农杆菌介导甘蔗基因转化技术的优化

以甘蔗（Saccharum officinarum L.）品种ROC10为转化受体材料,以GFP基因为报告基因,通过对农杆菌介导遗传转化的一系列条件,包括农杆菌菌株及侵染菌液浓度、侵染时间、受体愈伤组织龄期、AS活化时间及使用浓度、共培养时间等进行优化,同时进行了便于vir基因活化和T-DNA转移的条件组合,如附加果糖和葡萄糖、酸性环境感染,低温共培养等,从而建立了一个可行、有效而又简便的农杆菌介导的甘蔗遗传转化体系。结果表明:农杆菌菌株EHA105优于LBA4404,其适宜侵染浓度D600为1.3752;适宜受体愈伤组织龄期为25℃暗培养25d;适宜侵染时间为30min;适宜AS活化时间为2h,使用浓度为200μmol·L-1;适宜共培养时间为4d。获得2株有荧光信号的植株,对这2株植株进行斑点Southern杂交检测,均有阳性反应,证明GFP基因已整合到甘蔗基因组中并得到了有效表达,表明该转化体系确实是有效的。      

农杆菌介导法将抗草甘膦基因EPSPS转入玉米自交系的研究

通过农杆菌介导法将抗草甘膦基因EPSPS转入玉米自交系H99中,同时研究了农杆菌浓度、侵染时间及共生培养条件等因素对转化频率的影响。结果表明:菌液浓度OD600为0.6、侵染时间20 min、共生培养时间3 d为最佳转化条件。获得的转基因植株经PCR分析鉴定,其中7株表现阳性,证明外源基因已经整合到玉米基因组中。     

农杆菌介导的大豆体细胞胚遗传转化系统的优化研究

以大豆球形期体细胞胚为外植体,以抗性体细胞胚筛选率为指标,对影响农杆菌介导的大豆体细胞胚遗传转化频率的因子进行了优化.结果表明,菌液浓度以OD600=0.5-0.7、AS浓度为50-100μmol/L、侵染时间10分钟、共培养时间2-3天,有利于提高转化率.     

农杆菌介导的大豆子叶节遗传转化技术流程及操作要点

大豆遗传转化效率低,是大豆转基因育种亟待解决的重要问题。以大豆子叶节为外植体采用农杆菌介导法,系统地研究了大豆子叶节遗传转化各技术环节的操作要点,包括工程菌液制备、无菌苗获得及外植体制备、农杆菌的侵染及共培养、不定芽诱导、不定芽伸长、根诱导、驯化与移栽、抗性植株的获得及转基因植株的检测等,建立了一套较稳定、高效的大豆子叶节遗传转化体系。并利用该体系,将野生大豆耐盐碱相关基因A1对大豆品种绥农28、合丰50、合丰55、东农50进行遗传转化,系统地探讨了大豆基因型、影响T-DNA的转移效率的各环节、筛选剂浓度及不同基因型转化效率等几个重要因素。     

根癌农杆菌介导的大麦幼胚遗传转化影响因素研究

为建立和优化根癌农杆菌介导的大麦遗传转化体系,以大麦幼胚为转化受体,研究了根癌农杆菌介导法转化大麦的主要影响因素。结果表明,以gus基因瞬时表达率、抗性愈伤组织诱导率为转化指标,筛选出了对大麦幼胚感染力比较强的农杆菌菌株EHA105,以及高敏感受体基因型甘啤4号和秀81-47等。实验结果还表明,预培养1 d的大麦幼胚具有较高的瞬时表达率(91%),是较好的转化受体。菌液侵染浓度OD600=0.5,侵染时间为30 min时转化效率最高。在此基础上,侵染后幼胚与农杆菌采用液体共培养方式可明显提高转化效率,gus基因瞬时表达率最高可达90%。在优化条件下,转化约30 d后抗选择剂潮霉素(Hyg)的愈伤组织占受体组织总数的34.2%。     

农杆菌介导小麦成熟胚愈伤组织的遗传转化研究

为建立和优化小麦成熟胚愈伤组织遗传转化体系,以筛选出的适合小麦成熟胚组织培养再生的普通小麦山农2618为材料,采用农杆菌介导法对其成熟胚愈伤组织进行转化,对影响转化效率的因素如侵染菌液的浓度、侵染时间、超声波处理、真空处理等进行了研究.结果表明,这些因素对小麦成熟胚遗传转化效率有很大影响.菌液侵染浓度OD600为0.8、侵染时间为60 min时转化效率最高.在此基础上辅以超声波处理、真空处理可明显提高转化效率,最高转化率可达8.1%.对转化愈伤组织和转化植株分别进行GUS染色和PCR检测,结果表明外源基因已整合到小麦基因组中.     

农杆菌介导的花生遗传转化条件优化

为建立花生快速高效的遗传转化体系,以浸泡吸水后的花生半粒种子为转化受体,利用根癌农杆菌介导法,以除草剂Basta抗性筛选及基因组DNA的Bar基因PCR检测为指标,优化花生遗传转化体系。研究结果表明,在侵染悬浮液中加入1mmol/L二硫苏糖醇（DTT）提高了农杆菌介导的转化效率（最高提升36.5 %）;与YEB培养液相比,AB重悬液的使用显著提高了农杆菌的转化效率（最高提升19.3 %）;农杆菌菌液OD600为0.7时转化效率最高;基因型显著影响转化效率,EXP27-1516的转化效率为69.03%,显著高于14AU01（56.67 %）;以花生半粒种子为转化受体,从种子培养到形成茁壮根系仅需8周,明显短于子叶节转化所需的13周。优化后的农杆菌介导的花生遗传转化体系为花生转基因研究提供了重要的研究工具。     

甜菜磷酸蔗糖合成酶的转基因研究

将甜菜磷酸蔗糖合成酶(Beta vulgaris sucrose phosphate synthase,BvSPS)基因构建到植物表达载体pBI121上,利用农杆菌介导法对甜菜叶柄进行遗传转化.通过对转基因体系的优化,确定了农杆菌浓度OD.为0.6时,叶柄外植体经过2d的预培养,农杆菌侵染5mn,侵染受体共培养4d后,所获得的Kana抗性芽率最高.在所获得的27株Kana抗性植株中,通过提取甜菜基因组DNA及PCR鉴定,有8株成功整合了BvSPS基因,阳性率达到29％.     

农杆菌介导优良玉米自交系Ⅱ型胚性愈伤组织遗传转化体系的建立

以玉米自交系8902、340、4112未成熟幼胚为材料,诱导、继代筛选出良好的Ⅱ型胚性愈伤组织,用农杆菌(EHA105和LBA4404)介导法转化其愈伤组织.利用本室构建的植物双元表达载体中携带的GUS报告基因对农杆菌转化系统的条件进行了研究,如农杆菌的侵染浓度、菌种类型、侵染时间、A8(乙酰丁香酮)浓度及基因型等,建立了农杆菌介导优良玉米自交系Ⅱ型胚性愈伤组织高效遗传转化体系。     

利用玉米萌动胚转化体系获得抗除草剂转基因新材料

以玉米杂交种郑单958为受体材料, 建立农杆菌介导的玉米萌动胚转化体系, 并获得抗除草剂转基因玉米材料。经过对农杆菌菌液浓度、共培养时间、乙酰丁香酮的浓度的优化, 农杆菌介导的玉米萌动胚转化法的最优参数为菌液浓度OD₆₀₀值为0.8, 共培养时间为48 h, 乙酰丁香酮的浓度为100 μmol/L。获得69株PCR阳性植株, 其中54株为bar基因金标免疫试纸条检测阳性植株, 29株获得种子;T1代植株具有草丁膦抗性, 并显示出胶体金免疫酶联反应阳性, 表明目的基因已整合玉米基因组内并有效表达, 而且能够稳定遗传给后代。     

芦笋种质营养器官大量元素含量分析

对46份芦笋种质资源各器官中氮、磷、钾、钙、镁含量及其相关性进行分析。结果表明:芦笋各器官中氮、磷元素平均含量为嫩茎根叶母茎;钾元素平均含量为嫩茎母茎叶根;钙元素平均含量为嫩茎根母茎叶;镁元素平均含量由为根≈嫩茎母茎叶。芦笋的嫩茎中5种元素的平均含量均较高,嫩茎中氮的含量范围是40.68~87.85 g/kg,磷的含量范围是2.33~15.24 g/kg,钾的含量范围是36.15~76.97 g/kg,钙的含量范围是4.45~27.61 g/kg,镁的含量范围是1.08~6.08 g/kg。其中对人体有益的钙、镁元素含量变异程度较大,钙元素含量最高的品种为‘Purple Passion’,镁元素含量大于5 g/kg的品种有2个,分别是‘UC157’、‘JK107’。由此可见,芦笋中的氮、磷、钾、钙、镁元素含量具有明显的器官差异性和品种差异性。     

芦笋壮苗的基质配比研究

[目的]研究不同基质配比对芦笋育苗的影响,寻找出芦笋育苗最理想的基质配比。[方法]设置成品有机质、成品基质、田土不同配比的4个处理,对出苗率、成苗率、株高、茎粗、地上茎数、储藏根数、茎叶鲜重、根鲜重、单株鲜重进行测量分析。[结果]成品有机质∶成品基质∶田土=1∶1∶1(体积比)为最好基质配比,株高(19.67 cm)、地上茎数(3.33条)、茎粗(1.17 mm)、储藏根数(5.27条)、单株重(2.15 g)、茎叶重(0.77 g)、根重(1.38 g)表现都很好,达到壮苗标准。[结论]可以开展该基质配比的芦笋育苗示范。     

甜菜夜蛾生物学特性及防治研究

甜菜夜蛾在苏北每年发生5代。幼虫4龄、5龄后进入暴食期,一生食甜菜叶约45cm~2左右。幼虫历期约11.5天。暴发原因与气候、天敌、药剂有关.防治指标初拟百株留种甜菜有虫170～180头为宜。幼虫抗药性较强,防治适期在卵孵前或初孵期。防治药剂以杀虫双、抑太保、多来宝效果好。     

几种低毒农药防治甜菜夜蛾药效试验

田间试验结果表明，10％赛虫特可湿性粉剂450g／hm^2和15％及杀乳油450g／hm^2对甜菜夜蛾防治效果较好，防效分别为74．6％-98．1％和51．0％-91．2％，显著高于4．5％高效氯氰菊酯可湿性粉剂450g／hm^2，防效37．0％，49．6％，4％吡高乳油225g／hm^2，防效19．8％24．4％，16000IU／μL苏云金杆茵悬浮剂750g／hm^2，防效0．16%-66．6％．     

芦笋皮中黄酮类化合物的提取工艺研究

为充分利用芦笋资源,对芦笋皮中黄酮类化合物的提取工艺进行研究,对乙醇浓度、温度、时间、料液比分别进行了单因素试验和L16(45)正交试验,并通过极差、方差分析对提取过程中显著影响提取率的因素进行了统计分析.结果表明,乙醇提取法的最佳工艺条件为:提取温度75℃,乙醇浓度80％,提取时间100 min,料液比1∶60,该工...     

芦笋组织培养快繁技术

[目的]探索芦笋的组织培养快繁技术.[方法]利用丰岛芦笋3—4月抽出的嫩茎为外植体,在不同培养基上诱导、增殖和生根.[结果]筛选出芦笋适宜的诱导培养基为MS+1.0 mg/L BA+0.1 mg/L NAA,增殖培养基为MS+0.5 mg/L BA+0.1 mg/L NAA,生根培养基为MS+1.0 mg/L IBA+...     

Influence of vegetative cycle of asparagus (Asparagus officinalis L.) on copper,iron, zinc and manganese content

The essential elements copper (Cu), iron (Fe), zinc (Zn) and manganese (Mn) were analyzed in fresh asparagus to determine the effects of the vegetative cycle of the plant on the micronutrient content. Asparagus samples were classified in two groups by diameter (<11 mm and >14 mm). Asparagus from a sample group with the same diameter were divided into two portions (apical and basal) according to distance from the tip. The concentrations of copper, iron, zinc and maganese increased during the vegetative cycle of the asparagus, mainly in the apical portion which showed significantly greater concentrations with respect to the basal portion. The >14 mm diameter asparagus presented higher levels of copper, zinc and manganese, whereas the concentration of iron was greater in the <11 mm diameter asparagus. The mean element levels were (mg/kg dry weight): Cu, 18.9±3.9; Fe, 91.7±33.7; Zn, 69.5±24.6 and Mn, 20.9±5.0).     

芦笋种质苗期对茎枯病的抗性评价

为了解不同芦笋种质对茎枯病的抗性差异,采用孢子喷雾法对其幼苗进行喷雾后48 h保湿处理,7 d后统计分析各种质的发病情况并计算病情指数。结果表明：野生型大理天门冬和B7/TX-4病情指数均为0,为免疫种质;井冈701、TC山东、井冈全雄(2)、B4-a/B20-a(紫)、B19-c(H)、B2-a/SD、B3/TX-6,病情指数均小于20,为中抗种质;太平洋2000病情指数为81.25,为感病种质。     

芦笋种质资源形态多样性分析

对46份芦笋种质进行形态多样性分析,结果表明：第一至第三主成分的方差贡献率分别为19.87%、15.38%、11.92%;二级分枝长度、主茎粗、二级分枝数、二级分枝粗、一级分枝粗、鳞片宽、笋鳞片长度、笋粗、笋鲜重、第1分枝以下的鳞片数量、第1分枝高度是芦笋形态分化的主要指标,也是芦笋选育种形态性状选择上关注的重点。基于形态性状的聚类分析,将46份芦笋种质分为两大类：Avalim、Pacific Endeavour、Pacific Peak、Backlim、Pacific Challenger 2、硕丰、JK107、Herkolim、Thielim、京绿芦1号、JK101、Precoce、Pacific 2000归为一类,其余33份种质归为一类。     

外源NO对低温胁迫下豇豆幼苗生长和生理特性的影响

研究不同浓度的外源NO供体硝普钠（sodium nitroprusside, SNP）溶液对8 ℃低温胁迫下豇豆幼苗生长和生理特性的影响,结果表明,0.5~1.5 mmol/L外源NO处理下,豇豆幼苗叶面积、根冠比、壮苗指数有所提高,脯氨酸（Pro）、可溶性蛋白和叶绿素含量增加,丙二醛（MDA）含量降低。过高或过低浓度的外源NO对低温胁迫下豇豆幼苗生长的缓解作用均不显著,过低浓度的外源NO会促进MDA累积。在低温胁迫下,适当浓度的外源NO能促进脯氨酸和可溶性蛋白的形成,提高叶绿素含量,降低膜脂过氧化程度,从而增强豇豆幼苗对低温胁迫的适应性。