嗜酸乳杆菌耐性菌株的选育及培养条件研究

试验旨在通过逐步提高培养基酸度及胆盐质量分数的方法,选育出耐酸及耐胆盐效果较强的菌株。以菌珠L102为原始菌株逐步选育出耐性菌株L102b。该耐性菌株在p H 2.0及p H 2.5酸度条件下,存活率较原始菌株提高45.0%以上,在p H 1.5的极低酸度条件下,亦有20.3%的存活率;胆盐质量分数为0.1%~0.3%存活率均在85.0%以上,胆盐质量分数为0.5%时仍有46.2%的存活率。对比原始菌株L102耐酸性能及耐胆盐性能均有明显提高。通过研究单因素及正交试验对选育的耐性菌株L102b的发酵条件,得出菌株L102b的最佳培养条件:转速100 r/min,培养温度35℃,初始p H 6.4,装液量300 m L。     

戊糖片球菌的耐酸及耐胆盐能力研究

本实验对戊糖片球菌进行耐酸、耐胆盐能力表征及模拟胃液和模拟肠液实验.结果表明,在pH 2.5、3.5条件下培养4h后,戊糖片球菌PP的活菌数分别能达到108 cfu/mL和1010 cfu/mL以上.在胆盐质量分数为0.1％、0.2％和0.3％的MRS培养基中培养4h后,戊糖片球菌PP生长良好,活菌数均在106cfu/mL以上,其中胆盐质量分数为0.1％时,戊糖片球菌PP存活率能达到133.3％.模拟胃液和模拟肠液实验结果表明,该菌株能够有效通过胃环境,能在肠道中繁殖.结果可见,戊糖片球菌PP具有较强的耐酸耐胆盐能力,符合微生态制剂和乳酸菌发酵功能食品菌种的要求.     

酸驼乳中益生乳酸菌的分离筛选

旨在评价酸驼乳中乳酸菌的益生特性。采用常规方法从内蒙古阿拉善牧区采集的酸驼乳中分离乳酸菌;利用16S r DNA PCR及序列分析法对分离到的乳酸菌进行种水平鉴定;通过体外抑菌试验和耐酸、耐胆盐试验评价乳酸菌的益生特性。结果表明,从酸驼乳中分离到的1株疑似乳酸菌被鉴定为短乳杆菌,将其命名为Lactobacillus breris LT;该菌株的代谢产物对4种常见肠道性致病菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌、单增李斯特菌)均表现出良好的抑菌特性,且抑菌特性不受胃蛋白酶和胰蛋白酶的影响;该菌株能够在低p H值(2.0、3.0)和高胆盐含量(0.1%~0.3%)的MRS培养基上生长。该研究结果为酸驼乳中优质乳酸菌资源的开发利用提供了科学依据。     

复合乳酸菌制剂的耐受性和抑菌性研究

本试验将四株饲用乳酸菌,制成复合乳酸菌制剂,通过单因素试验设计,以存活率为指标,研究复合微生态产品对高温、酸、胆盐的耐受性,采用琼脂稀释法、牛津杯法分别测定复合乳酸菌制剂对不同种类饲用抗生素的耐受性及对致病菌的抑制作用。结果表明:复合乳酸菌产品在温度65℃处理2.5、5、7.5 min以及85℃处理2.5 min对其存活率没有影响,但当85℃处理5 min,存活率下降至48%;p H为3时处理90 min存活率高达80.54%。对0.3%猪胆盐的耐受性较好,处理1 h存活率为73.52%;对抗生素(药物饲料添加剂)杆菌肽锌、亚甲基水杨酸杆菌肽耐受性最强,对吉他霉素的耐受性最差;可抑制致病菌株大肠埃希氏菌的生长。体外评价试验结果表明,复合乳酸菌制剂具有很好的益生特性,可进一步研究其在动物上的应用效果。     

鸡源凝结芽孢杆菌的分离鉴定及耐受性分析

【目的】 试验旨在寻找1株性能稳定、环境耐受性强的凝结芽孢杆菌菌株,以在实际生产中发挥其替抗功能。【方法】 本研究采集160日龄健康海兰褐蛋鸡的粪便样本,进行细菌分离纯化,并对分离菌进行形态学特征观察、生理生化鉴定、16S rDNA测序分析。通过绘制该菌的生长动力曲线确定其生长规律;利用耐酸、耐胆盐试验分析该菌株的耐受性;通过单因素试验对分离菌株的培养条件进行优化。【结果】 分离菌在普通培养基上长出表面粗糙、不规则的灰白色菌落,镜检为杆状、芽孢端生的革兰氏阳性菌。结合生化试验及16S rDNA基因序列分析综合鉴定该菌株为凝结芽孢杆菌,命名为NJ001。生长动力曲线表明,7~24 h为该菌株的对数生长期,24 h活菌数达到顶峰,凝结芽孢杆菌NJ001的最佳培养时间为24 h;耐受性试验结果显示,该菌株pH 3.0温育2 h存活率为59.5%,pH为4.0时存活率达到87.6%以上,对酸有较强耐受力;0.3%胆盐处理2 h存活率为54.0%,胆盐浓度升至0.5%时存活率仍有50%以上,该菌对胆盐有较强的耐受性。单因素试验结果发现,该菌的最佳培养温度为40 ℃,接种量2%,初始pH 7.0,摇床转速220 r/min。综合以上最佳培养条件,菌株活菌数可达最大值,为1.93×10⁸ CFU/mL。【结论】 所分离的菌株为具有较强耐酸耐胆盐特性的凝结芽孢杆菌,其最适生长条件易于实现;且与动物体内胃肠道环境基本吻合,具备作为微生态制剂的应用潜力。     

不同检测因素对地衣芽胞杆菌菌落数的影响

为了探究不同检测因素对地衣芽胞杆菌菌落数的影响,该试验对标示菌落数为220亿CFU/g的地衣芽胞杆菌菌粉样品在不同的温度条件下,采用不同的稀释方法、不同的培养基进行处理。结果表明,不同的稀释方法对地衣芽胞杆菌菌落数的检测误差率影响最小,培养基的影响作用次之,而80℃高温处理10 min对地衣芽胞杆菌菌落数的检测误差率影响最大。     

大熊猫源乳酸菌的降胆固醇作用研究

为筛选出高效降胆固醇乳酸菌,本试验利用MRS培养基从大熊猫粪便中分离得到乳酸菌,采用磷硫铁比色法对该乳酸菌的体外降胆固醇能力进行测定,并利用经典分类法对其进行细菌学鉴定。结果表明:该乳酸菌为乳杆菌属嗜酸乳酸菌,能够耐受p H值为3的酸性环境和0.3%的胆盐,在对数生长期降胆固醇能力最强,胆固醇降低率为29.8%。     

2株猪源乳酸菌对低pH值和胆盐耐受性及热稳定性研究

研究了分离自仔猪肠道的乳酸菌L5和L7对低pH值、胆盐的耐受性。结果表明，pH值在2．5、3．5和4．5时，L5菌株处理150min对其无显著影响，在pH1．5时经30min处理，L5仍可维持较高的存活率；L7菌株在pH3．5和4．5条件下经150min处理后可保持较高的存活率，而在pH1．5和2．5条件下经处理30min后菌株数量显著下降。胆盐对L5和L7菌株的生长有一定影响，但低浓度短时间内影响较小。在同一胆盐浓度下，随培养时间的增长，活菌数下降。当胆盐浓度高于0．2％时，L5和L7菌株的生长极差。热稳定性试验结果表明，L5菌株在50℃下可成活，且呈正常生长趋势，但其对80℃及以上的耐热能力显著降低。     

一株鱼源植物乳杆菌的部分生物学特性研究

为了从实验室现有的3株乳酸菌中筛选出对维氏气单胞菌、嗜水气单胞菌抑菌效果较好的乳酸菌,并对其部分生物学特性进行研究,试验采用打孔方法从3株菌中筛选出抑菌效果较好的菌株,并对该菌株在不同胆盐浓度、不同pH值、高温环境下的生长情况以及对胰蛋白酶的耐受能力和生长能力进行测定。结果表明:3株乳酸菌中,仅植物乳杆菌C20015对致病菌均有抑制作用,其余两株菌对其无抑制作用;C20015在抗逆性试验中,随胆盐浓度的增加,其活菌数下降,但活菌数均达到1.0×10~5cfu/m L以上;在pH值为2时,C20015的活菌数明显下降,当pH值大于3时,活菌数均达到1.0×10~6cfu/m L以上;在耐高温试验中,50℃时C20015活菌数下降不明显,但60℃以上几乎无菌生长;胰蛋白酶对活菌数无影响;植物乳杆菌C20015在0~10 h内快速增长,从10小时开始进入生长稳定期,直到20小时细菌数达到最大值3.6×10~9cfu/mL。说明植物乳杆菌C20015对水产类致病菌有一定的抑制作用,且对低pH值、高浓度胆盐、胃蛋白酶具有一定的耐受能力,有望应用于水产养殖饲料。     

1株关岭黄牛瘤胃源发酵乳杆菌的分离鉴定及其生物学特性分析

为了分离具有优良益生特性的牛源乳酸菌，探究其用于畜牧微生态制剂研发的潜力，试验采集健康关岭黄牛瘤胃液，接种于MRS肉汤培养基富集后分离乳酸菌，使用含0.3%胆盐的无菌PBS初步筛选耐胆盐乳酸菌，通过革兰氏染色镜检和16S rRNA测序进行鉴定，并对分离菌的生长特性、产酸能力、耐受特性、药物敏感性、抑菌特性及细胞黏附性进行分析。结果表明：经筛选分离得到1株菌，命名为NCO,经革兰氏染色、镜检和16S rRNA测序鉴定为发酵乳杆菌；该菌具有良好的生长和产酸能力，培养4 h后进入对数生长期，16 h后达到稳定期，培养28 h的菌液pH值为4.43;对低pH值、胆盐、胃液和肠液环境具有耐受能力；该分离菌对万古霉素、庆大霉素、卡那霉素、链霉素耐药；其培养上清液对金黄色葡萄球菌和鸡白痢沙门氏菌具有极强的抑制作用；该分离菌对Caco-2细胞的黏附数量为43.5 cfu/个，具有一定黏附性。说明分离菌NCO具有优良的生物学特性，有潜力作为优良微生态制剂的候选菌株。     

蛋鸡肠道嗜酸乳杆菌的分离鉴定及益生特性研究

为筛选具有益生特性的嗜酸乳杆菌,采用常规方法从山东省潍坊市及周边地区蛋鸡肠道内容物样本中分离乳酸菌。通过测定发酵液p H值,筛选产酸性能较好的菌株;采用PCR及测序技术对筛选到的菌株进行分子生物学鉴定;采用常规方法评价筛选到的菌株的益生特性。在分离到的9株乳酸菌中,筛选到1株产酸性能较好的菌株(命名为XMR-3),分子生物学鉴定结果显示,该菌株为嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)。该菌株在培养6 h之后进入对数生长期,至16 h时,活菌数最高,此时培养液p H值为3.92;在p H值为3.0和4.0的酸性环境中培养4 h后,存活率均在99%以上;在0.3%的胆盐环境中,存活率为87.3%;对4种常见致病菌的抑菌圈直径均在20 mm以上。筛选到的菌株表现出一定的益生特性,在畜禽微生态制剂产品开发方面具有应用潜力。     

B型诺维氏梭菌产毒素主要影响因子研究

为了掌握B型诺维氏梭菌同宝菌株(TB05)产毒特性,应用不同培养基、不同p H和不同培养时间进行最佳产毒比较试验。结果表明,该菌在含1.0%葡萄糖的VF培养基中37℃72h产毒达最高点,碳原比例及p H对本菌的生长及产毒具有较大的影响,1%葡萄糖、p H 8.0~8.4最适于本菌产毒。     

酿酒酵母菌生长特性的研究

为探究温度和p H值对酿酒酵母菌生长特性的影响,采用单因素实验设计,检测了不同温度、不同初始p H值对酿酒酵母菌生长的影响。结果表明,培养基p H值和温度对酿酒酵母菌的生长具有明显的影响,当p H值为3.0或者8.0,温度为20℃或高于40℃时,酿酒酵母菌的生长明显受到抑制;酿酒酵母菌在培养基初始p H值为4.0~6.0,温度在25~30℃时生长良好。     

紫花苜蓿根腐新病原-厚垣镰孢菌生物学特性研究

针对紫花苜蓿根腐致病菌厚垣镰孢菌(Fusarium chlamydosporum)在不同温度、光照、p H和多种碳氮源条件下的生物学特性,采用菌饼法进行了测定,并对不同碳氮源下菌落产色素情况进行了连续观察。结果表明:该病原菌在5~40℃均可生长,最适温度为25℃;当p H 4.0~12.0时均能生长,最适宜p H为7.0;全黑暗条件有利于菌丝生长,菌丝生长最适碳源、氮源分别为山梨醇和蛋白胨,碳源氯醛糖及除蛋白胨以外8种氮源均不利于菌丝的生长。含不同碳氮源培养基可诱导菌丝产生不同色素,且颜色变化差异大,在不同的生长阶段,色素颜色也会发生变化。     

桑褐斑壳丰孢菌Phloeospora maculans的主要生物学特性研究

桑褐斑壳丰孢(Phloeospora maculans)是近几年鉴定的云南蚕区桑园发生桑褐斑病的主要病原菌之一。采用菌丝生长速率法研究不同培养基及碳源和氮源、p H值、温度、光照条件对该病原菌菌丝生长与产孢量的影响。结果表明,桑褐斑壳丰孢的菌丝适宜在PDA培养基和PDA+1%桑叶碎片培养基(简称PDA桑叶培养基)上生长,其中PDA桑叶培养基是最佳的产孢培养基;菌丝生长最佳培养基中的碳源和氮源物质分别是麦芽糖、蛋白胨,以可溶性淀粉为碳源的培养基产孢量最大,而在所有有氮源和无氮源物质的培养基上均不产孢;菌丝生长的最适培养基p H值为6~9,而p H 6时产孢量最大;在22~28℃培养条件下,菌丝生长最快,产孢量最大;连续黑暗条件适合菌丝生长和产孢;菌丝的致死温度条件为50℃水浴处理10 min。上述研究结果提示桑褐斑壳丰孢有很强的营养利用和环境适应能力。     

一株乳酸菌GF103的分离鉴定及体外益生效果评价

本研究旨在利用分子生物学手段鉴定乳酸菌GF103的菌种属性,并通过体外法评价其作为益生菌的益生效果,筛选出具有益生作用的乳酸菌。试验从北京市大兴种猪场附近土壤中分离得到一株能抑制病原菌大肠杆菌和金黄色葡萄球菌生长的乳酸菌,编号为GF103,经16SrRNA基因序列分析鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。经体外益生效果评价得知,乳酸菌GF103在pH=3的条件下活菌数较高,能够耐受0.3%胆盐。乳酸菌GF103在人工模拟胃液中培养0.5 h活菌数不受影响(P>0.05),培养3 h活菌数降低1 log值(P<0.01);在人工模拟肠液中培养3 h活菌数不变(P>0.05)。结果表明,乳酸菌GF103具备益生菌特性,可进一步研究其作为微生物添加剂在动物上的应用效果。     

捕食线虫性真菌培养基筛选及优化

为了弄清少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora)的最佳条件生长条件,文章对从实验室中筛选出的一株具有高捕食能力的菌307进行了培养基、温度、p H三方面研究。结果表明该菌最优化的培养基为:06WSA,培养条件p H=7.0,温度25℃。     

鹅粪便中特基拉芽孢杆菌和类肠膜魏斯氏菌的分离鉴定

【目的】从鹅粪中分离芽孢杆菌属和乳杆菌属细菌,为鹅源功能菌研究和合理用药提供参考。【方法】收集30只50周龄健康北方白鹅的直肠粪便,利用特异性培养基和生化反应试验分离筛选菌株,筛选的菌株通过DNA提取、PCR扩增16S rDNA测序鉴定后,与GenBank中参考菌株进行比对构建进化树,进行相似性比对确定菌株种类。培养48 h后检测细菌的生长特性、最适酸碱度和温度,以pH 7.0、无胆盐环境下细菌生长状态为对照,检测其耐酸耐胆盐能力,并进行药敏试验检测其对抗菌药的耐受性。【结果】经分离筛选共获得9株细菌,通过生化试验最终选出2株菌,根据进化树的进化距离和相似性比对确定其分别是特基拉芽孢杆菌CC2FG2和类肠膜魏斯氏菌JY0R2。生长特性结果显示,特基拉芽孢杆菌CC2FG2在培养基pH为6.5、温度为30 ℃条件下培养16 h的增殖效果最好,可以耐受1.2%胆盐,活菌数是无胆盐的69.2%,耐酸特性比较强,培养基pH为3.5的强酸环境下活菌数是pH为7.0的81.5%;抗菌药耐受性结果显示,其对氧氟沙星、诺氟沙星、卡那霉素、链霉素、克拉霉素、红霉素、复方新诺明和万古霉素敏感,对头孢呋辛,头孢唑林、头孢噻肟、氨苄西林、呋喃妥因、环丙沙星、庆大霉素和四环素不敏感。类肠膜魏斯氏菌JY0R2在培养基pH为6.0、温度为36.5 ℃的环境中培养18 h增殖效果最好,在1.2%胆盐下活菌数是无胆盐的50.6%,在pH为3.5的强酸环境下活菌数是pH为7.0的87.6%,对环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、克拉霉素和红霉素敏感,对卡那霉素、呋喃妥因和四环素中度敏感,对头孢呋辛、头孢唑林、头孢噻肟、氨苄西林、复方新诺明、万古霉素、庆大霉素和链霉素不敏感。【结论】鹅源特基拉芽孢杆菌CC2FG2和类肠膜魏斯氏菌JY0R2具有很好的耐酸、耐胆盐特性,且特基拉芽孢杆菌可以与部分β-内酰胺类、喹诺酮类、氨基糖苷类、硝基呋喃类和四环素类抗菌药联合使用,类肠膜魏斯氏菌可以与部分β-内酰胺类和氨基糖苷类抗菌药联合使用。该结果可为鹅源功能菌的研发提供参考。     

骆驼刺源产乳酸的枯草芽孢杆菌分离鉴定和菌株特性研究

为了解疏叶骆驼刺青贮中乳酸菌的组成,用MRS培养基对骆驼刺青贮中的细菌进行分离和纯化,通过革兰氏染色、细胞形态学观察、生理生化试验和16S rDNA序列分析对分离的单菌落进行菌株特性研究和种属鉴定。结果表明:L14菌株呈杆状,G+,有芽孢;产乳酸,液化明胶,水解淀粉,触酶阳性,温度生长范围15~55℃,酸生长范围p H值为4~7,Na Cl生长范围为2%~10%,可利用多种碳源和氮源;16S rDNA测序结果显示该菌株与ATCC 6051的相似性为98.7%,说明该菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。     

熊猫粪便中乳酸菌的分离鉴定与降胆固醇作用研究

为筛选出高效降胆固醇乳酸菌,试验利用MRS培养基从熊猫粪便中分离得到7株乳酸菌,采用硫磷铁比色法对7株乳酸菌的体外降胆固醇能力进行测定,并利用经典分类法对所分离的乳酸菌菌株进行系统的细菌学鉴定.结果表明:得到1株编号为X1的乳酸菌,该菌能够耐受pH值为3.0的酸性环境和0.3%的胆盐,在对数生长期降胆固醇能力最强,胆固...