土壤拮抗细菌的分离与抗植物病原真菌活性初步研究

为了分离筛选出土壤中对植物病原真菌具有拮抗作用的细菌,以4种土传病害病原菌为诱导菌株,采用土壤颗粒撒布法,从不同生态区农田土壤样本中分离得到55株拮抗细菌菌株。测定了部分拮抗菌株及发酵滤液对植物病原菌的拮抗作用。结果表明:分离获得的细菌菌株对病原真菌均表现出一定程度的抑制作用,其中对菜豆根腐病菌(Fusarium solani)、小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、番茄枯萎病菌(Fusarium oxysporum)菌丝抑制率达60%以上的拮抗菌株,分别有1、12和8株。9株拮抗菌发酵滤液对大豆菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)、水稻稻瘟病菌(Pyricularia grisea)、玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)、小麦根腐病菌(Bipolaris sorokiniana)、水稻恶苗病菌(Fusarium moniliforme)和马铃薯早疫病菌(Alternaria solani)6种植物病原菌表现出较高的抑菌效果,其中YS7菌株发酵产物对玉米大斑病菌、小麦根腐病菌、水稻恶苗病菌均表现较强的抑菌活性,对玉米大斑病菌抑菌圈直径最大达到了56.2mm。从抗菌谱上看,27株拮抗菌株代谢产物对4种以上的拮抗对象表现有抑菌活性,表明拮抗菌株代谢产物具有较为广谱的抑菌效果。     

杂草内生拮抗细菌的分离与筛选

从25种杂草的根、茎、叶中分离出582株内生细菌,拮抗试验表明,其中121株对供试的7种病原真菌具有抑菌活性,占总数的20.8%。L2菌株对7种病原真菌的抑菌带均在10 mm以上,其代谢产物对小麦根腐病菌的抑制率达80.2%。     

一株细菌对蔬菜病原真菌抑菌活性的研究

采用菌丝生长速率法测定分离自实验室的一株细菌对黄瓜灰霉病菌(Botrytis cinerea)、辣椒疫病菌(Phytophthora capsici)、黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)的抑菌效果。结果表明,这株细菌对以上3种病原菌均有较好的抑制效果,其中对黄瓜灰霉病菌的抑制效果最好;细菌粗发酵液经一定强度的温度和酸碱处理后仍有一定的抑菌效果,抑菌效果在p H 5.1~9.0之间无显著差异;用胰蛋白酶处理后拮抗活性无明显变化;经硫酸铵处理过的粗发酵液,其上清液与沉淀均具有抑菌活性。     

抗真菌活性粘细菌的筛选及鉴定

[目的]筛选出具有抗真菌活性的粘细菌并对其进行种类鉴定。[方法]从全国23个省、自治区的200个腐殖质土样中分离纯化出237株粘细菌;将菌株在4种不同培养基中发酵培养,发酵产物通过甲醇提取得到代谢产物;以白色念珠菌为模型对次级代谢产物进行高通量筛选。[结果]复筛后得到1株编号为ZJ2的粘细菌,其次级代谢产物具有抗白色念珠菌的活性,对该菌株进行16SrDNA克隆并测序,结果表明ZJ2为橙色粘球菌（Myxococcus fulvus）。[结论]菌株ZJ2的次级代谢产物中,存在对白色念珠菌生长有显著抑制作用的生物活性物质,具有潜在的研究和药用价值。     

南蛇藤内生真菌的分离及抑菌活性初探

采用常规方法从南蛇藤的叶与果实中分离得到21株内生真菌,以PDB培养基对其进行液体培养,用高压蒸汽灭菌过的发酵处理液和丙酮粗提物对小麦赤霉菌、棉花枯萎菌、番茄叶霉菌等8种病原菌进行抑菌活性测定.结果表明,抑菌活性成分主要存在于丙酮粗提物中.筛选出1株抗菌谱较广的内生真菌Y9,其对番茄灰霉病菌、番茄早疫病菌、苹果炭疽病菌、西瓜枯萎病菌、苹果褐腐病菌、小麦赤霉病菌 6种病原菌有较好抑菌活性.     

草莓根腐病菌拮抗细菌的分离与筛选

为了筛选对草莓根腐病具有拮抗作用的细菌,本试验采用土壤稀释分离法、对峙培养法等方法。从昌平区兴寿镇草莓基地采集的16份土样中分离得到106株细菌。以草莓根腐病菌为靶标,筛选出7株具有明显拮抗作用的菌株,其中1-9和8-3菌株抑菌范围较广,对3种草莓根腐病菌具有抑制作用;2-4菌株对草莓根腐病菌的抑菌范围最窄,仅对1种草莓根腐病菌有抑制作用。对其他供试植物病原真菌抑菌谱测定得知,1-9,12-4,16-1等菌株抑菌范围较广,对供试的7种以上的植物病原真菌均有抑制作用。拮抗细菌生物膜和代谢产物检测结果表明,7株拮抗细菌都能产生生物膜和吲哚乙酸,推测这些菌株具有较强的定植能力和促生效果。     

防治番茄土传病害拮抗微生物的筛选与应用效果

从番茄根际土壤中共分离出73株细菌,其中7株细菌对番茄枯萎病病菌表现出抑菌活性,4株对番茄根腐病病菌表现出抑菌活性,其中YD11菌株对番茄枯萎病病菌的抑菌活性最高,抑制率达到82.4%。同时,YD11菌株对枯萎病及根腐病的田间防效较好,分别为58.8%、52.2%。研究发现,当基质配方中酱渣、草炭、蛭石的质量比为5∶1∶1时,与拮抗菌株YD11稀释液混合对番茄枯萎病和根腐病的防治效果最好,防治效果分别为80.7%、73.9%,推荐在农业生产上使用。     

拮抗细菌对香蕉枯萎病菌的离体抑菌活性研究

通过平板对峙培养,筛选出对香蕉枯萎病菌有拮抗作用的细菌6株：B05、B23、B44、B105、B133和B146,测定其抑菌带宽度达10～15mm。拮抗细菌的发酵液对病菌菌丝生长的抑制率为83．71％～88．76％,而经高温灭活的发酵液对病菌菌丝生长的抑制率为16．85％～33．48％;拮抗菌的非挥发性代谢产物对病菌菌丝生长的抑制率为74．72％～87．36％;挥发性代谢产物对病菌菌丝生长的抑制率为15．30％～37．64％。拮抗细菌发酵液在一定浓度范围内均能有效地抑制病菌孢子萌发,且浓度越高,抑制能力越强。拮抗菌株B05抑菌作用最稳定、抑菌活性最高,菌株B44抑制孢子萌发效果最好。     

丹参内生细菌的抑菌活性研究

DS-1是从丹参叶片中筛选出的一株细菌,为研究其对病原真菌的抑菌效果,本实验采用平板对峙法和生长速率法测定了DS-1菌株及其发酵液对梨黑斑病菌、番茄早疫病菌、小麦赤霉病菌等8种病原真菌的抑菌活性。结果表明DS-1对这8种病原菌都有很好的抑制作用,其中对梨黑斑病菌的抑菌率达到了90.57%;过滤处理的发酵液对病原菌的抑制率最高达到83.87%,但经过高温处理的发酵液活性出现不同程度的下降。     

2株内生拮抗细菌对灰霉病菌的抑菌活性研究

采用对峙培养法检测了2株内生拮抗细菌对灰霉病菌菌丝生长的影响,并观察了其发酵液对灰霉病菌孢子萌发及病菌生长的影响,同时测定了其发酵液、细菌悬浮液以及高温处理的发酵液在离体黄瓜上对灰霉病菌生长的抑制作用。结果表明：2菌株能强烈抑制灰霉病菌生长,其发酵液也能明显抑制病菌孢子的萌发和生长,且发酵液高温处理后仍具有较高的抑菌活性。在离体黄瓜片上检测菌株对灰霉病菌的抑制效果,结果表明,2菌株发酵液及其细菌悬浮液均能较好地抑制灰霉病菌生长。     

柑橘病害生防放线菌的分离筛选及抑菌作用研究

通过稀释法对从赣南柑橘园采集的土样进行微生物分离,获得细菌、真菌和放线菌共52株,其中真菌3株、细菌27株、放线菌22株。进一步通过皿内实验筛选到1株对柑橘炭疽病菌和溃疡病菌有较强抑制作用、且效果稳定的放线菌株ML27,对其进行抑菌活性测定和抑菌机理初探。结果表明,该菌株对炭疽病菌的抑制率为72.15%,对溃疡病菌的抑菌圈为2.05 cm;其抑菌机理主要是对真菌的细胞壁产生影响,对细菌的菌体具有溶解作用。     

柑橘溃疡病生防内生细菌的筛选、鉴定及其活性代谢产物的稳定性

通过皿内检测和离体叶片法筛选到一株柑橘溃疡病生防内生细菌GN232,对其进行了分类鉴定,并对其抗细菌活性代谢产物的特性进行了研究。形态特征、培养特性、生理生化特性和16S rDNA序列分析表明,该内生细菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis subsp.subtilis);发酵滤液活性测定结果表明,菌株GN232抗细菌活性代谢产物在中性环境下稳定,对温度不敏感,紫外线照射25 min后发酵滤液抑菌活性降低,胰蛋白酶对发酵滤液活性无明显影响;此外,该菌株发酵上清液和农用链霉素混用后对溃疡病菌的抑制效果较单独发酵滤液、农用链霉素的抑菌效果分别提高26.8%和20.7%。     

油菜内生真菌的分离及其抑菌活性的研究

[目的]探讨油菜内生真菌的抑菌活性。[方法]从油菜的不同组织内分离内生真菌,研究它们对植物病原真菌的抑制作用,并对活性菌株进行了初步鉴定。[结果]从油菜的根、茎、叶中共分离出12株内生真菌,其中2株(WG5和WJ2)对病原真菌均有不同程度的抑制作用,尤其对油菜菌核病菌和小麦黄斑叶枯病菌的抑制率最高,而且其发酵滤液经高温处理后活性不丧失,对病原真菌仍有较强的抑制作用,具有一定的生防潜能。[结论]油菜内生真菌可以产生具有抑菌活性的次生代谢产物,为新型活性物质的筛选提供新的途径。     

梨黑斑病拮抗菌的筛选研究

本文应用7种细菌(J4、J5、J6、T4、T7、P2和ZJ01)采用对峙培养法和抑菌圈法对梨黑斑病菌菌丝生长和孢子萌发进行了研究.结果表明,7种细菌对梨黑斑病菌均有一定程度的抑制作用,与CK相比,T7对梨黑斑病菌的拮抗作用最强,抑菌效果最好,平均抑制率高达48.92％;其次是P2与J5,平均抑菌率分别为46.23％和4...     

连翘内生真菌的分离及其抑菌活性初步研究

采用PDA培养基从连翘茎、叶中分离到19株内生真菌,对其分别进行液体培养,将发酵产物中的发酵液用高压蒸汽湿热灭菌,菌丝体晾干研磨后用丙酮提取。用发酵处理液和丙酮粗提物采用生长速率法对一些植物病原菌进行抑菌活性测定。结果表明:抑菌率在50%以上的活性菌株,发酵液组中有1株(5.26%),菌丝体组中有13株(81.25%),表明其抑菌活性成分主要为胞内代谢产物(存在于菌丝体粗提物中)。筛选出2株抗菌谱较广的内生真菌(J4和J8),其中J8对9种病原真菌抑菌活性较强,J4对6种病原真菌抑菌活性较强。     

生防细菌复配对苹果主要病原真菌抑菌活性筛选及其稳定性

采用生长速率法测定4种生防细菌及其复配对5种苹果主要病原菌的抑制效果,并将筛选出的最佳复配生防细菌发酵液进行稳定性测定。结果表明,单一生防细菌发酵液中多粘类芽孢杆菌FS-1206对苹果树腐烂病菌的抑菌效果最好,为78.19%;当多粘类芽孢杆菌FS-1206与解淀粉芽孢杆菌TS-1203复配比例为 2∶1时,其对苹果树腐烂病菌的抑菌率高达86.64%,抑菌效果显著优于单一生防细菌发酵液。稳定性测定结果表明,复配生防细菌（FS-1206∶TS-1203= 2∶1）发酵液在紫外照射、高温和强酸强碱环境条件下,其抑菌活性均具有良好的稳定性。     

两种天南星内生细菌抗魔芋软腐病菌株筛选

魔芋软腐病严重影响着魔芋的生产,利用内生细菌来抑制魔芋软腐病菌有很多优点。选择23株从药用植物一把伞南星、异叶天南星中分离得到的内生细菌,用牛津杯法皿内测试内生细菌对魔芋软腐病菌的拮抗作用,以筛选拮抗软腐病菌能力强的菌株。研究结果表明,23株供试内生细菌对魔芋软腐病菌均有不同程度的拮抗活性,8株抑菌效果非常显著,YC06和YC09两株内生细菌抑菌能力极强,其发酵产物对魔芋软腐菌也有极强的抑菌能力。     

13株植物病原菌拮抗细菌的筛选

为获得具有高效、广谱拮抗作用的生防细菌。从实验室及葡萄、黄瓜、西红柿的根和根际土壤中培养得到282株细菌,以13种常见植物病原真菌为靶标菌,通过平板对峙法和琼脂扩散法测定了分离细菌的发酵液和发酵滤液对靶标菌的抑制效果。结果表明:共有9株分离细菌具有较好的抑制作用,其中4株拮抗细菌的发酵液对所有13株靶标病原菌均有很好的抑制作用,表现出较为广谱的抑菌作用。其中k8j菌株的抑菌效果与其它拮抗菌株达到了显著性水平,其对玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)的抑制率最高,达到了92.02%。9株拮抗细菌的发酵滤液对不同的靶标病原菌也表现出一定的抑制作用,其中HMGR-2菌株对玉米大斑病菌的抑制效果最好,抑菌圈直径达到了4.15cm;菌株k8j的发酵滤液对11株病原菌均具有很好的抑菌效果(除水稻稻瘟病菌和番茄灰霉病菌外),并与其它拮抗菌株比较达到了显著性水平,说明该菌株的代谢产物也具有较为广谱的抑菌效果。     

蜡样芽孢杆菌0-9对小麦根腐病菌的抑菌作用研究

采用平板对峙法,研究0-9菌株对引起小麦根腐病的致病菌尖孢镰刀菌的抑菌作用,抑菌率为50%,该菌株发酵代谢产物对小麦根腐病菌的抑菌作用达83%;0-9菌株代谢产物处理尖孢镰刀菌的分生孢子后,其萌发率降低61.2%;发酵代谢物质在高温和长时间紫外线照射下仍具有约80%的抑菌活性,且代谢产物的有效抑菌活性可以长达14 d。同时采用平板对峙法研究0-9菌株对5株植物病原真菌的抑菌作用,结果表明0-9菌株也具有广泛的抑菌效果。     

4种葱科植物粗提液对香蕉枯萎病菌的抑制效果

分别采取高温灭菌和滤菌器过滤2种方式,对韭菜、大蒜、大葱、洋葱等4种葱科植物的组织粗提液进行除菌,并用其进行香蕉枯萎病病原菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)的拮抗实验。结果表明:滤菌器过滤处理组比高温灭菌处理组对香蕉枯萎病菌的抑制效果更显著;在滤菌器除菌组中,韭菜的抑菌效果最佳,其次为大蒜和大葱,与对照相比都达到了差异极显著水平,但洋葱粗提液的抑菌效果不明显。