抗隐孢子虫卵黄抗体制备及间接ELISA方法建立

用纯化的隐孢子虫卵囊,经反复冻融、冰浴超声波处理制备免疫抗原,免疫产蛋鸡,收集免疫后的鸡蛋,采用水稀释二步硫酸铵法纯化IgY抗体,用棋盘滴定法建立的间接ELISA方法测得IgY抗体的效价为1∶12 800,经ELISA检测,该抗体特异性强、重复性好,可用于隐孢子虫抗体检测及流行病学调查。     

检测鸭坦布苏病毒卵黄抗体间接ELISA方法的建立

本研究以纯化的鸭坦布苏病毒WR株为包被抗原,建立检测鸭坦布苏病毒卵黄抗体的间接ELISA方法。经优化后确定检测样品的结果P/N([样品孔OD450nm-空白孔OD450nm)/(阴性孔OD450nm-空白孔OD450nm)]≥2.1判为阳性,<1.5者为阴性;1.5≤P/N<2.1者判为可疑,重检后仍可疑者定为阴性。以建立的间接ELISA方法对H9亚型禽流感病毒、H5亚型禽流感病毒、减蛋综合征病毒、鸭瘟病毒和大肠杆菌卵黄抗体进行了检测,结果均为阴性,表明该方法具有良好的特异性。经重复性试验表明,该方法重复性好。本方法的建立对开产种鸭和蛋鸭坦布苏病毒疫苗免疫效果的评价具有十分重要的意义。     

鸡抗传染性法氏囊病卵黄抗体的ELISA及琼脂扩散检测

鸡传染性法氏囊病(IBD)是目前危害养鸡业的主要疾病之一。卵黄抗体(IgY)是母鸡血清中的IgG转移至卵黄中并积累形成，且与血清中抗体水平相当，因此通过检测卵黄抗体可监测鸡群的抗体水平，为鸡传染性疾病(如：IBD、新城疫、禽流感等)免疫程序的建立提供参考。研究使用间接ELISA(酶联免疫吸附试验)快速检测卵黄抗体的方法，同时对卵黄抗体的生产制备具有指导意义。     

抗α-INF卵黄抗体的制备与鉴定

用人抑制素 ( 1 -2 6 )Tyr.Gly与KLH连接作免疫原 ,免疫本地良种母鸡 ,旨在获得大量抗抑制素卵黄抗体 (eIgY)。实验中 ,收集鸡蛋 ,观察了血清及卵黄中特异性抗体的应答 ,结果经免疫的鸡有免疫应答 ,所产卵的卵黄中可检出大量的有高度活性的抗体。综合运用pH值 ,非球蛋白沉淀法和球蛋白沉淀法 ,制得纯度较高的抗抑制素eIgY。采用阻断ELISA法证实所获得的eIgY具有高度的特异性。用eIgY被动免疫未成年昆明鼠 ,子宫重量明显增加。由此得出结论可以用鸡做生物反应器大量生产抗抑制素抗体 ,用于被动免疫家畜来提高家畜繁殖率     

外援特异性卵黄抗体在防治仔猪大肠杆菌病中的应用

近年来由于对食品安全高度关注,对动物性食品中各种违禁药物的监测越来越严格,对于开发与使用安全、无残留、对环境无污染的新型饲料添加剂就显得尤为重要。本文就此着重介绍一种使用安全,无药物毒副作用,抗菌作用优良,对防治仔猪大肠杆菌效果显著的新型"绿色"饲料用添加剂-卵黄抗体。在实际生产中,卵黄抗体来源广泛-可从利用特定抗原多次免疫产蛋母鸡,使机体产生相应的特异性抗体,并转移、贮存在卵黄中,经提取纯化而获得;提高仔猪免疫力;降低仔猪腹泻率;降低初生仔猪死亡率均有较好的效果。随着人们对卵黄抗体认识和研究的不断深入,生产成本的降低以及标准化生产措施的施行,卵黄抗体必将有广阔的应用前景。     

鸡新城疫卵黄抗体IgY的分离提纯研究

本文对母鸡经鸡新城疫疫苗免疫接种后产生并富集在卵黄中的抗体IgY的提取纯化工艺条件进行了研究与优化，确定了去脂、提取抗体最佳工艺为：卵黄液用0．05mol／L,pH5.0的乙酸一乙酸钠缓冲液1：9倍稀释，搅拌15min，4℃静置10小时，抗体回收率为90％，去脂率为99％；该提取液用40％饱和度的硫酸铵盐析，得到的盐析液抗体回收率为82％，纯度达到69％。盐析液经截留分子量为100KD的有机陶瓷膜超滤后，截留液抗体回收率达到92％。纯度为85％。     

鸡安卡拉病卵黄抗体的制备与应用研究

近几年,安卡拉病在我国多个省区暴发流行,给我国养鸡业造成了大量经济损失,严重制约了养鸡业的健康发展。为了防控鸡安卡拉病,根据我国鸡安卡拉的流行情况,在徐州地区筛选了一株鸡安卡拉病病毒,制备了油乳剂灭活苗并制备卵黄抗体。对该卵黄抗体的安全性、抗体消长、预防效果、治疗效果进行了实验室检测。试验结果表明卵黄抗体安全性高,在鸡体内的有效期为10d左右,对安卡拉病毒感染的预防保护率可达100%,治愈率可达100%。     

采用卵黄检测鸡新城疫抗体的初步探讨

近年来养鸡事业发展很快,随之而来鸡的疫病防制就愈加重要。但养鸡专业户和养鸡场对鸡群中新城疫的控制还有一定困难。只有了解鸡群整个产蛋期的抗体消长情况,才能适时免疫接种,避免新城疫的发生。目前,测定鸡群新城疫抗体需要逐只采血,分离血清,不仅方法麻烦,而且因抓鸡的应激反应,影响母鸡的产蛋,更主要的是易造成人为的疫情扩散,对大型养鸡场更是如此.采用产蛋母鸡的卵黄     

抗牛多杀性巴氏杆菌高免卵黄抗体IgY的制备及间接血凝检测方法的建立

本研究通过自制牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌灭活菌苗免疫产蛋鸡,采用卡拉胶结合硫酸铵沉淀法提取卵黄抗体IgY,并采用间接血凝方法检测抗体效价。结果表明,抗原致敏红细胞的最佳浓度是800μg/mL,免疫后第7周抗体效价达到高峰,效价为1：1024,高效价持续5周开始下降,测定提取的IgY浓度为8.258mg/mL,无菌检测及动物安全性实验表明制备的卵黄抗体安全可靠。本研究制备了抗牛多杀性巴氏杆菌卵黄抗体,为防治由荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌所致的犊牛肺炎提供了新的手段。     

抗兔瘟精制卵黄抗体的研制

选用免疫原性好的兔瘟抗原加工成浓缩兔瘟灭活组织疫苗,按特定的免疫程序接种健康商品鸡群,通过血凝抑制试验检测免疫鸡群血清和卵黄的兔瘟抗体效价,适时收集高免卵黄,选用特定的抗体分离提纯工艺,研制对兔瘟有预防和治疗双重作用的精制卵黄抗体。经实验室生物学检验,本品使用无刺激,作用迅速,对兔瘟早期治愈率为80%,对兔瘟紧急预防有效率为100%。     

五倍子预防草鱼细菌性烂鳃病效果的研究

五倍子能预防鱼类烂鳃病,但作用剂量不明确。为探明五倍子的推荐使用剂量,该研究从体内、体外两方面考查了不同剂量五倍子对病原菌抑制效果和饲料中添加不同剂量五倍子对草鱼烂鳃病预防效果的影响。将五倍子煎液以40、60、80、100 mg/kg剂量加入Shieh琼脂选择培养基,涂布柱状黄杆菌,培养72 h并计数,计算抑菌率;选择健康的草鱼幼鱼240尾,分为4个组,对照组饲喂基础饲料,3个试验组分别添加1%、2%、4%五倍子进行投喂,用柱状黄杆菌悬液向鱼缸连续泼洒3 d攻毒,饲养56 d后测定血清、肠、肝胰脏溶菌酶活力及血清补体C3、IgM含量。结果表明,80~100 mg/kg的五倍子抑菌效果明显,100 mg/kg能完全抑菌;2%五倍子剂量组肝胰脏溶菌酶活力显著（P<0.05）高于对照组,因此,五倍子在草鱼饲料中推荐添加剂量为2%。     

Correlation analysis of the total IgY level in hen serum,egg yolk and offspring serum

The correlation between IgY levels of the serum and the yolk has been well documented in wild and domestic birds. The levels of total yolk IgY can be an index of the general health status of birds and may contribute to breeding programs when fitness of the offspring is a concern. We measured the levels of total serum IgY and yolk IgY in three different breeds (White Leghorn, Silkie and Dongxiang blue-shell) using indirect ELISA, and found that there was a significantly positive correlation between the levels of total serum IgY and total yolk IgY in all three breeds (White Leghorn: r = 0.404, P < 0.001, n = 100; Silkie: r = 0.561, P < 0.001, n = 70; Dongxiang blue-shell: r = 0.619, P < 0.001, n = 30). We also measured the total serum IgY levels in the 3-day-old offspring hatched from the Silkie hens and results were significantly correlated for serum IgY levels (r = 0.535, P < 0.001, n = 70) and the yolk IgY levels (r = 0.481, P < 0.001, n = 70). The regression analysis showed simple linear regression between IgY levels in hen serum, yolk and offspring serum. Our results suggest that total IgY level could be used as an index for chicken fitness.     

Correlation analysis of the total IgY level in hen serum,egg yolk and offspring serum

The correlation between IgY levels of the serum and the yolk has been well documented in wild and domestic birds. The levels of total yolk IgY can be an index of the general health status of birds and may contribute to breeding programs when fitness of the offspring is a concern. We measured the levels of total serum IgY and yolk IgY in three different breeds （White Leghorn, Silkie and Dongxiang blue-shell） using indirect ELISA, and found that there was a significantly positive correlation between the levels of total serum IgY and total yolk IgY in all three breeds （White Leghorn： r = 0.404, P 〈 0.001, n = 100; Silkie： r = 0.561, P 〈 0.001, n = 70; Dongxiang blue-shell： r = 0.619, P 〈 0.001, n = 30）. We also measured the total serum IgY levels in the 3-day-old offspring hatched from the Silkie hens and results were significantly correlated for serum IgY levels （r = 0.535, P 〈 0.001, n = 70） and the yolk IgY levels （r = 0.481, P 〈 0.001, n = 70）. The regression analysis showed simple linear regression between IgY levels in hen serum, yolk and offspring serum. Our results suggest that total IgY level could be used as an index for chicken fitness.     

鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体的间接ELISA检测方法,应用原核表达的IBDV VP2蛋白作为包被抗原,经方阵试验确定间接ELISA试验的最佳反应条件：包被抗原的浓度为8 μg/mL,标准阴、阳性血清的稀释度为1:400,封闭液选用10 %马血清,酶标抗体最佳稀释倍数为1:15000,最佳抗原稀释液为0.01 M PBS(PH 7.2);抗原最佳包被条件为4 ℃过夜,待检血清和酶标二抗反应条件为37 ℃ 60 min,底物作用时间为15 min。待检血清的OD450nm≥0.288判为阳性,反之判为阴性。特异性试验、敏感性试验和重复性试验结果显示,该方法的特异性好、敏感高、重复性好。用建立的间接ELISA方法与商品化IDEXX-ELISA试剂盒对临床血清样品进行检测,符合率为93.5 %。该方法的建立为检测IBDV抗体提供了一种安全、特异、敏感、方便经济的检测方法,为鸡传染性法氏囊病免疫监测和预防控制提供了科学的技术手段。     

鸡抗鹿链球菌卵黄抗体的研制与初步治疗实验

用链球菌灭活菌苗免疫产蛋母鸡，监测卵黄抗体效价达到试验要求收集鸡蛋，提取卵黄中的卵黄免疫球蛋白（IgY）。临床发病鹿群用药物和IgY配合治疗，观察IgY的作用和疗效。     

抗幽门螺旋杆菌卵黄抗体的制备及其体外抑菌试验

试验以幽门螺旋杆菌(helicobacter pylori，HP)全菌灭活抗原对150日龄伊沙褐壳母鸡进行首免，165日龄二免，180日龄三免，于首免后即开始收集鸡蛋，利用凝集实验测定卵黄中的抗体效价。结果表明：每间隔15天，采取两次加强免疫方法，可有效地引起免疫应答。母鸡在初免45d后，抗体效价可达到1：1024，同批样品在此水平可维持达60d以上(效价大于1：128)，然后抗体效价呈缓慢下降趋势，经130d后，抗体效价下降至1：8。体外抑菌实验表明，高免卵黄具有明显的抑制HP生长的活性。     

蛋鸡血浆甘油三酯与蛋黄性状关系的研究

本实验对蛋鸡血浆甘油三酯 (Triglyceriche ,TG)浓度进行高、低选择之后 ,测定了两个世代的产蛋早期的褐壳鸡的血脂成分 (血浆中胆固醇、磷酯、游离脂肪酸 )及其鸡的蛋黄性状 (蛋黄比例、蛋黄胆固醇含量 ) ;且以父系半同胞法估计了血脂和蛋黄性状的遗传参数。研究了与鸡体脂肪代谢关系密切的血脂成分和蛋黄性状的变化规律及其之间的相互关系 ,来寻找能降低蛋黄胆固醇的新途径。结果表明 :血浆甘油三酯的变异系数较大为 5 3.5 2 % ;血浆甘油三酯、蛋黄比例和相对蛋中胆固醇含量的遗传力较高分别是 0 .2 74、0 .90 2、0 .30 4 ,它们之间的遗传相关分别是 0 .2 71、0 .36 6。即血浆甘油三酯可以作为间接选择蛋中胆固醇含量的指标。     

Observations on the Occurrence of Bacterial Gill Disease and Amoeba Gill Infestation in Rainbow Trout Cultured in a Water Recirculation System

Abstract

Spontaneous outbreaks of bacterial gill disease (BGD) occurred in 17-44-g rainbow trout Oncorhynchus mykiss after they were placed in a water recirculation system. In each of five groups stocked from September 1991 through July 1992, BGD occurred within 6–8 d after stocking. In each instance, BGD was followed by a secondary amoeba infestation. The spontaneous BGD outbreaks did not occur among previously stocked groups that had recovered from earlier BGD disease outbreaks. Examination of gill tissue by Gram stain and indirect fluorescent antibody technique showed increased numbers of filamentous bacteria associated with BGD after the rainbow trout were stocked into the system. Bacterial numbers decreased after a 1-h treatment with chloramine-T at concentrations of 9–15 mg/L but increased within 2 d after treatment. Although the chloramine-T treatments controlled mortality related to BGD, the amoeba infestation persisted. Histological examination of gills showed some focal hyperplasia before the rainbow trout were placed into the recirculation system, but hyperplasia became more extensive and lamellar fusion and mild telangiectasis developed within a week after placement in the system. The density at which the fingerling rainbow trout were stocked and the suspended solids present in tank water may have contributed to the BGD outbreaks. Exposure of juvenile rainbow trout to tank water from the recirculation system before they were placed into the system did not afford them protection against BGD after stocking.