超临界CO2杀灭大肠杆菌过程中菌体蛋白变化的研究

通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,结合超临界CO₂对大肠杆菌的杀菌曲线,研究超临界压力、温度和处理时间对大肠杆菌菌体蛋白的影响。结果表明：超临界CO₂在杀灭大肠杆菌过程中,可显著降低菌体碱溶性（pH8.0）蛋白的溶解性,但对菌体总蛋白含量和种类没有影响;37 ℃下超临界CO2处理大肠杆菌30 min,压力为10MPa时,大肠杆菌存活率为2.8%,菌体碱溶性蛋白的溶解性显著降低,但当压力增加到50MPa时,大肠杆菌存活率和碱溶性蛋白溶解性变化不明显;超临界温度和处理时间对菌体碱溶性蛋白溶解性的影响与大肠杆菌在超临界CO₂中的存活趋势基本一致可,随处理时间的延长和温度的增加大肠杆菌存活率逐渐降低到0,碱溶性蛋白溶解性逐渐降低,直至部分蛋白带消失,但菌体总蛋白含量和种类并没有明显变化;升高温度比增加压力更能显著地导致菌体碱溶性蛋白变性,溶解性下降。     

超临界CO2流体萃取槟榔中的槟榔碱

为了优化超临界CO2萃取槟榔碱的工艺参数,通过三元二次通用旋转组合设计实施试验,考察了萃取温度、萃取压力和萃取时间因素对槟榔碱萃取量的影响.试验结果表明:超临界萃取的温度对槟榔碱萃取量有极显著的影响,萃取时间和压力的影响较小.同时确定了槟榔碱萃取的最佳工艺参数为萃取温度72°C,压力57 MPa,时间26 min.在此条件下,槟榔碱的萃取量为6143.71/μg/g,达到理论最大萃取量的95.3%,所得萃取物中槟榔碱的百分含量晕为(25.85±0.41)%.     

超临界CO2流体萃取槟榔中的槟榔碱

为了优化超临界CO₂萃取槟榔碱的工艺参数,通过三元二次通用旋转组合设计实施试验,考察了萃取温度、萃取压力和萃取时间因素对槟榔碱萃取量的影响。试验结果表明：超临界萃取的温度对槟榔碱萃取量有极显著的影响,萃取时间和压力的影响较小。同时确定了槟榔碱萃取的最佳工艺参数为萃取温度72℃,压力57 MPa,时间26 min。在此条件下,槟榔碱的萃取量为6143.71 μg/g,达到理论最大萃取量的95.3%,所得萃取物中槟榔碱的百分含量为（25.85± 0.41）% 。     

超临界CO_2萃取脱皮菜籽饼粕油脂的可行性

为提高脱皮双低菜籽低温压榨饼的附加值,采用Box-Behnken响应面设计优化超临界CO2萃取脱皮双低菜籽低温压榨饼中油脂的工艺,研究萃取压力、温度和时间对油脂提取率的影响,并对萃取得到的油和粕的品质进行检测。结果表明:萃取温度对油脂提取率的影响显著(P0.05);萃取压力和时间对油脂提取率的影响极显著(P0.001),且交互作用非常显著(P0.01);最佳工艺参数为萃取温度40℃、压力28 MPa和时间120 min,此条件下菜籽油的提取率为95.08%。超临界萃取的油色泽较浅,酸价与过氧化值都优于正已烷工艺,磷脂质量分数为0.051 mg/g约是正已烷工艺的1/32,维生素E和总酚含量较高;超临界萃取的脱脂粕蛋白溶解度高,颜色较浅,硫甙含量较少,品质明显优于正已烷脱脂粕。研究结果可为脱皮双低菜籽低温压榨饼的高值化利用提供数据参考。     

不同参数超临界CO2处理对乳酸菌活性的影响

为了研究超临界CO2作为非水相介质在生化反应工程中的作用,有必要考察超临界CO2处理对微生物活性的影响.本文以乳酸杆菌为试验菌种,进行了该菌在不同参数超临界CO2处理对菌体生长曲线、耐渗透压能力、耐酸能力、抑菌能力、降解胆固醇能力等活性指标影响的研究.结果表明:当提高超临界CO2压强或延长超临界CO2处理时间,乳酸杆菌的活性指标会发生如下变化:生长曲线的最大菌体浓度降低,但菌体的生长速率差异不大;菌体的耐渗透能力、耐酸能力降低;所得的抑菌圈比较明显,但抑菌圈直径减小;平均胆固醇降解率降低,而且长时间处理对降解效果的影响比高压强处理的明显.因此,在工程应用中需要研究一定的弥补措施.     

高压微射流压力对大豆蛋白-大豆多糖体系功能性质的影响

为提升大豆分离蛋白（soy protein isolate,SPI）的功能性质,该文引入大豆可溶性多糖（soybean soluble polysaccharides,SSPS）,构建大豆分离蛋白-大豆可溶性多糖体系（SPI-SSPS）,研究动态高压微射流（dynamic high-pressure microfluidization,DHPM）处理对SPI-SSPS功能特性的影响。分别采用0,60,100,140和180 MPa的 DHPM压力处理SPI-SSPS,探究不同压力对SPI-SSPS起泡特性、乳化特性、溶解性、粒度分布和表面疏水性的影响。结果表明,DHPM处理能提高SPI的溶解性和起泡特性,且SSPS的存在能显著提高DHPM对SPI功能性质的改善效果（P<0.05）。100和60 MPa的DHPM处理能使SPI-SSPS呈现较高的起泡能力和起泡稳定性,分别为未处理样品的1.2和2.4倍。140 MPa的DHPM处理使SPI-SSPS溶解性较强,为未处理样品的1.8倍。然而,DHPM处理会显著降低SPI-SSPS的乳化特性、粒径和表面疏水性（P<0.05）。随着处理压力的增加,SPI-SSPS的粒度和表面疏水性逐渐降低,在180MPa的DHPM处理下SPI-SSPS具有较小的粒径和较低的荧光强度。综上所述,DHPM结合SSPS改性技术可用于改善SPI的功能性质（如溶解性、起泡性）,促进SPI在食品工业的应用。该文的研究结果可为SPI的功能性质改性提供参考。     

高压均质-冷冻干燥技术制备大豆分离蛋白微粒及其功能特性

为了进一步改善大豆分离蛋白的分散性及功能性质,该研究以大豆分离蛋白为原料,通过对天然大豆分离蛋白进行高压高剪切处理并联合冷冻干燥技术,制备大豆分离蛋白微粒,考察压力(60～100 MPa)对大豆分离蛋白微粒尺寸、功能性质及结构特性的影响,探究其构效关系。结果表明:随着压力逐渐增加,大豆分离蛋白平均粒径大幅度减小,粒径分布曲线向左侧移动,与天然大豆分离蛋白相比,在100 MPa时大豆分离蛋白粒径减小了1 631%,粒径曲线分布较宽。在60～100MPa压力范围内随着压力的增加。与天然大豆分离蛋白相比,大豆分离蛋白微粒的分散性指数(Protein Dispersibility Index, PDI)和功能性质均显著提高(P0.05),其中在100 MPa时大豆蛋白质的溶解性提高了172.98%,乳化活性和乳化稳定性分别增加了约28.71%和77.82%,持油性增加了约123.76%,起泡性随时间的变化其泡沫高度也均有所提高。由扫描电镜图可以观察到,未经过高压均质的大豆分离蛋白粒子呈聚集状态,球状的表面向内凹陷,经过高压均质联合冷冻干燥处理后的大豆分离蛋白微粒呈现网络结构。在高压和高剪切力的作用下,大豆分离蛋白微粒的疏水基团大量暴露,表面疏水性随之增加,静电斥力增加,α-螺旋和β-转角向β-折叠和无规则卷曲结构的转化是蛋白质的溶解性等功能性质提高的主要原因。溶解性等功能性质的提高有利于大豆分离蛋白更好的应用于食品加工行业,进一步为蛋白的理化性质及结构优化提供新思路。     

超临界CO2萃取万寿菊花中叶黄素的研究

采用超临界CO2萃取技术,研究了从万寿菊花中萃取叶黄素的工艺条件.对影响超临界CO2萃取叶黄素的各种因素,包括分离参数、原料含水率、粉碎粒径,超临界萃取温度、压力、流速、时间等因素进行了考察,得到较佳的萃取工艺条件为:原料含水率10.92%,粒径40目,萃取温度60℃,压力30 MPa,CO2流速15 L/h,分离釜Ⅰ温度40℃,压力6 MPa,分离釜Ⅱ温度20℃,时间为6 h.     

罗非鱼片的超临界CO2干燥动力学及模型

超临界CO2干燥是一种新型的干燥技术。为掌握罗非鱼片的超临界CO2干燥特性,该文研究了温度、压力和CO2流量对罗非鱼片的超临界CO2干燥动力学的影响规律,拟合了干燥曲线方程。结果表明:温度(35～55℃)对超临界CO2干燥过程有显著影响,而压力(15～35MPa)和CO2流量(15～35L/h)对干燥过程的影响相对较小;干燥方程符合Page模型。研究结果可为罗非鱼片的超临界CO2干制工业化生产和控制提供参考。     

高密度CO2诱导制备虾糜凝胶的特性

为了探索高密度CO2诱导制备蛋白凝胶的可行性,以南美白对虾虾糜为材料,以常压热诱导凝胶为对照,研究压力5～30MPa、时间10～50min、温度50～70℃等因素对虾糜凝胶特性以及基本营养成分的影响。结果表明,高密度CO2处理能够使虾糜形成凝胶,压力、时间和温度对虾糜凝胶特性均有显著影响,在20MPa、60℃、30min和25MPa、60℃、30min条件下制备的虾糜凝胶品质相对较好;与热诱导凝胶相比,高密度CO2诱导的虾糜凝胶强度更大,同时也显著增加了虾糜凝胶的持水能力,减少了营养物质的流失。研究结果表明,高密度CO2具有促进凝胶形成和改善凝胶特性的作用,可以成为替代热处理成为蛋白凝胶制品生产的新技术。     

火力楠根超临界提取物对马尾松种子的化感效应研究

研究火力楠根超临界提取物对马尾松种子的化感效应结果表明,纯CO2萃取的火力楠根生化物质对马尾松种子绝对发芽率、绝对发芽势、胚根长、胚轴长、鲜物质量及干物质量有显著抑制作用;夹带剂与CO2混合萃取的火力楠根生化物质对马尾松种子绝对发芽率、胚轴长及鲜物质量、干物质量有不同程度促进作用,而对绝对发芽势、胚根长则有抑制作用。     

手掌参中赤霉酸诱导的富含半胱氨酸蛋白基因的表达、纯化及鉴定

目的: 构建含赤霉酸诱导的富含半胱氨酸蛋白基因(gcgasa)的原核表达载体,并在E.coli BL21(DE3)中表达。材料：手掌参。方法：设计带有EcoR I和Hind III酶切位点的引物,分别对gcgasa基因编码区全长及信号肽缺失的片段进行PCR扩增,将目标片段克隆入原核表达载体pET-32(a),构建重组质粒。经测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白,并采用SDS-PAGE、Western-blotting、电镜超薄切片技术检测外源蛋白的表达及定位情况。对于水溶性蛋白,采用Ni2+-NTA亲和层析及凝胶过滤手段纯化。结果: 含有信号肽的外源基因在大肠杆菌周质空间中以包含体形式存在,而信号肽缺失的片段主要以可溶形式表达,经Ni2+-NTA纯化可获得目的蛋白。结论：首次在原核表达系统中高效表达了水溶性的gcgasa蛋白,为其结构和功能的研究奠定了基础。     

重组海参溶菌酶C端基因(SjLys-C)的可溶性表达和抑菌活性分析

为进一步研究海参(Stichopus japonicus)溶菌酶基因(Sjys)(Genbank登录号:EF036468)中不司片段表达产物的生物特性,本研究通过对其cDNA片段的分析,发现C端基因区域所对应的蛋白质序列中含有非酶活性.根据已知的海参溶菌酶的cDNA序列,设计山含有Nco Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点的特异性引物,从新鲜的海参肠中提取总RNA,以其为模板利用RT-PCR扩增出长度为259 bp的溶菌酶C端(SjLys-C)基因.将该目的基因连接到pET-32a(+)载体上,构建重组质粒pET-32a(+)-SjLys-C,再转化至大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3)pLysS,成功地构建了重组蛋白SjLys-C的基因工程菌.利用该工程菌诱导发酵,结果显示它能高效表达出26 kD左右的重组蚩白SjLys-C.经过Western blot分析,该重组蛋白在26 kD左右能够与Penta-His抗体发生特异性免疫反应.对纯化的重组蛋白SjLys-C进行了抑菌特性的分析,结果发现它对溶壁微球菌(Micrococcus lysodeikticus)和副溶血弧菌(Vibrio parahae molytic us)有较高的抑菌活性.此外,将该重组蛋白经100℃、40 min处理后,其抑菌能力提高了5％～21％.研究结果表明,重组蛋白SjLys-C基因工程菌能够制备出具有可溶性的、并具有抑菌活性的重组蛋白SjLys-C,在农业和医药等行业中有潜在应用和开发价值.     

Biochemical characterization of soluble proteins in pecan [Carya illinoinensis (Wangenh.) K. Koch

Pecans (cv. Desirable) contained approximately 10% protein on a dry weight basis. The minimum nitrogen solubility (5.9-7.5%) at 0.25-0.75 M trichloroacetic acid represented the nonprotein nitrogen. Among the solvents assessed for protein solubilization, 0.1 M NaOH was the most effective, while borate saline buffer (pH 8.45) was judged to be optimal for protein solubilization. The protein solubility was minimal in the pH range of 3-7 and significantly increased on either side of this pH range. Increasing the NaCl concentration from 0 to 4 M significantly improved ( approximately 8-fold increase) protein solubilization. Following Osborne protein fractionation, the alkali-soluble glutelin fraction (60.1%) accounted for a major portion of pecan proteins followed by globulin (31.5%), prolamin (3.4%), and albumin (1.5%), respectively. The majority of pecan polypeptides were in the molecular mass range of 12-66 kDa and in the pI range of 4.0-8.3. The pecan globulin fraction was characterized by the presence of several glycoprotein polypeptides. Lysine was the first limiting essential amino acid in the defatted flour, globulin, prolamin, and alkaline glutelin fractions. Leucine and tryptophan were the first limiting essential amino acids in albumin and acid glutelin fractions, respectively. Rabbit polyclonal antibodies detected a range of pecan polypeptides in the 12-60 kDa range, of which the globulin fraction contained the most reactive polypeptides.     

乙醇溶剂与超临界CO_2相结合提取高纯度卵黄磷脂的研究

采用乙醇溶剂首先提取蛋黄粉中的卵黄油 ,然后用超临界 CO2 萃取方法脱除卵黄油中的中性脂肪 ,获得高纯度的卵黄磷脂。考察了工艺参数对提取效果的影响。试验表明 :在乙醇溶剂提取卵黄油阶段 ,乙醇浓度是影响卵黄油提取率的最主要因素 ,温度是影响卵黄磷脂提取率的最主要因素 ;在超临界 CO2 萃取阶段 ,磷脂的溶解度随萃取温度的升高而降低 ,中性脂质在 5 5℃时溶解度最大。采用此工艺 ,卵黄磷脂得率为 17.6 6 % ,纯度 94.41% ,且不含胆固醇。     

应用自动诱导表达体系提高原核表达效率

自动诱导表达体系是依据T7表达菌株对于培养基中的碳源和能源的利用机制建立起来的,用于生产各种异源蛋白更加高效、便捷和经济。为提高重组蛋白在原核细胞中的表达效率,构建了以S基因抗原位点区作为目的基因的原核表达重组质粒pET-S1,并将其转化入大肠杆菌（Escherichia coli）BL21（DE3）菌株。用IPTG诱导表达系统和自动诱导表达系统分别对目的蛋白进行表达。结果表明,目的蛋白最高表达量分别占菌体总蛋白的25.9 %和45.1 %,表明自动诱导表达系统可明显提高表达效率。     

Supercritical carbon dioxide extraction of spirulina platensis component and removing the stench.

The chemical component of spirulina was determined by supercritical CO(2) extraction. The protein and essential amino acid contents of spirulina powder were not significantly decreased through supercritical CO(2) extraction, but the contents of total amino acid and lipids were reduced. The spirulina powder had a stench smell before, but not after, supercritical CO(2) extractions. The highest yield rate of lipids was obtained at an extraction pressure of 35 MPa and an extraction time of 4 h. The lipids could be used as additives of health foods containing gamma-linolenic acid.     

0℃贮藏下南美白对虾品质变化研究

为分析冰藏冷链运输条件下南美白对虾品质和微观结构的变化,本研究测定了0℃贮藏条件下南美白对虾的色差、质构、挥发性盐基氮(TVB-N)及其组分含量和蛋白质图谱的变化情况,并对其肌肉的微观结构进行观察。结果表明,随着0℃贮藏时间的延长,南美白对虾L^*值、质构以及肌原纤维蛋白和肌基质蛋白含量呈下降趋势。0℃贮藏条件下,TVB-N值与贮藏时间呈正相关;贮藏4 d后南美白对虾色泽、质构和肌肉微观结构开始出现明显变化,肌原纤维蛋白和肌基质蛋白含量明显下降,而碱溶性蛋白含量呈增加趋势;贮藏6 d后蛋白条带降解明显。综合考虑,建议0℃贮藏条件下南美白对虾的货架期为4 d。本研究结果为冷藏条件下南美白对虾提供了品质评价的方法。     

重组马槟榔甜蛋白MabinlinⅡ在大肠杆菌中的表达

MabinlinⅡ是我国所特有且唯一的植物甜蛋白，在体外至今没有得到具有甜味的基因表达产物。本文根据己知马槟榔甜蛋白的序列设计引物克隆MabinlinⅡ基因，对基因进行剪切重组。将重组基因克隆至大肠杆菌表达载体pET-30a（＋）中，构建了3个重组表达载体，转化大肠杆菌BL21（DE3），得到三株表达重组马槟榔甜蛋白的大肠杆菌工程菌。经IPTG诱导，3个重组MabinlinⅡ基因可在大肠杆菌BL21（DE3）中高效表达。