木质层孔菌诱导漆酶及部分酶学性质研究

采用单因素试验的方法,对木质层孔菌产漆酶的培养条件进行优化,并研究了漆酶的性质。结果表明,在以1 mmol/L愈创木酚为诱导剂的条件下,漆酶培养的最佳碳源是小麦秸,最佳氮源是牛肉膏,最适培养温度是28℃,最佳培养时间是192 h;漆酶在反应温度32℃、pH 4.0、底物浓度1.2 mmol/L的环境条件下酶活性最高,金属离子对其活性也有一定的影响,其中Cu2+对漆酶有激活作用,Fe2+和Mn2+对漆酶活力有一定的抑制作用,Mg2+和Na+对漆酶影响不大。     

杏鲍菇漆酶部分酶学性质的研究

摘要：从杏鲍菇子实体中提取漆酶,用分光光度法测定漆酶活力。实验结果表明,杏鲍菇漆酶的最适pH为3.0;最适温度为45℃;热稳定性和贮存稳定性较高;Ca2+ 、Mn2+ 、Fe2+、Ag+对酶的活性有抑制作用,Na+、 k+、、Mg2+ 、Cu2+ 、Pb2+ 、Zn2+对酶的活性有促进作用。     

黑木耳漆酶酶学性质分析

从12个黑木耳菌株中筛选出一株黑木耳漆酶高产菌株——地茂1号,对其进行Native—PAGE,发现其含有3种漆酶同工酶。对其发酵液进行酶学性质分析,发现地茂1号在液体培养基中第11天酶活达到最大,为382．6U／L,最适温度为50℃,最适pH值为3．2,温度及pH稳定性较好。     

榆黄菇产漆酶发酵条件研究

采用单因素试验优化榆黄菇产漆酶发酵条件,筛选出最适宜产漆酶发酵条件为:接种量3%,温度30℃,初始pH值6.0⁷.0,加入可溶性淀粉作为碳源,加入蛋白胨、酵母膏为氮源。     

糙皮侧耳P5漆酶酶学性质的初步研究

对糙皮侧耳P5漆酶的酶学性质进行了研究.结果表明,该酶的最适反应温度为63℃,最适反应pH为6.0;该酶的酸碱稳定性和温度稳定性较好,在pH5.0～6.5条件下处理24h可保留97％以上的酶活,4～20℃处理1h酶活保持不变,60℃处理1h可保留80％以上的酶活;金属离子对漆酶酶活有明显的影响,Cu2+、Mn2+、Zn2+对酶的活性有促进作用,Ca2+、Fe2+、Fe3+和Pb2+对酶的活性有抑制作用.该结果可为耐高温漆酶的开发利用提供参考.     

1株产木聚糖酶菌株的鉴定、产酶条件的优化及酶学性质初探

以木聚糖为唯一碳源,从腐败的甘蔗叶中分离木聚糖降解菌,结合木聚糖水解圈法及胞外酶活测定(DNS)法筛选到1株高产木聚糖酶的菌株ZJ-1。16S rRNA序列及系统发育分析结果表明ZJ-1菌株与链霉菌(登录号:KC856931.1)处于同一最小分支,且与多株链霉菌属菌株的相似性均达到98%以上,故将菌株ZJ-1初步鉴定为链霉菌(Streptomyces sp.ZJ-1)。在最适产酶条件(碳源CMC-Na、氮源蛋白胨、初始培养p H 6.5~10.0、培养温度25℃、连续培养6 d)下,ZJ-1所产木聚糖酶的活性达40.0 U/m L。ZJ-1所产木聚糖酶的最适反应温度为60℃,最适反应p H值为6.0。     

1株产木聚糖酶菌株的鉴定、产酶条件的优化及酶学性质初探

以木聚糖为唯一碳源,从腐败的甘蔗叶中分离木聚糖降解菌,结合木聚糖水解圈法及胞外酶活测定(DNS)法筛选到1株高产木聚糖酶的菌株ZJ-1。16S rRNA序列及系统发育分析结果表明ZJ-1菌株与链霉菌(登录号:KC856931.1)处于同一最小分支,且与多株链霉菌属菌株的相似性均达到98%以上,故将菌株ZJ-1初步鉴定为链霉菌(Streptomyces sp.ZJ-1)。在最适产酶条件(碳源CMC-Na、氮源蛋白胨、初始培养p H 6.5¹0.0、培养温度25℃、连续培养6 d)下,ZJ-1所产木聚糖酶的活性达40.0 U/m L。ZJ-1所产木聚糖酶的最适反应温度为60℃,最适反应p H值为6.0。     

白腐菌Trametes pubescens MB89产漆酶发酵条件的优化及其部分酶学性质的研究

以白腐菌T.pubescens MB89为漆酶培养菌.研究培养方式、温度和Cu2+等因素对发酵产生漆酶的影响.在漆酶性质研究中,研究了温度、pH值、底物种类、金属离子等因素对漆酶催化活性的影响.结果表明,T.pubescens MB89产漆酶的最佳培养温度为25℃,最适Cu2+浓度1.0μmol/L,120 r/min振荡培养优于静止培养.T.pubescens MB89漆酶氧化底物的最适作用温度为25℃,最适pH随底物的不同而不同.Cu2+、Co2+、K+、Ag+对漆酶活性有促进作用,Fe2+、Fe2+、ca2+等离子对漆酶活性有抑制作用.Na+、Mg2+、Zn2+、Mn2+等离子对漆酶酶活性影响不大.由此说明,振荡培养T pubescens MB89生产漆酶的过程中Cu2+的存在可以加速漆酶的产生.T pubescens MB89漆酶酶活性受温度、pH值、金属离子、底物等因素的影响.     

无柄灵芝菌LZ02高产漆酶条件及部分酶学性质分析

【目的】 从采自新疆天山的无柄灵芝菌(G.resinaceum)中筛选获得1株高产漆酶的LZ02菌株,对其产酶条件进行优化,研究部分酶学性质。【方法】 采用单因素实验,对其产酶条件优化并研究其酶学特性,采用双向电泳检测酶蛋白。【结果】 LZ02菌株产漆酶的最佳碳源为2.5%麦麸+1%葡萄糖,最佳氮源为干酪素; Cu²⁺、Mg²⁺、Fe²⁺、 Zn²⁺和Ca²⁺的添加对LZ02产漆酶有一定的促进作用,而Co²⁺具有明显的抑制作用;藜芦醇和愈创木酚抑制产酶并使产酶高峰由第3 d推后至第9 d,添加没食子酸和ABTS对产酶影响不大,单宁酸对产酶有抑制作用。LZ02菌漆酶最适反应温度为60℃,且在80℃仍具有漆酶活性;在40℃,pH 4.0~5.0,酶活性最稳定;最适反应pH为3.0,Mn²⁺ 、Zn²⁺、 Cu²⁺ 、Ba²⁺和K⁺对酶稳定性有一定的促进作用,Co²⁺、Cd²⁺、Cr²⁺和Pb²⁺对酶的稳定性具有明显的破坏作用;对菌体及发酵液进行了双向电泳检测,测定其等电点为4.1;获得了1个纯化酶蛋白质谱序列,该蛋白与Ganoderma Lucidum来源的Laccase高度同源。【结论】 无柄灵芝菌(G.resinaceum)漆酶的合成和分泌受到营养水平、培养条件、生长阶段以及培养基中诱导剂的严格调控,木质素或木质素相关的芳香类化合物、N源和C源也能调节漆酶的合成;漆酶活性对不同种类、不同浓度的金属离子以及诱导剂的响应不尽相同,其具有较复杂的生理功能及调控机制。     

重组血红密孔菌漆酶的纯化、酶学性质及染料脱色研究

为了研究血红密孔菌漆酶重组表达后的酶学性质和染料脱色效果,利用超滤、阴离子交换层析和凝胶层析从毕赤酵母发酵液中纯化出重组漆酶。结果表明:重组漆酶分子质量为62.8 kD,氧化底物2,2′--连氮--二（3--乙基苯并噻唑--6--磺酸）（ABTS）、丁香醛连氮和2,6--二甲氧基苯酚的最适pH分别为2.2、4.2和4.0,动力学常数Km分别为20.73、48.48和1 252.39 μmol/L;该漆酶在有机溶剂中的活性稳定性:甲醇乙醇丙酮二甲基亚砜;在铜离子和铝离子中酶活比较稳定,汞离子对酶活有较强的抑制作用;纯化的重组漆酶在无介体时可有效脱色RB亮蓝,但对靛红和结晶紫的脱色较为缓慢;当添加介体ABTS或紫脲酸时,可在短时间内实现对靛红和结晶紫的脱色,显示出该重组漆酶在染料废水处理中具有较好的应用前景。      

金针菇菌渣提取液对滑菇菌丝生长和漆酶活性的影响

为金针菇菌渣二次利用栽培滑菇提供依据,考察了金针菇菌渣提取液添加至固化培养基、液体培养对滑菇菌丝生长及漆酶活性的影响。结果显示:在测试的范围内金针菇菌渣提取液均提高了滑菇菌丝生长速度、菌丝生长量和漆酶活性,金针菇菌渣适合滑菇菌丝生长,可代替一定比例的木屑用于滑菇的栽培,提高了资源利用以及降低了食用菌栽培原料成本。     

不同施用模式下高效氯氰菊酯对滑菇生长状态的影响

[目的]了解施用不同浓度的高效氯氰菊酯对滑菇生长状态的影响,以确定实际生产中该药剂施用的最佳稀释倍数。[方法]采用控制变量法,研究不同浓度的4.5%乳油状高效氯氰菊酯对滑菇C3-1和滑菇RH的菌丝体生物量、蛋白质含量和超氧阴离子自由基清除率等的影响。[结果]施用不同浓度的4.5%乳油状高效氯氰菊酯对滑菇的生长状态都有显著抑制作用,且抑制作用大小不同。当稀释倍数为4 000时,4.5%乳油状高效氯氰菊酯对滑菇C3-1和滑菇RH的生长都有相对较强的抑制作用;当稀释倍数为8 000时,滑菇RH的生长量、菌丝体的蛋白质含量和超氧阴离子自由基清除率均相对较高,均仅次于对照组;当稀释倍数为12 000时,滑菇C3-1的生长量、菌丝体的蛋白质含量和超氧阴离子自由基清除率均较高。[结论]综合分析,在保证高效氯氰菊酯除虫灭菌的药效情况下,4.5%乳油状高效氯氰菊酯稀释倍数以8 000~12 000倍为宜,此时药剂的使用对菌丝体生长的影响最小。     

滑菇子实体多糖提取条件优化及抗氧化活性研究

滑菇子实体多糖(fruiting body polysaccharide,FPS)在抗氧化、增强机体免疫力等方面有重要作用。通过Plackett-Burman试验和响应面方法得到FPS的最佳提取条件:提取次数2.55,乙醇浓度95%,乙醇倍数3.22倍,其理论预测值为24.88%;对提取参数取整后,其实验值为24.53%。在FPS浓度为500 mg/L时,对羟基自由基、超氧阴离子和DPPH的自由基清除率分别为11.51%、23.37%和20.19%,其还原力为0.11,表明滑菇子实体多糖具有一定抗氧化能力。     

赤霉素、稀土对滑菇液体培养中菌丝体和多糖产量的影响

采用摇床培养方法研究了赤霉素、稀土单独施用对滑菇(Pholiota nameko)菌种液体培养中菌丝体干重及胞外多糖得率的影响。结果表明,适量的赤霉素、稀土单独施用均能促进滑菇菌丝生长,同时还能提高胞外多糖得率。滑菇最适赤霉素施用量为8 mg/L、稀土施用量为80 mg/L。     

长绒毛栓菌(Trametes villosa DSM 9591)产漆酶的发酵条件优化

[目的]通过响应面法优化长绒毛栓菌发酵培养基,提高漆酶的产量。[方法]首先通过Plackett-Burman筛选出影响漆酶产量的3个主要因素;随后以葡萄糖浓度、二甲基苯胺浓度、摇床转速3因素自变量,采用Box-Behnken设计方法进行响应面试验,得到最佳发酵条件。[结果]回归分析得到最佳发酵条件方程,最佳的发酵条件为葡萄糖浓度12.37 g/L,二甲基苯胺浓度1.348 mmol/L,转速200r/min,此时漆酶的产量最高,经验证达4.1 U/ml,比初始条件提高了1.56倍。在10 L的发酵罐中,在1.0 VVM、350 r/min条件下培养时,漆酶产量最高可达13.6 U/ml。[结论]该研究得到了长绒毛栓菌产漆酶最佳的培养条件,为漆酶生产提供了更好的方法,为其今后的工业化生产奠定了基础。     

白腐菌产漆酶活化木粉制备纤维板的力学性能

利用白腐菌产漆酶的特性,优化连续培养高活漆酶,使得大量培养漆酶成为可能。结果表明:在连续培养和直接培养两种情况下,第11天时漆酶的酶活最高;利用连续培养白腐菌得到的大量的粗漆酶来处理木粉,活化其木质素成分,使其能够替代一部分的脲醛树脂胶制备纤维板。静曲强度上升了18.95%,弹性模量上升了35.49%,内结合强度上升了44.11%。漆酶催化氧化了木质素,增加了木质纤维中化学键的数量,使木质纤维之间的胶结点增多。与此同时,经过漆酶处理的木粉增强了脲醛树脂胶黏剂在纤维表面的渗透和扩散能力,提高了纤维板的力学性能。     

白腐菌产漆酶培养条件的响应面法优化

[目的]采用Plackett-Burman试验设计法、响应面法,对灰盖鬼伞菌(Coprinopsis cinerea)产漆酶进行了发酵工艺条件的优化研究。[方法]首先利用Plackett Burman设计试验筛选出影响产酶的麦麸、稻草粉和酵母粉3个主要因素。在此基础上,用最陡爬坡路径逼近最大响应区域,再利用Box-Behnken试验设计、响应面分析法进行回归分析。[结果]麦麸、稻草粉和酵母粉浓度与漆酶活力存在显著的相关性,得到最佳培养基条件。当麦麸10.188 g/L、稻草粉9.379 g/L、酵母粉3.613 g/L时,漆酶活力达到729.89 U/ml。[结论]经3批培养验证,预测值与验证试验平均值接近。     

变色栓菌产漆酶培养条件及热激对发酵的影响

[目的]为提高漆酶发酵水平提供一种有效的控制策略。[方法]采用栓菌菌株14001,对其发酵产漆酶条件及热激对漆酶酶活的影响进行研究。[结果]栓菌产酶最适Cu2＋浓度为20mg/L,最适起始pH值为4.5,最适接种量为10%,最适培养温度为25℃,并对发酵过程进行pH控制,其酶活比不进行pH控制的酶活最大能提高30%;热激作用能诱导漆酶相应的mRNA产生,提高漆酶酶活1倍以上。[结论]优化后的培养条件和热激均能提高漆酶的发酵水平。     

香菇病毒对香菇菌丝生长和漆酶活性的影响

利用电镜观察检测到不正常生长的香菇菌丝中存在大量直径约30 nm的球状病毒,进一步酶解和电泳检测确定病毒的核酸为单链RNA。采用尖端生长点传代技术,经过3代传代,得到不含病毒的香菇菌株,该菌株在固体和液体培养基中的生长速度都远远高于带有病毒的菌株。脱除病毒的菌株在液体发酵中产漆酶的量也明显高于带有病毒的菌株,说明该香菇病毒对香菇的生长和产酶生理过程有明显的抑制作用。