冷冻保护剂种类和胚胎发育阶段对绵羊冷冻胚胎移植受胎率的影响

对冷冻保护剂种类和胚胎发育阶段对绵羊冷冻胚胎受胎率的影响进行了研究。结果表明:分别以乙二醇、甘油为冷冻保护剂冷冻保存绵羊囊胚,解冻后移植受胎率差异不显著,表明冷冻保护剂种类对绵羊冷冻胚胎移植受胎率未有明显影响;以乙二醇为冷冻保护剂,冷冻绵羊不同发育阶段的胚胎,囊胚、扩张囊胚解冻后移植受胎率均明显高于桑椹胚的,囊胚和扩张囊胚之间差异不显著,表明胚胎发育阶段对绵羊冷冻胚胎移植受胎率有显著影响。     

哺乳动物胚胎冷冻保存研究进展

[目的]介绍哺乳动物胚胎冷冻保存技术的最新研究进展。[方法]从冷冻原理、防冻剂种类、冷冻方法、解冻方法等方面综述了哺乳动物胚胎冷冻保存技术的最新研究进展。[结果]胚胎冷冻保存的原理是阻止冷冻、解冻过程中细胞内形成致死冰晶;防冻剂的种类大致分为低分子量渗透性防冻剂、低分子量非渗透性防冻剂、大分子物质、生物活性物质;胚胎冷冻方法主要有常规慢速冷冻法、玻璃化冷冻法和快速冷冻法;解冻方法主要介绍了快速解冻。[结论]胚胎冷冻保存技术的应用愈加广泛,将对胚胎生物工程和其他生物技术产生推动作用。     

奶牛冷冻胚胎细管内一步解冻法的应用效果

奶牛冷冻胚胎细管内一步解冻法的应用效果贺文杰和彦利徐照学王二耀辛晓玲李峰（河南省农业科学院畜牧兽医研究所，郑州４５０００２）为了在畜牧业生产中推广应用冷冻胚胎移植技术，就必须简化冷冻胚胎的解冻、脱除冷冻保护剂的操作步骤。为此，我们于１９９４年开展了该...     

超速冷冻8-细胞鼠胚

用3.5M和2.5M DMSO作冷冻保护剂进行超速冷冻8-细胞鼠胚。用前者作保护剂的鼠胚,无论在体外培养和体內发育的情况都好于后者。前者中的8-细胞鼠胚解冻后的存活率为78.9％;存活胚胎体外发育到囊胚的比率为83.4％,体內附植率为63.9％,胎儿形成率为43.2％。实验证明,超速冷冻保存胚胎是一种省时、省力、省钱的好方法。     

华北落叶松胚性组织超低温保存技术研究

  目的  超低温保存是植物优良种质长期保存的重要方法。本文为探究梯度预处理对超低温保存存活率的影响，以期有效保存华北落叶松胚性组织的发育潜能。  方法  本研究以华北落叶松胚性组织为材料，对超低温冷冻保存程序中预培养、冷冻处理方式、解冻方式和恢复培养等关键环节开展研究。预培养和冷冻保护共设计成4种处理，以不经过预培养和冷冻保护直接冷冻保存为对照，每个处理重复3次。  结果  结果表明:处理组合1、2、3之间虽无显著差异，但结合冷冻保护剂二甲基亚砜（ DMSO）对细胞具有一定毒害作用，高浓度的DMSO会影响后续胚性组织的恢复甚至造成细胞死亡，因此选出效果较好的超低温保存方法为: 0.2、0.4 mol/L山梨醇液体梯度预处理与0.4 mol/L山梨醇 + 5%DMSO为冷冻保护剂进行冷冻保护，最佳解冻方式为37 ℃水浴，解冻后的胚性愈伤组织细胞活性最高达78%；超低温保存后的胚性组织与正常增殖的胚性组织在外观及显微结构上无明显差异，且低温保存后的愈伤组织仍保持分化形成体细胞胚的能力。  结论  研究结果为华北落叶松乃至其他针叶树胚性组织的超低温保存提供了参考。      

人胚胎成纤维细胞的冷却保存

将6-14代的人胚胎成纤维细胞以0.5,0.62,0.89和1.12℃/min的降温速率用胚胎冷冻法进行超低温冷冻保存,解冻活率达到0.83-0.93。并证明平衡时间以2-2.5h为宜,诱发结晶步骤可以省略,其饲养层寿命长达25-28d,还可反复冷冻,长期应用于胚胎干细胞的分离与克隆研究。     

人胚胎成纤维细胞的冷冻保存

将6～14代的人胚胎成纤维细胞以0.5、0.62、0.89和1.12 ℃/min的降温速率用胚胎冷冻法进行超低温冷冻保存,解冻活率达到0.83～0.93.并证明平衡时间以2～2.5 h为宜,诱发结晶步骤可以省略.其饲养层寿命长达25～28 d,还可反复冷冻,长期应用于胚胎干细胞的分离与克隆研究.     

绵羊胚胎冷冻保存及移植的研究

本研究的目的在于建立绵羊胚胎的慢速冷冻和玻璃化快速冷冻保存方法,为绵羊胚胎移植技术应用于生产提供保证。结果:慢速冷冻保存,解冻后正常胚胎占72％,移植受体的受胚率33％、产羔率66％。玻璃化快速冷冻保存,解冻后正常胚胎率亦达72％,移植受体3只,产羔4只。     

中国红豆杉种子超低温保存技术研究

【目的】探索中国红豆杉种质资源的超低温保存技术,为红豆杉种质资源的开发利用提供支持。【方法】采用多重单因素试验法,将中国红豆杉种子前处理后,采用9种不同的冷冻保护剂处理,之后分别进行0 ℃冷浴静置、25 ℃室温0.6 MPa抽真空和冰浴250 W超声波处理,处理时间分别为0,5,10和15 min;然后按照4种不同的冷冻方式投入液氮中冷冻保存,保存结束后分别采用37 ℃水浴快速、20 ℃流动自来水、5 ℃慢速和25 ℃室温静置进行解冻,最后探讨了在较优的3种冷冻保护剂条件下保存时间对红豆杉种子活力的影响。以氯化三苯基四氮唑（TTC）还原法测定冷冻保存后种子的活力。【结果】冷冻保护剂、保护剂处理方式和处理时间、冷冻方式、解冻方式、保存时间均对超低温冷冻保存后的红豆杉种子活力具有明显影响。9种冷冻保护剂中较优的是体积分数8%二甲基亚砜（DMSO）、体积分数5%乙二醇和PVS-4,冻存后中国红豆杉种子TTC还原量分别为（2.679 7±0.255 6）、（2.290 4±0.040 7）和（2.055 5±0.009 9） mg/g;冰浴250 W超声波处理10 min的效果最好,TTC还原量为（2.143 1±0.098 6） mg/g;4种冷冻方式中－20 ℃预冻1 h后投入液氮保存红豆杉细胞活性相对较高,TTC还原量为（2.454 4±0.069 5） mg/g。37 ℃水浴快速解冻后细胞活力更高,TTC还原量为（2.469 7±0.022 1） mg/g。【结论】红豆杉种子的最佳超低温保存技术条件为：采收后的新鲜种子干燥后于5 ℃条件下放置9个月打破其休眠,然后机械去掉种子硬壳,用蒸馏水浸泡12 h,脱去种子内皮,在无菌条件下用体积分数75%酒精消毒30 s,无菌水冲洗2～3次,沥干,移入冷冻管中,加入体积分数8% DMSO冷冻保护剂,封口,于冰浴250 W超声波条件下浸泡处理10 min,于-20 ℃预冻1 h后置于液氮中冷冻保存72 h,然后在37 ℃水浴中快速解冻。在此条件下,中国红豆杉种子活力最高,TTC还原量可达（2.469 7±0.022 1） mg/g,而且同等条件下,选用PVS-4冷冻保护剂更有利于红豆杉种子的超低温长期（1个月以上）保存。     

牛胚胎冷冻技术及冷冻保护剂研究进展

胚胎冷冻保存是胚胎移植过程中重要的步骤之一,在地方牛品种遗传资源保护方面具有广泛的应用价值。当前胚胎冷冻技术有3种,一是慢速冷冻法,二是快速冷冻法,三是玻璃化冷冻法,冷冻保护剂可分为细胞内液冷冻保护剂、细胞外液冷冻保护剂与抗冻蛋白。该文综述了国内外牛胚胎冷冻技术及冷冻保护剂的研究进展,旨在为相关从业人员提供技术参考。     

哺乳动物受精卵的冷冻保存

序言有关哺乳动物受精卵冷冻保存的研究,主要是由实验用小动物开展起来的,其研究历史较短。50年代,Ferdow 等人初次成功地把冷冻家兔受精卵发育成仔胎,到70年代,Whittingham 从完全新的概念出发揭示了小白鼠胚胎冷冻保存的可能性,并于1972年发表了从小白鼠冷冻以及解冻胚胎育仔的论文。与此同时 Wilmut 的小白鼠冷冻胚胎育仔也告成功。这些业绩鼓舞了其他研究者,从而这几年的研究有了显著的进展。第二年 Wilmut 报告了牛冷冻胚胎的成功事例,从而得到了同家畜精子冷冻保存的成功相媲美的赞誉。这就启发了在超低温条件下受精卵长期保存的可能性,而在小白鼠胚胎上已设想了《胚胎银     

安哥拉山羊胚胎冷冻试验

对安哥拉山羊用总量350IUFSH按递减法处理,配种结束后第6天经子宫手术回收桑椹胚和囊胚供冷冻试验.选用1.4mol/L甘油、1.2mol/L和1.5mol/L乙二醇做防冻保护剂,快速冷冻,-36℃投入液氮保存.采用直接水浴或在空气中停留6～10s使胚胎温度回升,再水浴解冻.胚胎解冻后,用0.5mol/L蔗糖PBSS脱除保护剂,移入2%PBSS中,手术移植于发情后6d的适移受体.结果表明,1.5mol/L乙二醇具有良好的冷冻保护作用.在18～20℃空气中使胚胎温度稍回升,再水浴解冻,可降低胚胎解冻过程中热应激导致的透明带破损,移植于适移受体的妊娠率达45.5%.     

鲁西黄牛胚胎冷冻解冻技术程序

<正> 1988～1991年,我们共冷冻保存鲁西黄牛胚胎278枚,先后解冻96枚,对解冻后的90枚胚胎进行了观察,将其中的36枚解冻胚胎(预备试验13枚,正式试验23枚)分别移植36头受体黄牛,有16头受体妊娠(预备试验3头,正式试验13头)。通过胚胎的冷冻、解冻、移植试验,总结出“鲁西黄牛胚胎冷冻解冻技术程序”,现介绍如下:     

猪精液冷冻技术的研究进展

文章综述了猪精液冷冻技术的国内外研究概况,简要阐述了精液冷冻保存机理,并从冷冻保存稀释液、冷冻保护剂、冷冻、解冻和保存等方面阐述了影响猪精液冷冻的因素,指出了目前在猪精液冷冻理论和实践中存在的问题,针对这些问题提出了解决方法,并对猪精液冷冻技术的研究前景做了展望。     

猪精液冷冻保存研究进展

总结了国内外猪冷冻精液的研究成果,对冷冻保存机理进行了简要阐述,并从稀释液和冷冻保护剂、冷冻前处理、冷冻剂型、冷冻速率、解冻等方面阐述了影响猪精液冷冻的因素。     

猪卵母细胞冷冻技术研究进展

综述了猪卵母细胞的冷冻保存方法和解冻方法,同时对保存效果、影响保存的因素、保护剂的选择等进行探讨。最后,展望了猪卵母细胞冷冻技术的应用前景。     

波尔山羊胚胎冷冻和移植试验

用含1．5M乙二醇,0．1M蔗糖、20％NCS(V／V)的PBS液,或含1．5M乙二醇,20％NCS的PBS为冷冻保护液,将42枚A级胚胎(致密桑葚胚16枚,早期囊胚26枚)一并移入冷冻保护液,并进行快速冷冻,在降温至-36℃时将胚胎投入液氮保存。解冻时,胚胎细管先在室温(20～22℃)空气中停留15s后进入水浴快速解冻,解冻后一步除去保护剂,移入含20％NCS的PBS液中保存,手术移植入受体子宫角内。结果表明,解冻后形态质量完好的A级冻胚达88,1％(37／42),移植受体妊娠率达42,9％,说明本试验采用的胚胎冷冻-解冻程序,能有效地进行波尔山羊致密桑葚胚和囊胚的冷冻保存。     

猪精液冷冻保存技术研究进展

综述了猪冷冻精液的发展简史,对冷冻保存机理进行了简要阐述,并从冷冻保存稀释前处理、稀释液性能、冷冻保护剂、冷冻剂型、冷冻速率、精子浓度和解冻等方面阐述了影响猪冷冻精液的因素,指出了目前在猪精液冷冻中存在的问题,并提出了相应的解决办法.     

小鼠孵化囊胚细管法和OPS法玻璃化冷冻保存技术的研究

利用小鼠孵化囊胚为模型 ,为猪孵化囊胚的冷冻保存摸索适宜的方法和条件 :在 2 5和 37℃条件下 ,用不同含量的玻璃化溶液 (EFS和EDFS) ,对小鼠孵化囊胚实施细管法和OPS法冷冻保存。在 2 5℃条件下 ,细管一步法冷冻保存后的囊胚恢复率仅为 32 5 %～ 74 4 % ,与对照组 (10 0 % )差异极显著 (P <0 0 1) ;而细管二步法冷冻组用方法C解冻后 ,孵化囊胚恢复率达 87 0 % ,为细管法最佳组 ,但仍与对照组有显著差异 (P <0 0 5 )。在 37℃条件下 ,改用OPS法冷冻后 ,以方法A脱出抗冻保护剂 ,孵化囊胚恢复率最高值为 87 2 % (P <0 0 5 )。当采用EDFS30和EDFS4 0对孵化囊胚冷冻保存后 ,以方法C脱出抗冻保护剂 ,恢复率分别高达 97 8%和 93 3% (P >0 0 5 )。利用细管法和OPS法 2种最佳冷冻 -解冻组获得的 133和 15 4枚胚胎 ,分别移植给 12和 10只假妊娠 3～4d的受体母鼠。使 2种冷冻方法均有 6只妊娠 ,各产仔 2 2和 36只 ,产仔率分别为 35 5 %和 39 1% ,与对照组(39 8% )差异均不显著 (P >0 0 5 )。证明 2种方法对胚胎冷冻后均起到了保护作用。     

超低温保存对藏獒犬精子质量及超微结构的研究(英文)

[目的]该研究旨在观察超低温保存对藏獒犬精子质量及超微结构的影响。[方法]通过精子运动度、膜完整率及顶体完整率评价4种冷冻保护剂、冷冻时距液氮面3种不同高度及添加物(SDS和Vc)对精子超低温冷冻效果的影响;在此基础上,在扫描电镜和透射电镜下观察超低温冷冻对精子超微结构的影响。[结果]试验1表明,EG作为冷冻保护剂获得了最好的冷冻效果,解冻后精子运动度、膜完整率及顶体完整率分别为36.3%、38.0%和42.0%。但EG和甘油作为冷冻保护剂并无显著差异存在(P>0.05)。试验2表明,距离液氮面5cm冷冻时冷冻效果最好。但除顶体完整率外,冷冻高度2和5cm间不存在显著差异(P>0.05)。试验3表明,稀释液中单独或共同添加十二烷基磺酸钠(SDS)和维生素C(Vc)均能改善精子冷冻-解冻效果。单独添加SDS或Vc时,除单独添加Vc组表现精子冷冻-解冻后运动度更低外(P<0.05),其它指标并无显著差异存在(P>0.05)。共同添加SDS和Vc时,精子冷冻效果最好,精子解冻后运动度、膜完整率和顶体完整率分别为44.1%、48.0%和48.2%。超微结构显示超低温保存引起藏獒犬精子不同程度的损伤,顶体损伤更严重,如顶体肿胀、囊泡化,甚至顶体消失。[结论]冷冻保护剂EG、距液氮面5cm高度及共同添加SDS和Vc可提高精子超低温保存效果,但超低温对精子超微结构仍具有一定损伤作用。