2株猪源乳酸菌对低pH值和胆盐耐受性及热稳定性研究

研究了分离自仔猪肠道的乳酸菌L5和L7对低pH值、胆盐的耐受性。结果表明，pH值在2．5、3．5和4．5时，L5菌株处理150min对其无显著影响，在pH1．5时经30min处理，L5仍可维持较高的存活率；L7菌株在pH3．5和4．5条件下经150min处理后可保持较高的存活率，而在pH1．5和2．5条件下经处理30min后菌株数量显著下降。胆盐对L5和L7菌株的生长有一定影响，但低浓度短时间内影响较小。在同一胆盐浓度下，随培养时间的增长，活菌数下降。当胆盐浓度高于0．2％时，L5和L7菌株的生长极差。热稳定性试验结果表明，L5菌株在50℃下可成活，且呈正常生长趋势，但其对80℃及以上的耐热能力显著降低。     

乳酸菌培养条件的优化

1材料与方法 1．1菌种 乳酸菌菌种由广东绿百多生物技术有限公司提供。     

蝌蚪源乳酸菌的人工高密度培养条件的优化

本文研究了蝌蚪源乳酸菌生长繁殖的环境条件(温度、接种量、起始pH等)和培养基组成(氮源、碳源等),优化确定了蝌蚪源乳酸菌密度培养的适宜培养条件起始pH6.5,培养温度37℃,培养基配比为麦芽糖∶乳糖(1∶1)2%、牛肉浸膏10%、缓冲盐A0.5%,NaCl0.25%,MgSO40.1%,接种量5%,结合优化的培养条件,可使蝌蚪源乳酸菌活菌数得到进一步提高。     

响应面法优化乳酸菌产抗真菌物质的培养条件

为提高实验室保存的乳酸菌N22产抗真菌物质的产量, 以毕赤酵母为指示菌, 产生的抑菌圈大小为评价指标, 通过响应面法优化乳酸菌产抗真菌物质的培养条件。对MRS培养基碳源、氮源进行优化, 考查不同温度、初始pH值和发酵时间对乳酸菌产抗真菌物质的影响, 温度、初始pH值和发酵时间是主要影响因素, 最后采用Box-Behnken试验设计和响应面法分析确定乳酸菌最佳培养条件为34.16 ℃、初始pH值为5.33、培养35.44 h, 此时, 最大抑菌圈直径为16.34 mm, 可取率为97.90%。经验证, 最大抑菌圈直径为16.58 mm。该培养条件增加了乳酸菌抗真菌物质的产量。     

耐低温乳酸菌的分离与优化培养

从青贮玉米(Zea mays)以及新鲜泡菜中分离乳酸菌,通过初筛和复筛获得1株产酸能力较强的耐低温乳酸菌L2;对其进行了形态学描述和生理生化鉴定,对照伯杰式手册确定其种属;采用Box-Behnken实验设计进行培养条件优化实验,确定了该菌的最佳发酵条件。结果表明,该菌的最佳发酵条件为接种量3.1%、初始pH6.4、培养温度18.4 ℃。     

乳酸菌发酵饲料对猪生长性能和猪舍环境的影响

试验主要研究了乳酸菌发酵饲料对猪生长性能和猪舍环境的影响。试验结果表明,乳酸菌发酵饲料能明显降低料肉比,增加平均日增重(日增重最高达到48 g),并且2条生产线猪舍氨含量平均分别降低了约38%和50%,尿中总氮和氨氮平均约降低25%左右。     

猪体外受精胚胎培养条件优化的研究

试验将卵母细胞经过体外成熟、体外受精后在不同条件的PZM-3液中培养,检测卵裂率、囊胚的发育率和质量,目的是进一步优化培养条件用于体外生产猪胚胎.     

响应面法优化青贮饲料乳酸菌的培养条件

为更好地提高青贮饲料的质量,降低微牛物接种剂的生产成本,本研究对采集自德国青贮窖中的主导菌群中一株乳酸菌GLP01进行了分子学鉴定,并对培养条件进行了优化.通过单因素试验设计研究培养基组成(碳源,氮源)和培养条件(温度、接种量,起始pH等)对GLP01乳酸菌生长繁殖的影响;采用二次响应面分析方法对GLP01培养条件进行优化,得到GLP01生长模型,以及取得模型最优值时各因素的水平.单因素试验结果表明,GLP01的最适碳源是果糖,最佳氮源是酵母粉;二次响应面分析确定的GLP01最佳培养条件是起始pH 5.47、培养温度35.3℃、接种量8.16%.结果提示,乳酸菌GLP01可以作为微生物接种剂制作青贮饲料,但青贮效果仍有待研究.     

猪链球菌病二价灭活疫苗候选株培养条件的优化及其安全性试验

筛选对猪致病力强、免疫原性良好的猪链球菌病兰氏C群LN01株和猪链球菌Ⅱ型LN05株,通过优化培养条件,LN01株和LN05株培养菌数最高分别为1.2×109和2.8×109CFU/mL;LN01株未见溶血素产生,LN05株溶血素效价为1∶64;脱毒剂A(甲醛)对其毒素的脱毒作用不明显,37℃脱毒30d,对仔猪的安全剂量为5mL;脱毒剂B的脱毒时间缩短为3d,安全剂量增加到10mL;试验还证实,37℃和60℃脱毒温度对本菌液脱毒效果无明显差异.     

一株沙福芽孢杆菌的耐受性研究

为了利用沙福芽孢杆菌产纤维素酶的特性改进生物堆肥技术,对一株沙福芽孢杆菌的抗逆性进行了研究,探究了培养条件和抗生素对芽孢形成率及芽孢数量的影响。结果表明：温度37 ℃、pH=7、装液量125 ml、培养时间24 h为沙福芽孢杆菌最佳产孢条件;初始pH为7时菌液的活菌数为1.54×10⁸ cfu/ml,芽孢数为1.72×10⁸ cfu/ml,产孢率为89.5%;沙福芽孢杆菌对高浓度的赤霉素有抗性,对低浓度的硫酸链霉素、硫酸卡那霉素有抗性。     

酿酒酵母培养条件优化

采用单因素试验及响应面试验对酿酒酵母培养条件进行优化。先对酿酒酵母菌体干质量培养的重要条件进行单因素试验,筛选培养温度、培养时间、培养基初始pH、菌龄4个重要影响因素,根据Box-Behnken设计原理设计响应面试验。结果表明,建立以酵母菌体干质量为响应值的多元二次回归方程,分析模型得出酿酒酵母最优培养条件为：培养温度23.5℃、培养时间71.5 h、培养基初始pH=6.5、菌龄12 h。在最优培养条件下酵母菌体干质量达到（29.70±0.04）g/L,较优化前提高了33.12%。     

猪细小病毒S-1A株对细胞的适应性及其培养条件的优化

将猪细小病毒S-1A株在不同的细胞中培养,测定病毒含量,以确定适合猪细小病毒S-1A株增殖的细胞。结果表明：猪细小病毒S-1A株能在猪肾传代细胞系(PK-15)、猪肾原代细胞(PK)、猪睾丸细胞(ST)和仔猪肾细胞(IBRS-2)中生长增殖,不能在幼仓鼠肾细胞系(BHK-21)、绿猴肾细胞(Vero)和鸡胚成纤维细胞(CEF)中增殖;当ST细胞生长至2/3单层时,将猪细小病毒S-1A株种毒液100倍或1000倍稀释后接种ST细胞,37℃培养96～144h,获得的病毒载量最高。     

胆盐水解酶筛选及酶法提制鸡胆汁酸的研究

试验旨在从常见双歧杆菌筛选获得高活性胆盐水解酶的菌株并用于鸡胆汁酸的提制。从5种常见双歧杆菌菌株(两歧双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、青春双歧杆菌、乳双歧杆菌、长双歧杆菌)中,通过平板Ca²⁺沉淀法及茚三酮法对活性双歧杆菌进行酶活评价,将高活性菌株的粗酶用于鸡胆汁酸的提制,使用薄层色谱法和高效液相法对所制胆汁酸进行定性和定量检测。结果显示：4种双歧杆菌(两歧双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、青春双歧杆菌和乳双歧杆菌)对甘氨型和牛磺型鹅去氧胆酸均具有水解活性,婴儿双歧杆菌对甘氨鹅去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸比酶活均显著高于其他3种双歧杆菌(P<0.05),比酶活分别为0.48 U/mg和0.27 U/mg。酶法工艺提制鸡胆汁酸的得率为5.34%,提取物中鹅去氧胆酸(CDCA)含量为70.7%。结果表明：婴儿双歧杆菌具有高活性胆盐水解酶,酶法工艺提制鸡胆汁酸反应条件温和,提取物纯度较高,较为节能环保。     

丁酸梭菌培养条件优化

本试验采用单因素试验和正交试验的方法对丁酸梭菌DS的生长特性和培养条件进行了研究,旨在为丁酸梭菌的工业规模化生产提供理论依据.结果表明,DS最佳培养条件是:培养基起始pH为7.3,温度37℃,培养时间24h,接种量为3％.最适培养基成分为:葡萄糖109,豆粕159,玉米粉79,硫酸镁0.2g,硫酸铵0.2g,磷酸氢二钾0.5g,磷酸二氢钾0.5g,碳酸钙0.3g,蒸馏水1 000mL.     

猪源A组轮状病毒Vp4基因工程乳酸菌电转化条件的优化

为了提高pW425et-Vp4基因工程乳酸菌的转化效率,对影响电转化效率的主要因素进行研究,以得到最佳的电转化条件。试验结果表明,猪轮状病毒Vp4基因工程乳酸菌电转化的最佳条件为:当感受态细胞的D_{600 nm}值为0.4时,在MRS培养基中加入1%甘氨酸＋0.3 mol/L蔗糖,电场强度为11 kV/cm,脉冲时间为3.8 ms,电击后细胞复苏3~4 h等条件时,得到较高的转化效率,最高可达3.8×10⁴ CFU/μg DNA。     

一株乳酸菌的分离鉴定及生物学特性研究

以鸡肠道和泡菜为分离源,采用常规微生物学方法分离乳酸菌,筛选到一株产酸性能良好的菌株W7。结合对菌株的形态观察、生理生化试验以及16S rRNA基因序列分析,对菌株进行鉴定,并对W7进行特性试验研究。结果表明,W7为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）,在培养22h时,活菌数最高;耐酸效果好,在pH值为2.0时,存活率仍然为100%;在胆盐浓度为0.30%时,仍然可以生长;抑菌效果较好;黏附率为79.9%。     

乳酸芽孢杆菌芽孢形成培养条件优化研究

乳酸菌是一类能发酵糖类（主要为葡萄糖、乳糖等）产生乳酸的细菌（孟昭赫等,1993）,是正常人肠道中极为重要的生物菌群之一。以乳酸菌等有益菌制成的活菌制剂,是近年来国内外迅速崛起的一类生物制品（郭本恒,2004）。国外用生乳酸芽孢杆菌做人、畜用的微生态制剂已有商品生产（宋大新,1996）。     

复合乳酸菌制剂的耐受性和抑菌性研究

本试验将四株饲用乳酸菌,制成复合乳酸菌制剂,通过单因素试验设计,以存活率为指标,研究复合微生态产品对高温、酸、胆盐的耐受性,采用琼脂稀释法、牛津杯法分别测定复合乳酸菌制剂对不同种类饲用抗生素的耐受性及对致病菌的抑制作用。结果表明:复合乳酸菌产品在温度65℃处理2.5、5、7.5 min以及85℃处理2.5 min对其存活率没有影响,但当85℃处理5 min,存活率下降至48%;p H为3时处理90 min存活率高达80.54%。对0.3%猪胆盐的耐受性较好,处理1 h存活率为73.52%;对抗生素(药物饲料添加剂)杆菌肽锌、亚甲基水杨酸杆菌肽耐受性最强,对吉他霉素的耐受性最差;可抑制致病菌株大肠埃希氏菌的生长。体外评价试验结果表明,复合乳酸菌制剂具有很好的益生特性,可进一步研究其在动物上的应用效果。     

嗜水气单胞菌LY-1株培养条件的优化研究

人工养殖中国林蛙是20世纪90年代后期新兴起的一种养殖模式,但疾病问题已成为制约林蛙规模化养殖的主要问题。分析发现,这主要是因为林蛙患嗜水气单胞菌感染引起的败血症（俗称“红腿病”或“出血病”）而造成大批死亡。该病传染性强,死亡率高。目前嗜水气单胞菌疫苗研究的热点主要集中在基因工程苗、亚单位疫苗、弱毒疫苗、灭活苗上。然而,上述各种疫苗的研制均需要嗜水气单胞菌的大规模培养。为大规模发酵嗜水气单胞菌,更好地收获所需抗原,作者对培养基成分进行优化并从生长因子、葡萄糖、不同接种量、pH值、微量元素等方面进行研究,为规模化制备成本低廉的疫苗提供理论依据。