Cryopreservation of sheep red blood cells. 1. Experiments with polyvinylpyrrolidone and other protective agents

The protection of sheep erythrocytes at freezing temperatures was investigated using glycerol, dimethylsulfoxide (DMSO), glucose and four different types of polyvinylpyrrolidone (PVP) as cryoprotective agents. Depending on type (molecular weight) and concentration good protection was obtained with PVP, whereas glycerol, DMSO and glucose were unsatisfactory. Recovery of cells after thawing was most successful when the cells had been frozen at a concentration of 1–2 × 10⁹ cells/ml. No cells tolerated freezing at −20 °G. Best results were obtained when the cells were frozen directly in liquid nitrogen (−196°G).     

Cryopreservation of sheep red blood cells. 2. Purified polyvinylpyrrolidone and hydrolyzed starch as protective agents

The protection of sheep erythrocytes against damage at low temperature (−196°C) was investigated using purified polyvinylpyrrolidone (PVP) and hydrolyzed starch as cryoprotective agents. Identical results were obtained with untreated PVP, neutralized PVP and PVP purified by chromatography. With hydrolyzed starch the cryoprotection was dependent on the type and concentration of the starch used and on the extent of hydrolysis of the starch prior to use. Cell recovery with some starch types was the same (80–85 %) as that obtained with PVP.     

绵羊妊娠期外周血T细胞及其亚群的观察

应用酸性α-萘酯酶(ANAE)组化反应标记绵羊妊娠期外周血T细胞,与间情期相比,T细胞总数和辅助性T细胞(Th)无明显变化(P>0.05),而抑制性T细胞(Ts)明显增加(P<0.05).间情期和妊娠期Th/Ts分别为4.6和2.6.结果提示,妊娠期羊可能通过增加Ts细胞来压低母体免疫水平.     

富铁酵母对家兔红细胞免疫功能的影响

为探讨富铁酵母对家兔红细胞免疫功能的影响,将32只家免随机分成富铁酵母高、低剂量组,FeSO4组及空白对照组,分别灌服富铁酵母(Fe元素8 mg/kg、4 mg/kg)、FeSO4(Fe元素4 mg/kg)及空白生理盐水;连续5 d后,检测红细胞C3g受体花环率和复合物(IC)花环率.结果:富铁酵母较FeSO4及空白组能显著提高红细胞C3h受体花环和红细胞复合物(IC)花环的百分率,但高、低剂量间无显著性差异.结论:富铁酵母能显著提高红细胞免疫功能.     

柔嫩艾美尔球虫T细胞刺激性抗原的免疫原性

以抗原对脾脏和盲肠扁桃体 T细胞的刺激能力和动物保护性试验为指标观察了柔嫩艾美尔球虫 ( Eimeriatenella)孢子化卵囊可溶性抗原及其组分的免疫保护作用。纯化的孢子化卵囊经超声波粉碎 ,获得全可溶性抗原 ,用Sephadex G- 2 0 0凝胶过滤层析后 ,获得 4个组分 ,分别命名为 1 .0蛋白、2 .0蛋白、3 .0蛋白和 4 .0蛋白。可溶性抗原及其各个组分 ,均能刺激球虫耐过鸡脾脏和盲肠扁桃体 T细胞增殖 ,其中以 3 .0蛋白作用最强。 3 .0蛋白再用Sephadex G- 75凝胶过滤层析 ,获得 3 .1蛋白、3 .2蛋白和 3 .3蛋白组分。其中 3 .2蛋白对脾脏和盲肠扁桃体 T细胞刺激作用最强。SDS- PAGE电泳显示 ,3 .2蛋白含有 2条多肽 ,相对分子质量分别约为 3 70 0 0和 4 0 0 0 0。动物免疫保护性试验表明 ,3 .2蛋白可以有效保护感染鸡抵抗柔嫩艾美尔球虫的攻击 ,盲肠病变计分为 1 .5 ,增重与不免疫不攻虫对照组相当 ,表明 3 .2蛋白是优良的疫苗候选抗原     

神经内分泌细胞在鸭胸腺中的表达特征

应用免疫组化技术并结合图像分析软件研究了β-内啡肽、胃泌素、胰高血糖素、5-羟色胺、血管活性肠肽、神经肽Y、生长抑素细胞在鸭胸腺中的表达特征。结果显示：7种神经内分泌细胞在胸腺中呈强阳性表达;β-内啡肽阳性细胞在皮质部较多,而胃泌素、胰高血糖素、5-羟色胺、血管活性肠肽、神经肽Y、生长抑素阳性细胞在髓质和皮髓质交界区的数量高于皮质部;除胰高血糖素外,其余6种神经内分泌激素在胸腺小体中呈不同程度的阳性反应。本试验结果说明,鸭胸腺不仅是中枢免疫器官,而且具有重要的神经内分泌功能;β-内啡肽阳性细胞在T淋巴细胞的发育中发挥重要作用;胃泌素、胰高血糖素、5-羟色胺、生长抑素、血管活性肠肽、神经肽Y阳性细胞在髓质部和皮髓质交界区的表达有利于其通过内分泌、自分泌或旁分泌方式调节T细胞的发育。同时,也探讨了胸腺小体的功能。     

Characterization and clinical application of mesenchymal stem cells from equine umbilical cord blood

Tendinitis of the superficial digital flexor tendon (SDFT) is a significant cause of lameness in horses; however, recent studies have shown that stem cells could be useful in veterinary regenerative medicine. Therefore, we isolated and characterized equine umbilical cord blood mesenchymal stem cells (eUCB-MSCs) from equine umbilical cord blood obtained from thoroughbred mares during the foaling period. Horses that had tendinitis of the SDFT were treated with eUCB-MSCs to confirm the therapeutic effect. After eUCB-MSCs transplantation, the core lesion in the SDFT was found to decrease. These results suggest that transplantation using eUCB-MSCs could be another source of cell treatment.     

脾酪氨酸激酶参与酿酒酵母甘露聚糖诱导绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1(SBD-1)的表达

为了探索脾酪氨酸激酶(Syk)是否参与酿酒酵母甘露聚糖(S.c M)诱导绵羊瘤胃上皮细胞(ORECs)β-防御素-1(SBD-1)表达的过程,首先利用免疫组化、RT-PCR和免疫荧光等方法检测Syk在ORECs内的表达情况;然后采用qPCR和Western blot方法检测S.c M刺激ORECs后Syk的表达变化,同时用Western blot方法检测Syk的磷酸化水平;接着用3条Syk特异性siRNAs(#1、#2和#3)转染ORECs 24 h后,qPCR检测Syk mRNA的表达变化,筛选出干扰效果最佳的Syk siRNA;最后用效果最佳的siRNA和Syk特异性抑制剂R406分别处理ORECs后,采用qPCR和ELISA检测SBD-1的表达变化,以确定Syk在S.c M诱导SBD-1表达过程中的作用。结果显示:Syk在ORECs内表达;且S.c M刺激ORECs后Syk的mRNA和蛋白表达水平显著高于未刺激组(P<0.01或P<0.05),S.c M刺激ORECs不同时间(5、15、30、45和60 min)均能使Syk发生磷酸化,且刺激15 min后磷酸化水平达到最大(P<0.01);此外,Syk的3条特异性siRNAs转染ORECs后Syk的表达均降低,且Syk siRNA#2的抑制效果最明显(P<0.01);同时Syk siRNA#2和R406均能极显著降低S.c M诱导ORECs SBD-1的表达(P<0.01)。上述结果表明,Syk参与S.c M诱导ORECs SBD-1的表达。     

Anatomical study of blood supply to the cervical spinal cord in the guinea pig

The aim of this study was to describe the arterial arrangement of the cervical spinal cord in the guinea pig. The study was carried out on 20 adult English self guinea pigs using corrosion and dissection technique. Batson's corrosion casting kit no. 17^© was used as a casting medium. The origin of the ventral spinal artery from the left vertebral artery was found on average in 35% of the cases and from the right vertebral artery on average in 40% of the cases. The ventral spinal artery with origin from the anastomosis of two medial branches was found on average in 25% of the cases. The presence of ventral radicular branches of rami spinales entering the ventral spinal artery in the cervical region was observed in 42% of the cases on the right side and in 58% of the cases on the left side. The presence of dorsal radicular branches of rami spinales that reached the spinal cord was observed in 63% of the cases on the left side and in 37% of the cases on the right side. The number of radicular branches supplying the spinal cord is greater in guinea pig than in humans.     

复方中药秦公散对小鼠脾脏和外周血中T、B淋巴细胞的影响

为探讨治疗奶牛乳房炎的复方中药秦公散对小鼠脾脏和外周血中T淋巴细胞和B淋巴细胞亚群的影响,采用流式细胞仪测定各处理组小鼠脾脏和外周血中用CD3+、CD4+ 、CD8+标记的T淋巴细胞百分率及CD4+/CD8+的比值和CD19+标记的B淋巴细胞百分率。结果表明,与蒸馏水组相比,秦公散高剂量组小鼠脾脏和外周血中CD3+、CD4+细胞百分率和CD4+/CD8+的比值均显著提高,对环孢菌素（CsA）抑制小鼠有显著恢复作用(P<0.05);秦公散高剂量（20 g/kg体重）可显著提高健康小鼠脾脏和外周血中CD19+细胞百分率(P<0.05),对环孢菌素抑制小鼠的CD19+细胞百分率有显著恢复作用(P<0.05)。结果表明,治疗奶牛乳房炎的复方中药秦公散通过提高机体中CD3+细胞、CD19+细胞百分率和调节CD4+/CD8+之间的平衡来显著提高小鼠机体的细胞免疫功能和恢复由环孢菌素（CsA）抑制的小鼠机体免疫力。     

亚硒酸钠对小鼠免疫器官组织结构的影响

为了研究亚硒酸钠对小鼠胸腺、脾脏组织结构的影响。给小鼠腹腔内注射 0 .5%半乳糖(50 mg/ kg/ d) ,连续 8周 ,建立衰老模型组 ;自第 4周开始给衰老用药组腹腔注射亚硒酸钠(2 mg/ kg/ d) ,连续 4周。应用电子天平称量小鼠脾、胸腺重量 ,并对胸腺、脾进行常规石蜡切片 ,观察衰老模型组、衰老用药组和对照组之间胸腺、脾组织结构的差异。结果表明 ,硒对老龄小鼠胸腺、脾的重量影响不大 ,组织切片观察显示 ,亚硒酸钠有延缓小鼠脾脏、胸腺组织衰老的作用 ,故亚硒酸钠对延缓小鼠免疫器官衰老有一定的作用     

猪十二指肠中生长抑素阳性细胞和免疫细胞发育的研究

应用免疫组织化学技术分别研究猪十二指肠生长发育过程中生长抑素(SS)阳性细胞、IgA阳性细胞和酸性非特异性脂酶(ANAE)阳性细胞数量的变化。结果表明,SS阳性细胞的发育模式与IgA阳性细胞和AENE阳性细胞的呈相反趋势。SS阳性细胞数量于3日龄开始增加,20日龄达到第一个高峰,然后于45日龄呈极显著降低(P<0 01),90日龄又呈显著上升趋势(P<0 05),至120日龄时又达到第二个高峰;从出生至3日龄猪十二指肠无IgA阳性细胞的分布,20日龄时IgA阳性细胞开始出现,45日龄IgA阳性细胞数量显著增加(P<0 05)并达最高峰,90日龄时又呈下降趋势;猪十二指肠AENE阳性细胞数量在3日龄及20日龄均极显著增加(P<0 01)。然后于45日龄开始显著减少(P<0 05)。结果表明猪十二指肠中SS阳性细胞的发育对免疫细胞的发育可能具有重要的调节作用。     

山药对免疫机能低下小鼠耐缺氧能力的影响

探讨山药对氢化可的松(HC)诱导的免疫机能低下小鼠耐缺氧能力的影响。按析因分析法设计2×2因子,将40只小鼠分为对照组(A),模型组(B),用药组(C),低下用药组(D),B、D组每天腹腔注射HC(20mg/kg),连续21d;自第4天开始,D组注射HC的同时,C、D组每天灌胃山药水煎液(50mg/kg);A、B组灌胃等量蒸馏水;第22天进行常压密闭耐缺氧试验,记录小鼠存活时间,后处死小鼠迅速称其脾脏、胸腺重量,计算脾指数、胸腺指数,常规石蜡切片,HE染色。结果显示,山药可延长免疫机能低下小鼠的缺氧耐受时间,提高脾指数、胸腺指数(P0.05),改善胸腺脾脏的组织结构。山药对HC有一定的颉颃作用。     

长期饮酒对哺乳动物免疫器官生长发育的影响

利用未成熟小鼠进行酒精的毒性试验,研究了酒精对哺乳动物免疫功能的毒性作用。试验选用48只21日龄断奶未成熟小鼠随机分为3组,公母各半,试验组Ⅰ（啤酒组）自由饮用啤酒,试验组Ⅱ（白酒组）饮用稀释的白酒（5％）,对照组饮用自来水。试验期间定期测量体重;试验5周后对体重、脏器重等指标进行称量;同时对肝脏、脾脏和胸腺的组织学形态进行观察。结果表明：整个试验期啤酒组体重显著增加;脾脏和胸腺重受到不同程度的影响;脾脏组织学观察发现不同程度的病变,而胸腺没有发现明显的组织学变化;肝脏重量与形态学的观察也发现了酒精的毒性作用。由此可见,长期饮酒抑制了红细胞的生成与脾脏的发育,从而使免疫力下降,表明长期饮酒对小鼠的免疫功能和肝脏均有直接的毒害作用。     

黄芩苷对H6N6禽流感患鼠血液指标的影响

为了研究黄芩苷对H6N6禽流感(avian influenza,AI)病毒感染小鼠的血液学指标的影响。选用6-8周龄小鼠108只,随机平均分为阴性对照组、病毒阳性组、低、中、高黄芩苷治疗组和西药对照组;攻毒:阴性对照组尾静脉注射灭菌生理盐水0.2mL/只,其余各组均尾静脉注射H6N6禽流感病毒(108EID50) 0.2mL/只;治疗:攻毒3 d后进行灌胃给药,黄芩苷治疗组(0.014,0.028,0.056 mg/只/d),西药对照组(0.39 mg/只/d),病毒阳性组、阴性对照组每天给予等体积灭菌生理盐水,分别于治疗后3、6、9 d采血进行血常规检测。通过对各组别患鼠血液中白细胞、红细胞和血小板数目变化的分析。结果表明:(1)治疗后3、6、9 d高剂量黄芩苷组白细胞总数、中性粒细胞数目均极显著低于病毒阳性组和低、中剂量黄芩苷组(P0.01);(2)在治疗3、6和9 d时淋巴细胞数目和淋巴细胞百分比均极显著或显著高于病毒阳性组、低剂量黄芩苷治疗组和中剂量黄芩苷治疗组(P0.01或P0.05),与西药对照组差异不显著(P0.05);(3)在治疗3、6和9 d时,所有黄芩苷治疗组红细胞数目、血红蛋白浓度和平均红细胞血红蛋白含量均极显著高于病毒阳性组(P0.01),与阴性对照组合西药对照组差异不显著(P0.05);(4)在治疗3、6和9 d时所有黄芩苷治疗组血小板数目均极显著低于病毒阳性组(P0.01)。小结:黄芩苷在较高浓度时,对H6N6禽流感引起的炎症反应,具有降低白细胞总数,抑制出血反应的作用。     

饲料中添加复方中药对小鼠血液生理生化指标和免疫器官指数的影响

选取120只昆明种小鼠随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ 4个组,每组30只(雌雄各半),Ⅰ组为常规饲喂对照组,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组饲料中分别添加比例为0.75%、1.00%和1.50%的复方中药进行试验。结果表明,与对照组相比,试验第3周,Ⅲ、Ⅳ组小鼠胸腺指数和脾脏用指数显著或极显著提高(P<0.05或P<0.01);在第1、3周时,Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组血液总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)升高,Ⅲ和Ⅳ组胆固醇(CHO)和甘油三酯(TG)均显著或极显著提高(P<0.05或P<0.01);同时,Ⅲ、Ⅳ组小鼠血液中间细胞(MID)和淋巴细胞(LYM)也显著增加(P<0.05)。因此,在饲料中添加复方中药饲喂小鼠能促进免疫器官发育,并在一定程度上提高其机体免疫力。     

苜蓿皂苷对小白鼠体内溶血的研究

为了探究摄入苜蓿皂苷(alfalfa saponin, AS)是否会引起血管内溶血,选取180只健康小白鼠,按体重和性别随机分为6个处理,每个处理3个重复,每个重复10只。将1mL 0.0125、0.025、0.05、0.1、0.2 g·mL^-1皂苷分别灌胃Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组小鼠,对照组灌胃等量的生理盐水(1 mL),试验期为30 d。检测红细胞数目(red blood cell, RBC)、形态、压积(hematocrit, HCT)、平均红细胞体积(erythrocyte mean corpuscular volume, MCV)、平均血红蛋白浓度(mean corpuscular hemoglobin, MCH)、血浆游离血红蛋白(free hemoglobin, FHb)、网织红细胞计数(reticulocyte count, RET)及红细胞渗透脆性最大、最小抵抗值(maximum/minimum osmotic fragility of red blood cells, OF_max/OF_min),采血和骨髓制作观察血涂片及骨髓涂片,制作实质性器官心、肝的切片。结果表明: 1)灌胃苜蓿皂苷后,小白鼠血常规中红细胞数目和血细胞比容均降低且Ⅴ组显著低于对照组(P<0.05),平均血红蛋白浓度均高于对照组且Ⅳ、Ⅴ组与对照组相比差异显著(P<0.05)。2)Ⅳ、Ⅴ组血浆游离血红蛋白含量极显著高于对照组(P<0.01);Ⅳ组网织红细胞计数极显著高于对照组(P<0.01)。3)随着灌胃剂量的加大,红细胞逐渐出现轻度大小不等,着色较深,形态异常的现象。4)红细胞渗透脆性最大抵抗值显著升高且差异显著(P<0.05),最小抵抗值有逐渐升高的趋势。5)灌胃后粒系比有不同程度的降低,Ⅴ组与对照组相比差异显著(P<0.05);红系比则有不同程度的升高,Ⅴ组与对照组相比差异显著(P<0.05);粒红比不但降低而且变化明显,Ⅳ、Ⅴ组显著低于对照组(P<0.05)。 6)灌胃对实质性器官没有影响但是组织更易碎。综上,高剂量的苜蓿皂苷能够引起血管内溶血。