柑橘芽变选种以及芽变性状形成机理研究进展

综述了柑橘芽变选种的成果。近年来,我国选育了崀丰、长红、新世纪、奉晚等脐橙品种和华柑2号椪柑、岩溪晚芦、光明早温州蜜柑等宽皮柑橘品种,还有锦橙101、红肉琯溪蜜柚等其他柑橘品种。介绍了RAPD、AFLP、ISSR、MSAP和基于反转录转座子的分子标记在柑橘芽变品种鉴别中的应用。阐述了部分柑橘芽变性状形成的细胞学机理和分子机理,指出目前对芽变的研究主要集中在反转录转座子的插入、DNA甲基化、基因结构和表达差异等方面。结合果树芽变研究的现状,对今后进行芽变研究提出了展望。     

短雄花序板栗芽变的AFLP分析

 利用AFLP分子标记技术对板栗短雄花序芽变及其母株进行了初步研究, 72种引物组合共产生5 129条清晰谱带, 多态性位点53个, 多态性2.05% , 相似性系数0.9897, 差异片段主要集中于300～900 bp之间。研究表明短雄花序芽变和对照个体之间变异与遗传物质的改变相关, 其中一些可能与雄花序变短的基因有关。     

利用转座子显示技术鉴别柑橘芽变品种

在依据柑橘全基因组信息的基础上,针对转座子序列开发了一种适合鉴别柑橘芽变品种的分子技术。以43个柑橘芽变品种和7个普通柑橘品种为材料,采用转座子显示技术(transposon display,TD)对转座子进行多态性分析。结果表明:5个DNA转座子(DTM63、DTM58、Helitron1、Spem和mPing2)和4个反转录转座子(Line1、LTR-Gypsy3、LTR-Gypsy5和Tcs2)可以较好地鉴别柑橘不同芽变品种。罗伯逊脐橙及其早熟芽变品种罗脐35号能被DTM63、Spem和mPing2鉴别;m Ping2能鉴别罗伯逊脐橙/罗脐35号、暗柳/红暗柳、普通椪柑/黔阳无核椪柑,以及红肉琯溪蜜柚/橙皮琯溪蜜柚这4对芽变品种。DNA转座子DTH3在甜橙芽变品种中多态性高,可以鉴别不同的甜橙芽变品种。因此,TD技术是一种值得关注的能有效鉴别柑橘芽变品种的分子标记技术。     

富士苹果AFLP体系的优化及其在鉴定早熟芽变中的应用

 以‘长富2号’苹果为材料,采用优化的AFLP技术对其早熟芽变与母株进行初步研究,筛选了64对引物,其中43对引物扩增结果理想,共产生了2,700条带。有4对引物在芽变与母株之间产生了7条差异片段,主要集中在350~800 bp之间。研究表明早熟芽变是由于遗传物质改变造成的,同时也说明利用该体系对苹果芽变进行分析和鉴定获得成功。     

适于AFLP分析用的柑橘DNA提取方法

利用改进的CTAB法提取了15个柑橘分类群的基因组DNA,并进行了AFLP分析。结果表明,该方法提取的DNA溶液无色透明,紫外分光光度计测得A260/A280为1.8~2.0,1%琼脂糖胶电泳为清晰的一条带,RNA去除干净,无降解现象。其AFLP分析(引物EcoRI-AAC+MseI-CAC)条带清晰,多态性好,说明此方法完全适于AFLP分析。     

脐橙早熟芽变及其早熟性状回复型材料的AFLP和MSAP分析

【目的】探究不同成熟期的脐橙在基因组、甲基化修饰水平和变异模式方面的差异,为挖掘早熟性状分子标记,探讨脐橙早熟芽变性状与DNA甲基化的关系及早熟性状相关候选基因的筛选奠定基础。【方法】以纽荷尔脐橙、纽荷尔早熟芽变品种赣南早脐橙及赣南早的早熟性状回复型突变体（性状回复型）为试材,采用扩增片段长度多态性技术（amplified fragment length polymorphism,AFLP）和甲基化敏感扩增多态性分析（methylation sensitive amplification polymorphism,MSAP）对其在基因组、甲基化修饰水平和变异模式方面的差异与脐橙早熟性状之间的关系进行探究。【结果】采用AFLP与MSAP技术均发现较多多态性条带,其中AFLP的多态性占比（5.504 6%～5.555 6%）高于MSAP(1.369 9%～3.211 0%),发现7对引物共8条多态性条带与脐橙熟期性状共分离。试材DNA甲基化发生频率为13.7614%～16.818 2%,平均14.911 6%,全甲基化为主要的甲基化方式。试材超甲基化发生频率显著高于去甲基化发生频率,性状回...     

基于AFLP技术对陈皮药用柑橘品种遗传多样性的研究

对目前市场流通的陈皮入药柑橘品种的遗传背景进行研究,分析其遗传特性差异。运用AFLP技术分析采自5个省份46份柑橘样品的遗传背景,用NTSYSpc 2.11软件进行聚类分析。结果表明:从12对引物中筛选得到6对AFLP引物组合,共扩增出548个DNA条带,多态性条带为472个,多态性位点百分率86.13%。通过构建系统进化树,在一定程度上实现了陈皮入药柑橘品种的划分。陈皮入药柑橘品种间遗传多样性比较丰富,AFLP分子标记可有效区分不同柑橘品种,为陈皮入药柑橘品种的筛选、划分提供了科学依据。     

我国梨芽变育成品种分析及芽变性状变异机制研究进展

通过对梨已育成芽变品种/品系进行整理分析,将芽变涉及的变异性状分为5大类和16小类,这些变异性状主要集中在大果型、果实皮色、成熟期、耐贮性及自交亲和性等方面。综述了不同芽变品种及相关性状的研究进展,大果型芽变分别由染色体加倍与控制果重基因变异2种因素引起;果实皮色芽变分别由花青苷、叶绿素、木栓合成途径中的基因变异引起;S-基因位点的变异形成了自交亲和性芽变。探讨了芽变选育在梨的不同品质性状改良中的有效性,并对梨芽变选育方法相关研究及技术的发展进行了展望。     

富士芽变系品种花粉形态初探

 用扫描电镜对富士和长富2号、福岛短枝富士、早熟富士、望山红等芽变系品种的花粉进行了形态观察。结果表明: 这些富士芽变系品种的花粉粒侧面观为长椭圆形, 极面观为三角形; 具3拟孔沟;花粉表面为条状纹饰, 有穿孔。‘福岛短枝富士’花粉粒大, 极轴长最长, 为42.25 μm; 赤道轴长为25.08μm, 略短于‘早熟富士’, 明显长于其它3个品种; ‘富士’的P /E值最大, 为1.75, 其次是‘长富2号’和‘望山红’, 分别为1.73和1.71, 三者明显大于‘早熟富士’的P /E值。P /E值可作为芽变品种鉴定的重要指标。每个品种的花粉纹饰各有特点, 可通过花粉的扫描电镜观察来鉴别以上的富士芽变系品种。     

变叶海棠起源的AFLP分析

 利用4对AFLP引物组合( EcoRⅠAAC +M seⅠCAC, EcoRⅠACG +M seⅠCAG, EcoRⅠACC + MseⅠCTA, EcoRⅠACT +MseⅠCAG) 对花叶海棠、陇东海棠和变叶海棠不同的变异类型进行分析, 共得到扩增位点231个, 其中多态性位点211个, 多态性比例为91.34% , 区分率达100%; 利用AFLP标记对变叶海棠、陇东海棠、花叶海棠的亲缘关系进行分析, 结果与形态学、细胞学和同工酶的结果一致, AFLP数据表明变叶海棠是花叶海棠和陇东海棠的杂交种, 从而在分子水平上揭示了变叶海棠的杂种起源。变叶海棠的变异类型是在漫长的进化过程中变叶海棠与花叶海棠和陇东海棠产生渗入杂交的结果。     

~(60)Coγ辐射对不同品种草莓离体叶片再生及芽生长的影响

以丰香和章姬草莓的无根无菌苗为试材,用10～40Gy 60Coγ射线辐照处理,以未辐照为对照,研究了60Coγ射线辐射对草莓叶片再生及植株继代增殖的影响。结果表明,叶片对辐射敏感,且丰香叶片比章姬叶片敏感,叶片再生的半致死剂量为10～20Gy;辐照后不同时间取叶接种,丰香叶片的不定芽再生率在剂量10Gy呈上升趋势,而其他剂量则几乎未见有变化,章姬在剂量10～30Gy,叶片的不定芽再生率提高较大,40Gy仍表现轻微下降;适宜的辐射剂量对草莓试管苗增殖有促进作用。     

部分板栗品种遗传多样性的AFLP分析

利用荧光标记AFLP技术,采用7对M+3和E+3引物组合对30份板栗和日本栗栽培品种进行了总基因组DNA水平上的多态性检测,共获得962条可统计的条带,其中852条呈多态性,多态性带百分率达89％。揭示了板栗丰富的遗传多样性。7组引物在30个品种中检测到数目不等的品种特异带型,对供试板栗品种具有一定的鉴别价值。7对引物能将30个板栗和日本栗品种完全区分开。聚类分析结果表明,多数来源地相同的板栗品种资源表现出较为密切的亲缘关系。     

果梅(Prunus mume)品种的荧光AFLP指纹分析

荧光AFLP以其操作简易、灵敏性高、可半自动化操作、可软件辅助分析等特点在果树品种鉴定以及遗传资源分析中具有明显的优越性。对荧光AFLP用于果梅品种鉴定进行了研究。所利用的8对选择性引物都可以获得清晰的AFLP指纹,并且任何一对引物都能够很好的区分这50个品种,表明了该技术适于快速鉴定大量果梅品种或用于种质资源的遗传分析。同时,研究利用AFLP指纹信息对来源我国江苏、浙江、广东、福建、云南、四川、湖南7个省份以及日本的果梅品种的遗传多样性指数进行了分析,结果表明,日本(0.2451),中国江苏、浙江(0.1912)果梅的遗传多样性水平明显高于其他几个省份,可能由于这2个地区果梅品种的来源渠道多或者存在其他物种的基因渗入。     

本地早橘的AFLP标记

采用AFLP技术分析了来自浙江黄岩的4个本地早橘材料(3个无核材料,1个有核材料),共筛选了72对E+3/M+3引物组合,从中选用12对多态性较好的引物进行最终扩增;最终得到9条清晰稳定的标记片断,分别命名为SL1～SL9;克隆测序后将所得碱基序列提交Genbank核酸序列数据库进行BLAST比对分析,结果表明,特异片段SL1与一种植物生长素输出蛋白编码基因PIN9有78%的一致性;特异片段SL2与一种植物反转录转座子基因有87%的一致性;特异片段SL4与植物叶绿体基因有94%的一致性;与功能基因较高的同源性为我们理解柑橘无核形成的分子机制提供了有价值的信息。     

8种柑橘类植物对柑橘碎叶病毒分子组成的影响

探究不同柑橘类型对柑橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)变异的影响,为研究寄主-CTLV的互作关系提供基础。将CTLV分离株HH和XLB分别嫁接接种于8种柑橘类植物,对CTLV分离株和获得的亚分离株样品进行CP基因的限制性长度多态性(RFLP)和单链构象多态性(SSCP)分析,以及序列比较。结果表明HH和XLB与其各自在不同柑橘植株上的亚分离株的CP/Hinf I RFLP酶切图谱无明显差异;混合侵染的CTLV分离株HH和其亚分离株之间的SSCP谱型存在差异,株系构成单一的CTLV分离株XLB与其亚分离株间的SSCP谱型差异不明显。通过序列分析进一步证实CTLV在不同寄主上其CP基因有几个核苷酸位点发生了变异。CTLV可能受寄主植物的影响发生了变异。     

荔枝品种亲缘关系的AFLP分析

 应用AFLP技术，对39个荔枝品种进行了遗传多样性分析及分类研究。筛选出适于荔枝AFLP分析的最佳引物组合3对，分别为EcoRI AAC+MseI CTG，EcoPd AGC+MseI CAT，EcoRI ACC+Msel CAT。在分子水平上，荔枝品种的遗传多样性并非形态学性状所体现的那样丰富。AFLP分析将39个荔枝品种分成了6组，与传统的以果皮龟裂片隆起类型为分类标准的分类没有一致性。初步建立起荔枝主要栽培品种的分子标记标准图谱。应用AFLP技术对来自两个不同地方的两个荔枝品种(桂味、妃子笑)进行了鉴别。     

龙眼品种(系)遗传多样性及亲缘关系的AFLP分析

 选用两对引物组合EcoRⅠ ACT+MseⅠ CTT和 EcoRⅠ ACT+MseⅠ CTC对46份龙眼材料进行AFLP分析，共得到扩增位点111个，其中多态性位点103个，多态性比例达92.69%，区分率达100%。对AFLP扩增结果进行聚类分析，根据相似系数0.76的水平可将46份龙眼品种(系)分为11个品种群。供试各品种多态性比例介于0.2703和0.4955间。福建东壁与广东东壁应为不同品系；早熟一号为一个新的品系。     

AFLP标记在大白菜遗传育种中的应用

AFLP标记是一种新的DNA分子标记技术。对AFLP标记的基本原理、技术流程和关键技术做了简要介绍,从亲缘关系与遗传多样性分析、遗传图谱的构建、特定性状的连锁标记、品种纯度鉴定与QTL分析等方面概述了AFLP标记在大白菜遗传育种中的应用进展,并对其应用前景进行了展望。