氯化钙对花生中黄曲霉毒素B1提取及其快速检测结果的影响

本文以氯化钙为蛋白沉淀剂、黄曲霉毒素B1为靶标,探究了70%甲醇水（V/V）提取液中不同含量氯化钙对花生中黄曲霉毒素提取及其免疫检测结果的影响;采用样品加标回收的方法,研究比较了五种不同含量氯化钙对胶体金免疫层析试纸条和ELISA检测结果的影响。研究结果表明,样品经含1% CaCl2 （m/V）的甲醇水处理后,用胶体金免疫层析试纸条检测时,试纸条T线颜色梯度变化,不同浓度加标回收率等参数均得到明显改善,前处理效果显著;选取20份花生实际样品,经过这种前处理之后,进行胶体金免疫层析试纸条和ELISA检测,同时将其检测结果与免疫亲和层析高效液相色谱法（IAC-HPLC）进行比对,胶体金免疫层析试纸条与IAC-HPLC检测结果符合率为90%,间接竞争ELISA与IAC-HPLC检测结果相关性系数达0.996,表明本研究所改进的样品前处理方法能提高免疫检测准确度,具有很好的应用性。     

粮油产品黄曲霉毒素B1检测技术研究进展

对黄曲霉毒素检测技术进行了简要介绍和评述,并对近年来粮油及制品黄曲霉毒素B1快速检测方法研究进展和发展趋势进行了综述和讨论.     

粮油黄曲霉毒素B1 高效快速检测微柱的研制

研制并比较了7种不同类型的黄曲霉毒素B1 纯化微柱,优选出AFTB1 - Ⅰ亲和微柱,具有分离高效、操 作简便适于快速检测的特点。设计出与微柱净化配套使用的半自动化负压装置,可简化净化操作步骤、缩短操作 时间。对亲和微柱的进样条件、淋洗条件、洗脱条件、流速、结合容量、加标回收率、稳定性等进行了研究,结果表 明:微柱的结合容量> 25μg/kg,不同水平加标回收率范围为80. 00% ～91. 50%。不同批次微柱的加标回收率相对 标准偏差为1. 76% ,无显著差异。同时,采用现有国标方法,利用本实验研制的亲和微柱对实际样品净化,不同水 平加标回收率范围为80. 00%～92. 00% ,能满足国标检测限量范围内粮油中黄曲霉毒素B1 的快速检测要求。     

黄曲霉毒素B1检测中的应用

 采用黄曲霉毒素时间分辨荧光免疫层析试纸条及配套的时间分辨荧光速测仪,对油料饼粕中黄曲霉毒素B1的快速检测进行了应用研究。该时间分辨荧光免疫分析技术是基于时间分辨荧光免疫层析试纸条和载有Eu(Ⅲ)标记特异性单克隆抗体的样品瓶建立的检测技术。时间分辨荧光速测仪可内置标准曲线,直接输出检测结果。对6种油料饼粕做黄曲霉毒素B1添加回收率实验,回收率在70%～120%之间,批间、批内变异系数＜15%。在实际样品的检测中,时间分辨荧光免疫层析试纸条检测技术与液相色谱-串联质谱法相比,检测结果相对误差＜15%。时间分辨荧光免疫层析试纸条检测技术测定快速、准确,技术稳定、可靠,设备经济、小型,适用于大批量油料饼粕样品的快速检测和风险评估,具有广阔的应用前景。     

花生及其制品中黄曲霉毒素B1 免疫亲和柱净化—荧光快速检测技术研究

报道了一种免疫亲和柱净化-荧光法快速检测花生及其制品中黄曲霉毒素B1的分析方法。用70%甲醇对样品进行初步提取，过滤后用石油醚萃取脱脂，萃取液稀释后用免疫亲和微柱纯化富集，洗脱液放入黄曲霉毒素专用荧光定量速测仪器中自动读取结果。该方法直接读数的线性范围为0.3~25µg/kg，R2=0.9995，方法的平均回收率超过90%，变异系数低于5%，最低定量浓度为0.3µg/kg。应用于花生及其制品的黄曲霉毒素B1检测，单个样品检测全过程（含样品提取）所需时间可以控制在45min左右，检测成本低于其他仪器方法。     

免疫亲和净化-高效液相质谱法检测茯砖茶中黄曲霉毒素B1

为建立检测茯砖茶中黄曲霉毒素B1的免疫亲和净化-高效液相色谱质谱分析方法,并对20份茯砖茶样品中黄曲霉毒素B1含量进行测试.样品经过70％甲醇溶液匀浆提取,免疫亲和柱富集净化,经C18色谱柱分离后采用三重四级杆质谱检测.结果表明,HPLC-MS检测线性关系良好,方法检出限为0.03μg/kg,加标浓度2～20μg/kg...     

量子点标记荧光免疫法检测花生中黄曲霉毒素B1

建立了基于量子点标记二抗的间接竞争荧光免疫吸附测定方法（indirect competitive fluorescence-linked immunosorbent assay,cFLISA）,并研究检测花生中黄曲霉毒素B1可行性。采用谷胱甘肽为稳定剂,在水相中直接合成碲化镉（CdTe）量子点,并利用EDC与兔抗鼠二抗进行共价偶联,以黄曲霉毒素B1的单克隆抗体建立cFLISA方法。结果表明,该方法的灵敏度和最低检测限值分别为0.023ng/mL和0.001ng/mL,与传统的有机染料FITC-二抗法比较,灵敏度提高了30倍,花生样品加标0.1、0.05和0.025ng/g,回收率范围在88%~116%之间,变异系数均小于10%。建立的cFLISA方法可以较好的检测花生中黄曲霉毒素B1,并为其它真菌毒素的检测提供参考。     

抗黄曲霉毒素B1单链抗体(scFv)库的建立和筛选

从抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体细胞系中扩增到重链可变区(VH)和轻链可变区(VL),经PCR将VH、Linker和VL连接成单链抗体(scFv),并克隆到载体pCANTAB-5E,经电转化大肠杆菌TG1,构建了库容量为1×108的单链抗体库.通过辅助噬菌体M13K07感染后,使单链抗体展示在噬菌体衣壳蛋白pⅢ的N端,得到客容量为1×108的噬菌体展示的抗体库.将抗体库用于"淘洗-富集-扩增"4轮以后,得到针对AFB1特异性的噬菌体抗体.进一步以噬菌体感染大肠杆菌HB2151,在细菌细胞周质中可溶性大量表达,最终经竞争EUSA分析表明获得了3株可以稳定分泌抗黄曲霉毒素B1 scFv菌株,分别命名为3C3、383和4A2.     

粮油制品中黄曲霉毒素脱毒研究进展

黄曲霉毒素(Aflatoxin,AFT)是一类致癌性极强的剧毒物质,常存在于发霉的粮油制品中。本文综述了黄曲霉毒素去毒方法研究进展,并结合近年来黄曲霉毒素检测技术的研究,提出了将新型纳米材料吸附法与化学方法相结合的脱毒、去毒方法。以期对我国开展粮油黄曲霉毒素脱毒技术体系研究提供一些参考。     

高特异性黄曲霉毒素B1单克隆抗体的 制备及特性研究

本研究将黄曲霉毒素B1转化为其半缩醛B2a,在硼氢化钠（NaBH4）还原作用下与载体蛋白偶联制备完全抗原。将制备的完全抗原免疫Balb/c小鼠,经4次免疫后取其脾脏与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0细胞融合,采用半固体培养基筛选后鉴定,获得杂交瘤细胞株3A12,抗体的灵敏度可达6.1±0.025ng/mL,抗体与其它黄曲霉毒素B2、G1及G2的交叉反应率依次为7.8%、20.2%及0.6%,与黄曲霉毒素M1交叉反应率小于0.1%。为研发花生等农产品黄曲霉毒素B1特异性免疫分析技术及产品奠定了重要基础。     

黄曲霉毒素B1标准替代物的制备及其在花生样品检测中的应用

以抗黄曲霉毒素B1（AFB1）单克隆抗体的F(ab’)2 片断为抗原免疫兔子,得到AFB1抗独特型抗体。经过酶联免疫吸附法（ELISA）条件的优化,建立AFB1抗独特型抗体最佳竞争抑制曲线。该曲线与AFB1竞争抑制曲线相比较可知,AFB1抗独特型抗体与AFB1之间存在指数增长关系,且相关性系数R为0.999 8。以AFB1抗独特型抗体浓度与其相应的抑制率作标准曲线,ELISA法测定花生中AFB1添加回收率,范围在90.4%~100.2%之间。综上,AFB1抗独特型抗体可以作为AFB1无毒替代标准品,为黄曲霉毒素检测无毒化提供了广阔的应用前景。     

聚合7OE亚基1B/1R易位系材料的创制及其品质研究

为提高小麦1B/1R易位系的加工品质,本研究选用高分子量麦谷蛋白亚基组成为1/7+9/2+12的小麦1B/1R易位系品种科农199为母本,与高分子量麦谷蛋白亚基组成为1/7^OE+8^*/5+10的强筋春小麦品种津强6号杂交,利用分子标记在F₄代株系中筛选到一个7^OE亚基基因与黑麦碱基因聚合在同一条染色体上的1B/1R易位系材料。PCR结果显示,该聚合材料和非聚合材料在Glu-A1和Glu-D1位点没有差异。在温室种植条件下,对这些聚合材料和非聚合材料及其亲本进行麦谷蛋白溶胀指数(SIG)测定,结果表明,与1B/1R易位系亲本科农199比较,聚合5+10优质亚基后SIG值显著提高,聚合7^OE优质亚基后,SIG值进一步显著提高,部分聚合材料达到了强筋亲本津强6号的水平。将聚合材料和非聚合材料及其亲本种植于大田,发现聚合5+10和7^OE优质亚基株系的乳酸-SDS溶剂保持力(LA-SDS SRC)和SDS沉降值均显著高于只聚合5+10优质亚基的株系,但未达到强筋亲本...     

四川小麦品种高、低分子量麦谷蛋白基因和1B/1R易位的分子标记鉴定

为给四川小麦品质育种提供参考信息,利用7个HMW-GS、17个LMW-GS和1个1B/1R易位的特异分子标记,对105份2000年后育成的四川小麦品种进行上述基因检测。结果表明:(1)针对HMWGS,在Glu-A1位点,含Ax2*的品种有2份,频率为1.9%;在Glu-B1位点,含Bx7、Bx20、Bx17、By8和By9的品种分别有73、26、4、45和30份,频率分别为69.5%、24.8%、3.8%、42.9%和28.6%,未检测到含Bx7OE的品种;在Glu-D1位点,含Dx5的品种有65份,频率为61.9%。(2)针对LMW-GS,在Glu-A3位点,含Glu-A3a、Glu-A3b、Glu-A3c、Glu-A3d和Glu-A3f的品种分别有2、2、63、29和9份,频率分别为1.9%、1.9%、60.0%、27.6%和8.6%,未检测到含Glu-A3e和Glu-A3g的品种;在Glu-B3位点,含Glu-B3b、Glu-B3d、Glu-B3f、GluB3g和Glu-B3i的品种分别有18、10、1、75和1份,频率分别为17.1%、9.5%、1.0%、71.4%和1.0%,未检测到含Glu-B3a、Glu-B3c、Glu-B3e和Glu-B3h的品种。(3)含1B/1R易位的品种有36份,频率为34.3%。(4)组合6种和5种以上优质基因的品种分别有2份(频率为3.8%)和15份(频率为14.3%)。可利用这些品种作为亲本,在四川小麦品质育种中逐步导入优质基因Ax2*、Bx7、By8、Dx5、Glu-A3d、Glu-B3d、Glu-A3b和Glu-B3b,并淘汰1B/1R易位,优化四川小麦面筋优质基因组成。     

Anti-Photoaging Effect of Hydrolysates from Pacific Whiting Skin via MAPK/AP-1, NF-κB,TGF-β/Smad,and Nrf-2/HO-1 Signaling Pathway in UVB-Induced Human Dermal Fibroblasts

Chronic exposure to ultraviolet (UV) light promotes the breakdown of collagen in the skin and disrupts the extracellular matrix (ECM) structure, leading to skin wrinkling. Pacific whiting (Merluccius productus) is a fish abundant on the Pacific coast. In the current study, we investigated the anti-wrinkle effect of hydrolysate from Pacific whiting skin gelatin (PWG) in UVB-irradiated human dermal fibroblasts and the molecular mechanisms involved. PWG effectively restored type 1 procollagen synthesis reduced by UVB-irradiation. Also, we found that PWG inhibited collagen degradation by inhibiting MMP1 expression. Furthermore, PWG decreased cytokines TNF-α, IL-6, and IL-1β associated with inflammatory responses and increased antioxidant enzymes, HO-1, SOD, GPx, CAT, and GSH content, a defense system against oxidative stress. In terms of molecular mechanisms, PWG increased collagen synthesis through activating the transforming growth factor β (TGF-β)/Smad pathway and decreased collagen degradation through inhibiting the mitogen-activated protein kinases/activator protein 1 (MAPK/AP-1) pathway. It also suppressed the inflammatory response through suppressing the nuclear factor-κB (NF-κB) pathway and increased antioxidant enzyme activity through activating the nuclear factor erythroid 2/heme oxygenase 1 (Nrf-2/HO-1) pathway. These multi-target mechanisms suggest that PWG may serve as an effective anti-photoaging material.