枯草芽孢杆菌B18菌株对黄瓜枯萎病菌抑菌作用研究

1　材料与方法将B18接种于NA液体培养基中 ,30℃ 14 0转 /分的摇床上培养 ,培养后的发酵液在 0 .4 5 μm的细菌过滤器过滤、12 5℃高温灭菌 30min ,获得的滤除菌体的发酵液过滤液、高温杀死菌体的发酵液及发酵液原液用于抑菌测定。1 1　对病原菌孢子萌发抑制作用测定将PDA平板上培养的黄瓜枯萎病菌用无菌水溶解 ,滤除菌丝体制成分生孢子悬浮液并将浓度调至 4× 10 7个/ml左右。准确量取 5 0 μl分生孢子悬浮液置于无菌的载玻片上 ,再准确量取同样体积发酵液过滤液、高温杀死菌体的发酵液及发酵液原液 ,分别滴入载玻片上的分生孢子悬浮液…     

枯草芽孢杆菌D-29拮抗作用及其抗菌蛋白特性研究

枯草芽孢杆菌D-29是从地肤根内分离获得的一株生防细菌,为进一步了解D-29的生防特性,采用平板对峙法测定其抑菌谱并对其抑菌蛋白进行了研究。结果表明,该菌对番茄灰霉病菌、玉米大斑病菌等11种植物病原真菌均具有抑制作用,其中对玉米大斑病菌的抑菌效果最好,抑制率为54.6%;确定80%饱和硫酸铵为最佳盐析饱和度,获得的粗提蛋白耐高温,对有机溶剂和紫外光照不敏感,耐酸不耐碱。     

内生枯草芽孢杆菌BS-2对水稻苗生长的效应

结果表明:内生枯草芽孢杆菌BS2(Bacillussubtilis)菌株含量为103cfu·mL-1时即可进入水稻体内定殖;该菌的菌体、不同菌液含量及外分泌物对水稻苗生长均表现出不同程度的促进作用,如增加植株的鲜重与干重.从其促生机理来看,该菌能提高水稻叶绿素的含量,提高其保护酶活性,并通过提高水稻对外界环境的适应性,提高其抗逆性,促进其生长.     

噻虫嗪对胶冻样类芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌的拮抗作用

[目的]研究杀虫剂噻虫嗪对微生物菌剂主要功能菌株——胶冻样类芽孢杆菌(Patuibacillus mucilaginous,YH-001)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis,YH-002)和地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis,YH-003)的拮抗作用。[方法]采用平板对峙法和梯度稀释法对以上3种主要功能菌株的拮抗作用进行研究。[结果]噻虫嗪浓度为0.005%、0.050%、0.100%、0.200%时对胶冻样类芽孢杆菌(YH-001)的抑制率分别达到10%、10%、60%和100%,噻虫嗪浓度在0.1%、0.2%、0.3%、0.4%浓度时对地衣芽孢杆菌(YH-003)的抑制率分别达到2.13%、10.59%、20.21%、30.85%,而噻虫嗪浓度在0.1%、0.2%、0.3%、0.4%浓度时对枯草芽孢杆菌(YH-002)抑制作用一般。[结论]杀虫剂噻虫嗪对微生物菌剂具有一定的抑制作用,为实际生产提供理论依据。     

枯草芽孢杆菌QM3对番茄早疫病菌的拮抗机制初探

枯草芽孢杆菌QM3是从青海牦牛粪中分离筛选的一株高效桔抗菌株,尤其对番茄早疫病菌有显著的抑菌效果,为了揭示其抑茵机理,采用杯碟对峙生长和透明圈的方法可知．QM3菌株可以产生抗菌物质和胞外水解酶,此外,还有竞争生长空间和营养物质的趋势。经显微直接观察发现,QM3菌株对病原茵丝有明显的抑制生长和致畸作用。利用玻片微室培养法研究了QM3发酵液对病原茵孢子和芽管的影响．结果显示其对病原茵孢子的萌发和牙管伸长均有极显著的抑制作用（p〈0．01）。这一结果揭示了QM3菌株是通过多种抗茵机制的协同作用有效抑制番茄早疫病菌的．这为QM3菌株进一步的生防应用提供理论依据。     

枯草芽孢杆菌Xi-55对稻曲病菌的拮抗活性测定

 利用枯草芽孢杆菌Xi-55处理稻曲病菌和水稻种子,测定对稻曲病菌的孢子萌发影响、抑菌率、致畸性以及对水稻的促生性作用。结果表明,Xi-55的发酵液对稻曲病菌平均抑制率为54.64%,对稻曲病菌分生孢子萌发平均抑制率为69.33%,对水稻促生作用不明显。     

一株拮抗腐霉病菌的枯草芽孢杆菌的分离鉴定及诱变选育

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)可产生多种抗菌蛋白、抗生素及酶类抗菌物质,对多种植物病原真菌有良好的防治效果。通过从土壤中分离抑真菌活性的枯草芽孢杆菌,并进行UV-NaNO2物理化学联合诱变,获得一株对腐霉病菌(Pythium aphanidermatum)具有较强拮抗作用的菌株。突变菌株的生长速率、耐高温性均较出发菌株有较大提高,盆栽试验表明诱变菌株较出发菌株对腐霉病菌引发的黄瓜腐霉病具有更好的防治作用。     

西瓜内生枯草芽孢杆菌BS211的拮抗活性及盆栽防效

对从西瓜植株体内分离得到的内生拮抗枯草芽孢杆菌BS211的抗菌谱进行了测定;用5种培养基对BS211菌进行培养,测定了这5种BS211菌培养液无菌滤液的抑菌活性;采用硫酸铵沉淀法提取BS211菌抗菌粗提物,并测定了抗菌粗提物的抑菌活性和温度稳定性;运用砂培和盆栽方法进行BS211菌对西瓜枯萎病的防效试验;测定了BS211菌的宿主范围。结果表明:BS211菌对西瓜枯萎病菌等12种病菌都具有强烈的拮抗作用,而且拮抗性能稳定;BS211菌在5种培养基中的生长量没有显著差异而且均能产生抗菌物质,但在不同培养基中产生的抗菌物质的抑菌能力有差异;BS211菌液的硫酸铵沉淀物及上清液对不同病菌的抗性存在差异,说明BS211菌株产生的抗菌物质为复合物;BS211菌抗菌粗提物具有较好的温度稳定性,尤其是硫酸铵沉淀的上清液部分经121℃处理30 m in后活性无明显变化,对番茄青枯病菌仍有强烈的抑菌作用;BS211菌对西瓜枯萎病有显著防效;BS211菌能在辣椒等多种作物体内定殖,有较强的宿主适应性。     

内生枯草芽孢杆菌JL-B16生物学特性研究

对枯草芽孢杆菌JL-B16进行平板培养,并对菌体进行革兰氏染色、芽孢染色和荚膜染色,获得枯草芽孢杆菌JL-B16的培养特征和形态特征;采用温度梯度和pH梯度法测定枯草芽孢杆菌JL-B16的最适培养条件,绘制其40 h内的生长曲线,并对其生理生化指标进行测定,结果表明,枯草芽孢杆菌JL-B16菌落为黄色,菌落边缘不平整,菌体呈杆状,革兰氏阳性,有芽孢,无荚膜;枯草芽孢杆菌JL-B16最适培养温度为25℃,最佳生长pH为7.0,适宜生长pH 6.0～8.0.对枯草芽孢杆菌JL-B16进行生物学特性及生理生化指标的测定,为后续系统研究枯草芽孢杆菌JL-B16奠定了基础.     

玉米小斑病菌生物学特性研究

通过研究不同培养温度、不同培养pH值条件及不同营养条件对玉米小斑病病菌菌丝生长量及产孢量的影响.结果表明:①以PDA+VB1培养基培养的菌丝其生长速率及产孢量最大;②菌丝在30 ℃下生长速度快,生长量大,病菌孢子在25 ℃下萌发速度最快;③病菌菌丝在pH值为8时,生长速度最快,生长量也最大.     

内生枯草芽孢杆菌B215对香蕉弯孢霉叶斑病抑制作用初探

通过香蕉内生枯草芽孢杆菌菌株B215对峙培养及其菌体代谢物的活性测定结果表明,B215菌株对香蕉弯孢霉叶斑病原真菌具有很强的拈抗作用,其对峙培养能明显抑制靶标菌菌丝向四周均匀扩展,抑菌带宽度为0.4 cm;菌株滤液的EC50值达5.10%,主要是以代谢产物中的抗菌物质造成孢子和菌丝膨大成球状畸形,原生质外泄,孢子崩溃干瘪,致使病菌丧失侵染和繁殖能力.     

5种杀菌剂防治甜玉米小斑病田间药效试验

用生长速率法测定了10种杀菌剂对甜玉米小斑病的毒力,筛选出7.5％欧宝、22.5％扑海因、43％好力克、25％敌力脱和70％甲基托布津5种杀菌剂进行田间药效试验,结果显示:7.5％欧宝田间相对防效最好,平均防治效果为83.0％;其次是好力克,平均防效68.3％;70％甲基托布津和敌力脱防治效果较差.7.5％欧宝值得推广应用.     

拮抗细菌Bacillus subtilis A30对水稻病原菌的抑制作用

由杭州郊区水稻叶围分离得到ＢａｃｉｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＡ３０菌株，平板检测表明它对Ｘａｎ－ｔｈｏｍｏｎａｓｏｒｙｚａｅｐｖ．ｏｒｙｚａｅ、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａｓｏｌａｎｉ、Ｆｕｓａｒｉｕｍｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ和Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅｇｒｉｓｅａ等多种水稻病原真菌、病原细菌均有很好的拮抗作用．以水稻白叶枯病、水稻纹枯病为代表进行小区试验，结果表明，Ａ３０菌株的防病效果分别为５８．１％和３９．０％．Ａ３０菌株的培养去菌液经７０％饱和度（ＮＨ４）２ＳＯ４处理，拮抗物可被（ＮＨ４）２ＳＯ４沉淀，其拮抗粗提液经Ｄｉｏｌ１５０及ｐｒｏＲＰＣＨＲ５／１０等色谱柱分离得到两种对Ｘ．ｏｒｙｚａｅｐｖ．ｏｒｙｚａｅ的拮抗峰和两种对Ｒ．ｓｏｌａｎｉ的拮抗峰．     

致病疫霉拮抗细菌WL2鉴定及其发酵液稳定性分析

为了明确WL2菌株在抑制致病疫霉(Phytophthora infestans)菌丝体生长及防治马铃薯晚疫病等方面特性,本试验采用对峙培养法和离体组织培养法检测WL2菌株对致病疫霉的抑制效果,评价发酵液抑菌作用稳定性;通过培养特征、生理生化检测以及16SrDNA序列分析对WL2菌株进行分类鉴定。结果表明,WL2菌活体、菌液和发酵液对致病疫霉菌丝体生长的抑制率分别为84.7%,86.8%和82.4%;16SrDNA序列分析表明WL2菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),该菌发酵液经121℃高温处理后,抑菌率50%,经pH值2~12的条件处理后,发酵液抑菌率70%,在紫外灯(20 W)下照射12h后,发酵液抑菌率仍能达到77%以上,并且发酵液在4℃条件下可至少存放1年并保留其生防活性。这表明WL2菌株在开发成微生物制剂用于防治马铃薯晚疫病等方面具有突出的应用潜力。     

水稻白叶枯病菌拮抗细菌B56菌株的拮抗活性研究

B56 菌株经30 ℃振荡培养去菌体,其上清液经2 m ol/L 硫酸铵沉淀获得对水稻白叶枯病菌有拮抗活性的初提液。该初提液具有耐热性,经一定强度热处理后仍保持强的抑菌能力;抑菌效果在pH3～9 之间无明显差异;用胰蛋白酶、蛋白酶K 等处理后拮抗活性无明显变化。利用PhenylSepharose CL-4B疏水色谱柱和DEAE-Sephacel阴离子交换柱分离B56 菌株初提液, 得到一个具有拮抗活性的洗脱峰。该洗脱峰经SDS-PAGE检测发现具有一条分子量约为36 kD 的蛋白带。质粒提取和检测发现B56菌株存在一个稳定的内源质粒。     

生防菌菌株A的摇瓶培养条件及发酵工艺

[目的]优化生防菌菌株A的培养条件与液体发酵工艺。[方法]采用均匀试验设计方法、回归分析方法和分批补料发酵工艺,研究生防菌菌株A的培养条件与液体发酵工艺的优化。[结果]结果表明,适合菌株A摇瓶培养的最佳条件为：培养温度35℃,摇瓶装量12％,接种量3．0％,初始pH值7．2。20L发酵罐分批补料发酵参数为：种子培养基为YDC培养基,培养时间24h,接种量3．0％;发酵培养基：葡萄糖1．0％,酵母膏1．0％,CaCO3 1．0％,pH值7．2;流加培养基：葡萄糖1．5％,酵母膏0．5％,制成混合液一起流加,发酵8h开始流加;发酵周期（34±2）h,在以上发酵条件下,发酵液芽孢浓度达（3．410±0．151）×10^9cfu／ml。[结论]该试验条件下所获得发酵液芽孢数浓度较高,可用于进一步制备生防菌剂。     

枯草杆菌B826的化学诱变及筛选研究

枯草杆菌Ｂ８２６（ＢａｃｉｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＢ８２６）是一株对水稻白叶枯病菌有强烈拮抗作用的细菌．本研究测定了枯草杆菌Ｂ８２６的对数生长曲线并利用化学诱变剂硫酸二乙酯（ＤＥＳ）处理对数生长期的细胞,获得了１６０个存活的菌株,其中６个菌仍保留拮抗活性或拮抗活性有所提高,其余的均丧失拮抗活性．突变菌Ｎｏ．３５能稳定地保持高效的拮抗活性和遗传．     

河南省玉米小斑病菌生理小种鉴定及致病力分化

2013年从河南省4个地区采集玉米小斑病标样,对分离出的140个玉米小斑病菌菌株进行了生理小种鉴定和群体结构分析。结果表明,河南省玉米小斑病菌有T、C、S、O等4种生理小种,但各小种在地区间的分布存在差异,其中,O小种是河南省各玉米产区小斑病菌的优势小种,且在豫南分布最广泛,其次是C小种和S小种,T小种的比例最小。O小种具有不同致病力,强致病力菌株的出现频率较弱致病力菌株高,强致病力菌株主要分布在豫南地区,弱致病力菌株主要分布在豫北地区。     

枯草芽孢杆菌生防菌株NJ-18的发酵条件优化

通过单因子试验筛选到了适合枯草芽孢杆菌NJ-18生防菌株生长及其拮抗物质产生的最佳碳源为玉米粉和麦芽糖,最佳氮源为豆粕,最佳金属离子是Ca2+。用正交试验法确定了该培养基各组分的最佳含量为:玉米粉10g.L-1、麦芽糖30g.L-1、豆粕30g.L-1、CaCO31.5g.L-1;在确定适合该菌株的培养基组分基础上,对其培养条件进行优化试验,结果表明:初始pH为6.8、培养温度为28℃、250mL摇瓶装液量为90mL、接种量为2%(体积分数)、培养时间为36h、转速为180r.min-1时为该菌株的最佳培养条件。