水稻白叶枯病菌tatB基因的克隆及功能分析

根据水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)PXO99的tatB基因序列设计引物,采用PCR方法从PXO99中克隆了tatB基因,命名为tatBXoo。通过同源重组的方法,构建了tatBXoo的插入突变株TBM,在含有X-gluc的抗性平板上筛选,并经Southern blot杂交验证确认。表型测定结果表明:与野生型相比,tatB突变株在水稻(寄主)上的致病性减弱,但在烟草(非寄主)上仍具有引起过敏反应的能力;tatB突变导致Xoo致病相关的重要表型如胞外多糖减少,游动性及趋化性减弱。但是,tatB突变不影响Xoo在基本培养基(MMX)中正常生长、胞外纤维素酶产生和生物膜形成。     

Ca2+对杜仲愈伤组织诱导及增殖效应的影响研究

以杜仲(Eucommia ulmoides)幼茎为外植体,进行杜仲愈伤组织诱导、增殖实验。在培养基中添加不同浓度的Ca2+进行筛选实验,以确定诱导、增殖培养基中的最佳Ca2+浓度。结果表明适度增加Ca2+浓度,可促进杜仲愈伤组织的诱导和增殖,并能改善愈伤组织的生长状态,增加愈伤组织增殖生长量。但若Ca2+浓度超过12.0 mmol/L,促进效果减弱。     

水稻OsFAH基因启动子的克隆及表达分析

以湘晚籼13号为材料,克隆了水稻OsFAH基因启动子,构建了OsFAH启动子与GUS基因融合表达载体,并转化拟南芥。序列分析结果表明,该启动子包含了启动子核心序列TATA–box和CAAT–box以及光响应元件等。GUS染色结果表明：在拟南芥幼嫩的子叶、下胚轴和真叶中,GUS的表达较强;随着叶片的衰老,GUS表达减弱;在根中,GUS主要在主根的维管柱内表达;黑暗处理会使GUS表达减弱;在黑暗条件下,OsFAH基因表达下调。     

黄独赤霉素受体基因DbGID1s克隆及生物信息学分析

【目的】克隆黄独赤霉素受体（GID1）基因DbGID1s,并对其进行生物学信息分析,为深入探究DbGID1s蛋白在黄独生长发育中的作用机制提供理论参考。【方法】采用RT-PCR技术克隆DbGID1s基因,利用生物信息学软件对其理化性质、结构域、磷酸化位点及系统发育进化进行预测分析。【结果】克隆获得4个DbGID1s基因序列,命名为DbGID1A、DbGID1B1、DbGID1B2和DbGID1C,GenBank登录号为MT648372、MT648374、MT648375和MT648373,长度分别为862、1273、1081和1164 bp,编码292、340、289和360个氨基酸残基。4个DbGID1s蛋白的分子量为32079.17~40301.83 Da,理论等电点（pI）为6.05~8.62,为不稳定的外在膜亲水性蛋白,不存在信号肽序列,其磷酸化位点主要以丝氨酸（Ser,S）为主,且4个蛋白的磷酸位点均有重合位点和突变位点,不仅具有α/β折叠水解酶超级家族羧酸脂肪酶水解活性区域,还具有激素脂肪酶（HSL）的保守结构域（HGG和GXSXG）和催化联合位点（S、D和H）。DbGID1s蛋白与其他植物GID1蛋白序列具有较高的氨基酸序列相似性,其中与山药的相似性达90%以上。【结论】DbGID1s基因具有多种植物GID1基因的基本特征,其编码的蛋白具有GID1蛋白典型的结构域,其可能参与赤霉素（GA）信号转导,调节黄独的生长发育。     

基于ICP-MS的拟穴青蟹蜕壳期前后蟹肉Ca2+、Mg2+浓度变化研究

采用石墨微波消解技术处理拟穴青蟹(Scylla paramamosain)蟹肉样品,ICP-MS同时测定Ca、Mg两种元素,标准曲线相关系数均≥0.995,前处理耗时短,消解效果良好。结果表明,拟穴青蟹在硬壳期时体内Ca2+、Mg2+平均含量为471、2 508 mg/kg,而蜕壳后分别为385、1 565 mg/kg,拟穴青蟹蜕壳前后Mg2+浓度差异不显著、Ca2+浓度差异显著。因此,为使拟穴青蟹生长过程中甲壳顺利蜕壳及硬化,建议在养殖池中合理补充Ca2+、Mg2+。     

牙鲆Toll样受体1基因全长cDNA的克隆及特征分析

[目的]克隆牙鲆TLR1(Toll like receptors)全长基因,并对其结构特征和表达规律进行分析。[方法]采用同源克隆和快速扩增cDNA末端技术,从牙鲆头肾组织中克隆出TLR1基因cDNA全长序列,并对该基因进行生物信息学和表达模式分析。[结果]牙鲆TLR1基因cDNA全长2 947 bp,开放阅读框(ORF)2 418 bp,编码805个氨基酸,包括26个氨基酸组成的信号肽、2个跨膜区、6个富含亮氨酸重复结构域(LRR)和一个TIR结构域(Toll/interleukin(IL)-1 receptor)。该蛋白的分子量为91.15 kDa,等电点为6.49。氨基酸序列同源性分析显示,牙鲆TLR1基因与其他脊椎动物的TLR1基因序列全长同源性达到69%～35%,TIR序列的同源性达到84%～62%。在系统发生树上牙鲆的TLR1基因首先与斜带石斑鱼聚类。通过荧光定量qRT-PCR检测,结果显示牙鲆TLR1基因的mRNA主要表达于肝脏、心脏和脾脏等组织。[结论]该研究结果为进一步研究TLR1基因的功能和开发牙鲆免疫增强剂奠定了基础。     

小鼠Lrh-1基因CDS区序列克隆及分析

肝受体类似物-1（liver receptor homolog-1,Lrh-1;NR5A2）是核受体的Ftz-F1亚家族成员,在胚胎发育、分化、胆固醇代谢、胆汁酸的动态平衡以及类固醇激素生成等都具有重要的作用。通过对健康的经产小鼠不同个体间Lrh-1基因CDS（Coding Sequence）特征域区测序及比对分析,结果发现,在LBD（Ligand binding domain）配体结合域区存在较大序列差异,有2种类型,1种与NM₀01159769相似,而另1种则与NG₀12313.1相似,两者序列差异较大,当翻译为多肽链后发现,第2种类型的序列中提前出现终止子,氨基酸数量相对减少83个,但这种缺失未导致该基因功能的丧失,表明该区段与Lrh-1蛋白质功能的不紧密性。     

褐飞虱R2D2基因的克隆及表达分析

R2D2蛋白广泛分布于各种生物体中,R2D2是si RNA介导的RNA干扰途径中的关键组分。R2D2含有一个串联的ds RNA结合功能域,与Dcr-2在体内形成杂合二聚体,在si RNA装载入RISC时发挥作用。本研究克隆了褐飞虱(Nilaparvata lugens St覽l)R2D2基因(NLR2D2),结果表明,NLR2D2基因全长1 673 bp,含有一个长1 005 bp的开放阅读框,编码335个氨基酸。NLR2D2蛋白与蚂蚁亲缘关系最近。利用q RT-PCR检测NLR2D2基因在褐飞虱不同发育阶段的表达,发现NLR2D2转录本在褐飞虱的所有发育阶段都有表达,在1龄若虫中表达量最低,随着生长发育表达量逐渐升高。NLR2D2基因的序列特征和表达谱非常保守,为其功能的分析提供了信息。     

水稻植酸酶基因OsPHY2启动子的克隆及生物信息学分析

水稻种子萌发后,新生器官分化和生长所需磷素主要来自于植酸酶对种子中贮存植酸及其盐类的降解.针对水稻植酸酶基因OsPHY2在萌发种子中优势表达、但其转录调控机制尚不明确的现状,本研究克隆了该基因的启动子.利用生物信息学工具对该启动子中含有的顺式调控元件分析表明,该启动子中除含有RNA聚合酶结合的重要保守元件TATA盒和调...     

水稻籼粳杂种不育性的多基因遗传不平衡

本文研究和讨论了水稻亚种间远缘杂种不育性的起源。就杂种不育性的遗传本质,作者提出了多基因遗传不平衡假说:远缘杂种不育性的遗传属于孢子体——配子体的互作,且存在一个多基因系统支配下的一种特殊的配子体选择方式对不育性起作用。具有r个遗传分歧的基因位点(无论连锁或独立)的远缘品种杂交F_1产生的配子中分为平衡配子和不平衡配子。平衡配子的r个基因位点为亲本基因组合类型,拥有亲本之一的整套基因系统而能正常发育;而不平衡配子含有双亲的部分基因系统,由于遗传分歧双亲的基因系统在单倍性细胞中不能很好地配合协调或互补,发育过程的障碍就可能产生败育。在平衡配子和极不平衡配子之间存在各种中间类型,配子体选择按S~(r+u)进行。我们的试验结果结合过去的研究,说明水稻亚种的分化是自然选择作用于遗传变异的结果,生殖隔离是籼亚种和粳亚种连续积累的遗传分歧的产物。     

苜蓿MtCDPK1基因序列分析、克隆及表达载体构建

[目的]克隆苜蓿MtCDPK1基因,对其进行序列分析,并构建其表达载体。[方法]根据MtCDPK1基因的全长序列设计引物来克隆该基因,并用生物信息学方法对该基因表达的蛋白序列进行分析,最后通过酶切、连接、转化构建该基因的表达载体。[结果]试验成功克隆到了MtCDPK1基因,并证明MtCDPK1蛋白属于Ca2+依赖的蛋白激酶,同时成功构建了该基因的表达载体。[结论]该研究为苜蓿的遗传转化提供了良好的基础。     

猪细小病毒NS1基因和VP2基因的克隆与序列分析

根据GeneBank 上发表的猪细小病毒(PPV)的基因组序列,分别设计扩增非结构蛋白NS1基因和结构蛋白VP2基因的特异性引物,采用PCR方法扩增PPV泰安株(PPV-TA)NS1基因和VP2基因.结果表明,PPV-TA NS1基因长1989 bp,编码662个氨基酸,与参考PPV NS1基因核苷酸同源性在98.3 %～99.9 %之间.PPV-TA NS1蛋白有3个糖基化位点分别是356NIS、446NFS、513NLT,除PPV Tomau/1/02在356位缺失了一个糖基化位点之外,PPV-TA与其他PPV参考毒株一致;这表明不同毒株NS1蛋白调节功能可能有差异.PPV-TA NS1蛋白的潜在磷酸化位点是Thr435和Ser473,与PPV参考毒株相同.NS1基因系统发生分析表明,PPV-TA与PPV china亲缘关系最近.PPV-TA VP2基因长1740 bp,编码579个氨基酸,与PPV参考毒株VP2基因核苷酸同源性在98.3 %～99.8 %之间.PPV-TA VP2蛋白的378D、383H、436S氨基酸残基决定了PPV的组织嗜性,与PPV-NADL-2和PPV-china相同,这表明这3个毒株的组织嗜性是一致的.但与其他PPV参考毒株有差异,这表明不同毒株在动物体内的组织分布是有差别的.PPV-TA VP2蛋白有9个线性抗原位点,与PPV NADL-2和PPV china的线性抗原位点是一致的,这表明具有相同的抗原特性.VP2基因系统发生分析表明,PPV-TA与PPV NADL-2亲缘关系较近.     

肉鸡腹水综合征患鸡肺脏组织钙沉积和Ca2＋-ATPase活性变化

肺动脉收缩和重塑在肉鸡AS发生过程中起着重要作用.本实验经采用右心导管法研究发现AS患鸡PASP 、PADP和mPAP极显著高于对照组(P <0.01).同时,采用焦锑酸钾沉淀法、电镜酶细胞化学法研究AS患鸡肺脏组织Ca2+和Ca2+-ATPase活性变化,发现AS患鸡肺脏组织中钙沉积量显著增多,且Ca2+-ATPase的电子密度颗粒显著减少或缺失.表明AS患鸡具有明显的肺动脉高压,其可能与肺脏组织,特别是肺动脉平滑肌细胞钙处理能力异常导致的钙离子浓度升高和肌浆网Ca2+-ATPase酶活性降低有关.     

Ca2+胁迫下伞花木和华山松脯氨酸及可溶性蛋白质含量的变化

为了解伞花木和华山松对Ca2+的适应性,筛选贵州喀斯特生境下(土壤含钙较高)适生植物奠定基础,对不同浓度Ca2+胁迫下伞花木和华山松叶片脯氨酸和可溶性蛋白质含量变化进行了检测.结果表明:在Ca2+胁迫下伞花木脯氨酸含量明显增多,而华山松脯氨酸含量变化不大;低浓度的钙可以增加伞花木和华山松可溶性蛋白的含量,高浓度钙处理下伞花木和华山松可溶性蛋白质含量都下降,但华山松可溶性蛋白质含量比伞花木的低.说明,伞花木比华山松更能适应贵州高钙的喀斯特环境.     

Ca2对黄瓜种子萌发及幼苗生理特性的影响

以黄瓜为试验材料,设置不同Ca^2＋浓度处理,研究了Ca^2＋浓度对黄瓜种子萌发和幼苗生理特性的影响。结果显示,低浓度Ca^2＋处理（0—0．05mg／L）对黄瓜种子萌发和幼苗生长有促进作用,当Ca^2＋浓度为0．05mg／L时最有利于黄瓜种子萌发和幼苗生长,其种子发芽率,发芽势,发芽指数,活力指数,根长,下胚轴长,下胚轴粗度,生物量,含水量均高于对照及其他浓度处理;幼苗体内的丙二醛含量,质膜相对透性,游离脯氨酸含量,可溶性糖含量及POD活性均呈下降趋势并在此浓度得到最低。但从O．5mg／L开始,随着Ca^2＋浓度增加,黄瓜种子萌发的各项指标开始下降,幼苗生长的各项生理指标开始上升,对黄瓜种子发芽和幼苗生长产生抑制作用,并在2．0mg／L时抑制作用得到最大。     

NaCl胁迫下钙对小麦幼苗保护酶及膜质过氧化的影响

:以抗盐和盐敏感2种不同基因型的冬小麦为试验材料,研究Ca2+对NaCl胁迫下不同生长阶段的小麦幼苗保护酶系统和膜脂过氧化的影响.结果表明,1% NaCl胁迫对小麦幼苗造成了一定程度的氧化伤害.对抗盐品种的氧化伤害晚于敏感品种,且程度轻.适当浓度外源Ca2+处理能够提高NaCl胁迫下小麦幼苗体内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)的活性,抑制过氧化作用产物丙二醛(MDA)的积累,表明适当浓度的Ca2+处理对提高小麦抗盐能力是有益的,缓解盐害的作用与基因型、钙浓度和胁迫时间等因素有关.     

水稻硅转运子基因的克隆与表达载体的构建

提取水稻根中总RNA,根据NCBI中水稻硅转运子基因Lsil(AB222272)、Lsi2(AB222273)的mR-NA序列设计2对引物,采用RT-PCR技术扩增硅转运子基因Lsil、Lsi2.并利用DNA重组技术分别构建了两个植物表达载体pCAMBIA2300-35S-Lsil-OCS和pCAMBIA2300-35S-Lsi2-OCS.克隆的水稻硅转运子基因Lsil、Lsi2与NCBI中已发表的核苷酸序列的同源性为99.33%、99.65%,氨基酸同源性都为100%.为后续培育其他硅转基因树木或农作物,增加其硅元素转运能力、提高其抗逆性奠定了实验基础.     

外源钙对盐胁迫下盐地碱蓬生长影响的初步探讨

以不同浓度的Ca2+(0、20 mmol/L)及不同浓度的NaCl(0、100、400 mmol/L)处理盐地碱蓬(Suaeda salsa)幼苗,探索盐渍条件下Ca2+对该植物在生理和分子水平上的影响。结果表明,外源Ca2+处理使盐地碱蓬幼苗鲜质量明显高于对照,Ca2+、K+浓度也高于对照;叶片液泡膜Ca2+-AT-Pase活性升高。Ca2+/H+逆向转运体(Ca2+/H+antiporter)基因的表达量不仅随外源Ca2+处理而升高,而且NaCl处理后也明显升高。以上结果说明,盐对盐地碱蓬生长的促进是依赖Ca2+的,维持盐胁迫下胞质Ca2+浓度稳态的运输体主要是液泡膜Ca2+/H+逆向转运体。     

Ca~(2+)浸种对酸雨胁迫下紫花苜蓿种子萌发的响应

为筛选出能够提高紫花苜蓿(飞马和维多利亚)抵抗酸雨胁迫能力的适宜Ca2+浓度,通过浸种试验研究了酸雨胁迫下,不同浓度的Ca2+浸种对紫花苜蓿发芽、幼苗鲜重、干重、种子活力的影响。结果表明:Ca2+浓度为5 mmol/L时,飞马和维多利亚的发芽率、幼苗鲜重和干重、发芽指数和简化活力指数与对照(去离子水浸种)相比,差异均达到极显著水平(P0.01)。Ca2+浓度为15 mmol/L时,发芽势、发芽率、幼苗鲜重和干重、发芽指数和活力指数6个指标达到较高水平。Ca2+浓度为5~15 mmol/L时,紫花苜蓿抗酸胁迫的能力增强。Ca2+浸种对维多利亚抗酸能力的增强作用高于飞马。为在贵州省及其他地区的酸性环境条件下种植紫花苜蓿选用适合浓度Ca2+浸种提供一定的参考作用。     

逆境胁迫下植物细胞中Ca^2＋作用的研究进展

本文论述了Ca2＋在植物细胞的结构和生理功能方面的重要作用,在胁迫条件下（低温,干旱,热激等）,胞内Ca2＋常常显著增加,这种增加可以启动基因表达,激活保护酶活性,并参与活性氧代谢使植物能够适应环境胁迫。