫（E.maxima）,堆型艾美耳球虫（E.acervu-lina）,毒害艾美耳球虫（E.necatrix）和布氏艾美耳球虫（E.brunetti）中发现了病毒粒子或病毒RNA。但是作为危害最严重的柔嫩艾美耳球虫是否有病毒感染,国内外迄今尚无报道。本研究首次在柔嫩艾美耳球虫中发现病毒并对其进行了鉴定。通过核酸分析、RNA依赖的RNA聚合酶（RDRP）活性和电镜形态观察对病毒进行鉴定。核酸酶的敏感性试验结果表明在柔嫩艾美耳球虫总核酸电泳图谱上观察到的大小分别为1.4、2.4和3.6kb的3条病毒带均不能被DNA酶（100mg/L）降解,但可被RNA酶（1.0mg/L）降解,表明这些核酸为RNA。另外,这些核酸不能被高盐浓度（0.3mol/L NaCl）RNase A（10mg/L）降解,但可被低盐浓度（0.015mol/L NaCl）RNase A（10mg/L）降解,并且采用α-32P标记的UTP掺入法测得该病毒样核酸具有RNA依赖RNA聚合酶（RDRP）活性,表明这些核酸为双链RNA（dsRNA）。利用蔗糖梯度离心和透射电镜技术对柔嫩艾美耳球虫病毒进行了分离和鉴定。电镜负染观察到柔嫩艾美耳球虫病毒粒子外观呈球形,二十面体,无囊膜,直径38nm。     

应用猪繁殖与呼吸综合征核酸标准物质比较5种核酸提取试剂盒

为比较不同核酸提取试剂盒对猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）核酸的提取效率,使用国家标准物质“猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲经典株核酸标准物质”作为模拟样品,分别使用试剂盒A、B、C（磁珠法）以及试剂盒D、E（柱式法）等5种核酸提取试剂盒进行核酸提取,然后通过荧光RT-PCR和数字RT-PCR方法评估提取效率,并分析不同基质对提取效率的影响。结果显示：5种试剂盒均能有效提取PRRSV RNA,其中磁珠法的提取效率高于柱式法;试剂盒B和C对PRRSV RNA的提取效率较高;基质会对提取效率造成影响,精液和抗凝血对试剂盒提取效率的影响较大。综上,试剂盒B、C均可适用于猪繁殖与呼吸综合征临床样品的核酸提取。实际操作中,应根据实验室条件、样品数量、样品类型和时间要求等因素,选择应用合适的提取试剂盒。     

哺乳动物中RNA干扰研究进展

RNA干扰(RNAi)由双链RNA引起,广泛存在于动、植物中的序列特异性转录后基因沉默,是生物体在进化过程中,抵御病毒感染及由于重复序列和突变引起的基因组不稳定性的保护机制。论文从RNAi现象、RNAi发生机制、哺乳动物中的RNAi现象和RNAi与抗病毒感染等几个方面做了综述,详细介绍RNAi在哺乳动物中的应用。     

RNA病毒的重组机制及其研究进展

RNA重组是RNA病毒普遍存在的变异方式之一,但仍有很多关键性问题尚未阐释清楚。目前认为重组机制主要有两种,复制型重组机制即模板转换（template-switch）,又称为copy-choice机制;另一种为非复制型重组机制,即断裂连接机制（breakage-religation）和类似于剪接的反酯作用（splicing-like transesterification）机制。由于重组在病毒进化变异过程中发挥着不同的作用,阐明重组机制有助于研究病毒进化变异和复制转录等生命周期过程。本文拟就RNA重组类型、重组机制、对RNA病毒重组的研究、重组的生物学意义及应用4个方面,综述RNA病毒重组机制及其研究进展。     

RPA技术及其在动物病原检测中的应用

分子检测技术是进行病原检测、鉴定和疾病诊断的重要手段。重组酶聚合酶扩增技术（recombinase polymerase amplification，RPA）是一种新型核酸扩增技术，主要在能结合单链核酸（寡核苷酸引物）的重组酶、单链DNA结合蛋白（SSB）和链置换DNA聚合酶3种酶的作用下等温扩增DNA或RNA，具有操作便捷、特异性强、灵敏度高和反应迅速等优点，可实现对疾病的现场诊断。作者简述了RPA技术的反应体系组成、反应原理、引物和探针的设计以及扩增产物的检测方法等，介绍了RPA技术在动物重要病毒性、细菌性及寄生虫病原检测中的应用，分析了该技术的局限性，并对其发展前景进行了展望。     

RNA干扰作用的研究进展

作为一种古老的生物体自我监督机制，RNA干扰（RNAi）通过双链RNA（dsRNA）作用于同源基因的特异性序列，使其沉默。而小干扰RNA（siRNA）则类似RNAi作用中的媒介物，能够沉默体细胞中的目的基因而不会激活dsRNA依赖性蛋白酶介导的非特异性抑制作用。目前，RNAi技术已被广泛应用于新基因的筛选、基因功能鉴定、信号转导研究以及基因治疗等方面。显示出了十分广阔的应用前景。     

RNA干扰技术的应用研究进展

RNA干扰是指由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)启动的序列特异的转录后基因沉默现象,广泛存在于真菌、植物和动物中。RNA干扰技术是近年来迅速发展起来的高效、特异、易操作的基因阻断技术,在功能基因组的研究中有着广阔的应用前景。文章对RNA干扰的分子机制、生物学功能和RNA扰技术的优势以及其在功能基因组、基因治疗、转基因动物研究、药物开发等方面的应用做一综述。     

核酸疫苗的应用现状和发展前景

核酸疫苗是将编码某种抗原蛋白的外源基因（DNA）与质粒重组后直接导入动物细胞内，并通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白，诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答，以达到预防和治疗疾病的目的。因此，核酸疫苗也称基因疫苗。它包括DNA疫苗和RNA疫苗，其中DNA疫苗由于不需任何化学载体，故又称裸DNA疫苗。同单链RNA相比，双链DNA具结构稳定、操作简单等许多优点，所以DNA疫苗比RNA疫苗更受学者们的青睐。１核酸疫苗在疾病防治方面的应用自１９９０年，Wolff发现DNA能直接诱导机体产生免疫应答以来，通过国内外学者的不断努力，…     

兽医生物工程技术发展的回顾与展示（续）

兽医生物工程技术发展的回顾与展示（续）彭万强（广东省农业科学院兽医研究所广州５１０６４０）３生物工程技术在诊断畜禽疫病中的应用分子生物学技术在我国兽医领域应用最为广泛的首数诊断方面。如单克隆抗体诊断试剂盒、核酸探针、聚合酶链反应、核酸电泳、印迹技术等...