3种鲍基因组DNA多态性的RAPD分析

利用随机扩增多态DNA技术检测了中间鲍Haliotismidae、皱纹盘鲍Haliotisdiscushannai和九孔鲍Haliotisdiversicolorsupertexte3种鲍基因组DNA的多态性,初步进行了分子水平上的分类研究。经24个随机引物扩增,共得到376条多态性片段,片段长度为250～2500bp。根据片段的共享度计算出平均遗传距离指数,并采用UPGMA和NJ两种聚类分析方法进行处理得到系统树。在UP GMA聚类中,中间鲍与九孔鲍先聚在一起,有较近的亲缘关系,其次是皱纹盘鲍,而它们之间的遗传距离相差不大,NJ聚类图上就反映出3种鲍聚为3类,所以两种聚类分析结果基本一致,与它们形态上存在明显差异的结果基本吻合,说明RAPD技术可以作为鲍种质鉴定和分类的一种有效、简便的辅助手段。     

3种鲍基因组DNA多态性的RAPD分析

利用随机扩增多态DNA技术检测了中间鲍Haliotis midae、皱纹盘鲍Haliotis discus hannai和九孔鲍Haliotis diversicolor supertexte3种鲍基因组DNA的多态性，初步进行了分子水平上的分类研究。经24个随机引物扩增，共得到376条多态性片段，片段长度为250—2500bp。根据片段的共享度计算出平均遗传距离指数，并采用UPGMA和NJ两种聚类分析方法进行处理得到系统树。在UPGMA聚类中，中间鲍与九孔鲍先聚在一起，有较近的亲缘关系，其次是皱纹盘鲍，而它们之间的遗传距离相差不大，NJ聚类图上就反映出3种鲍聚为3类，所以两种聚类分析结果基本一致，与它们形态上存在明显差异的结果基本吻合，说明RAPD技术可以作为鲍种质鉴定和分类的一种有效、简便的辅助手段。     

分析基因组DNA多态性的RAPD技术在水产生物技术研究中的应用前景

分子生物学技术不仅使生物科学自身的发展进入了历史新纪元，而且还渗透到医学、农业、工业和环保等诸多领域，带来了一场科学革命。水产养殖业作为我国大农业中的一个重要组成部分，已经建立了庞大的产业结构，年水产养殖总产量已连续几年跃居世界榜首。但是我们还必须清醒地认识到，目前的水产养殖业始终未能摆脱传统的产业模式，生物技术特别是分子生物学技术在水产养殖生产和研究中的应用还十分有限，其中除了水产生物繁殖周期等本身生物学特性、研究基础薄弱和投入经费少等因素限制外，某些技术本身的高尖端性和复杂性也影响了其推广和…     

分析基因组DNA多态性的RAPD技术在水产生物技术研究中的应用前景

分子生物学技术不仅使生物科学自身的发展进入了历史新纪元，而且还渗透到医学、农业、工业和环保等诸多领域，带来了一场科学革命。水产养殖业作为我国大农业中的一个重要组成部分，已经建立了庞大的产业结构，年水产养殖总产量已连续几年跃居世界榜首。但是我们还必须清醒地认识到，目前的水产养殖业始终未能摆脱传统的产业模式，生物技术特别是分子生物学技术在水产养殖生产和研究中的应用还十分有限，其中除了水产生物繁殖周期等本身生物学特性、研究基础薄弱和投入经费少等因素限制外，某些技术本身的高尖端性和复杂性也影响了其推广和…     

3个不同鸭种基因组DNA多态性的RAPD分析

RAPD（random amplified polymorphic DNA）即随机扩增多态性DNA技术是由Williamsc和Welsh发展起来的一项研究遗传物质本身的分子生物学技术,克服了从表型、染色体和蛋白质水平研究物种遗传多样性所固有的缺点,并具有相对简便、易操作、省时省力、无需设计引物和产物遗传多样性丰富等优点,已被广泛地应用于生物研究中。笔选取了3个鸭种,用RAPD技术研究其基因组DNA的多态性,目的在于深入了解其种质、亲缘关系及遗传多样性,为保护鸭种质资源和分析鸭配套品系的遗传多样性提供分子生物学方面的证据。     

葡萄孢菌遗传多态性DNA分子指纹RAPD分析

选用13个随机引物对葡萄孢菌14个种的全基因组DNA进行随机多态性扩增。共扩增出152条分子量在200—2000bp的DNA片段,多态检测率为98．8％。利用UPGMA方法对扩增的DNA片段聚类分析,结果表明：受试菌种相似率为种内(90％)大于种间(80％),具有丰富的遗传多样性,一些形态学上难以区分的相似种利用DNA分子指纹可被区别。此方法可供分类鉴定疑难种提供依据。     

草菇栽培菌株DNA多态性的PCR-RFLP和RAPD分析

12个草菇栽培菌株的核糖体DNA(rDNA)、线粒体DNA(mtDNA)和基因组总DNA的多态性被研究了。应用PCR-RFLP技术,扩增了rDNA5.8s ITS区段及mtDNA小区段,并进行限制性酶切分析,结果表明菌株间的rDNA在5.8s ITS区段的遗传差异小,据此只能将测试的12个菌株分为两类;而对mtDNA小区段的检测未能显示出菌株间的差异,表明测试的菌株在所研究的区段具有很高的遗传相似性。在此基础上,对基因组总DNA的RAPD分析表明,菌株两两间的遗传相似系数在0.554到0.898之间,而平均相似系数为0.707。通过平均链锁聚类方式(UPGMA)聚类,发现在相似系数0.710水平上,供试菌株可分为四大类。这些研究结果为草菇的育种提供了科学依据。     

桑树随机扩增DNA多态性研究

改进桑叶ＤＮＡ分离方法后得到了纯度较高、分子量约２３ｋｂ的ＤＮＡ，用２４个随机引物进行ＰＣＲ扩增后，供试１２个桑品种显示出较丰富的ＤＮＡ随机扩增多态性。     

不同性别类型苦瓜基因组DNA提取及RAPD标记初步研究

采用改良的CTAB法成功地提取了不同性别类型苦瓜品种的基因组DNA,作为PCR扩增反应模板进行RAPD分析。结果表明,从200个10bp随机寡核苷酸引物中筛选到2个引物S30和S66,其可以在全雌性品种X-黑-d-d稳定地扩增出特异性条带,为下一步克隆苦瓜性别决定基因、探索苦瓜性别决定机理提供了试验依据。至于该特异性标记是否与苦瓜雌性性别有关,还有待进一步分析验证。     

Noni基因组DNA提取及RAPD分析

针对Noni含有大量的多糖、多酚等次生代谢物设计其DNA的提取方法,得到的Noni基因组DNA纯度高、完整性好。对5个Noni品种进行RAPD分析,结果表明,国外品种(库克、泰国、马来西亚)和国内品种(西沙、三亚)各聚为一类。     

茶薪菇基因组DNA的RAPD反应体系优化

[目的]旨在筛选出茶薪菇RAPD反应体系的最佳条件。[方法]采用单因素试验,对RAPD反应体系所需的Mg2+浓度、模板DNA浓度、引物浓度、dNTPs浓度、Taq酶浓度以及退火温度进行初步筛选。[结果]茶薪菇RAPD扩增的最佳反应体系为:2.5μl Buffer,2.0mmol/L Mg2+,75 ng DNA,0.5μmol/LPrimer,150μmol/LdNTPs,2.0 UTaq酶。反应程序为:92℃预变性5 min,(92℃1 min,35.5℃1 min,72℃延伸2 min)35个循环,72℃10 min。[结论]为茶薪菇RAPD分析及其亲缘关系、遗传多样性研究提供了参考依据。     

葡萄基因组DNA的提取及RAPD反应体系的优化

[目的]建立适合该地区部分葡萄品种RAPD扩增反应体系.[方法]采用阿克苏地区部分葡萄品种(系)为试材,采用改良的CTAB法提取葡萄基因组DNA,对影响葡萄RAPD反应的Mg2+、Taq酶、dNTPs、引物、模板DNA浓度进行优化.[结果]其最佳反应体系为:模板DNA 100 ng,dNTPs 0.1 mmol/L,Mg2+2.0 mmol/L,引物0.3 μmol/L,Taq酶1.5 U,反应体系总体积为20 μL.[结论]改良的CTAB法具有步骤少、费用低、效率高等特点,比较适用于葡萄基因组 DNA的提取.优化后的体系,扩增产物稳定,条带清晰,重复性好.     

甘蓝Ogura胞质雄性不育基因的RAPD标记

以甘蓝Oguar胞质雄性不育系CMS451及其保持系为材料,优化甘蓝RAPD体系,并用RAPD标记分析了Oguar胞质不育基因。结果表明,适合甘蓝RAPD体系为,25μL中含有2.0 mmol/L MgCl2,0.2mmol/L dNTPs,0.56μmol/L pri mer,0.5 UTaqDNA聚合酶,20 ng DNA,2.5μL 10×buffer(剩余的用ddH2O补充);发现S20-495为不育基因的特异条带,在NCBI上比对此特异条带序列发现它与芜菁自交不亲和系SRK-46、SP11-46和SLG-46的基因全序列同源性达78%。     

椰子基因组DNA的提取及RAPD反应体系的优化

以椰子叶片为实验材料,探索了椰子基因组DNA的提取方法,并对影响RAPD反应的各因素进行了优化,建立了椰子的优化反应体系和程序。试验最终建立的椰子RAPD反应总体积为20μL,各有关成分的最佳浓度分别为Mg2＋2.5 mmol/L,Taq DNA0.75 U,dNTP 0.2 mmol/L,Primer 1μmol/μL,模板DNA2.5 ng/μL。PCR循环程序为：94℃预变性1.5min;94℃变性20 s,36℃退火20 s,72℃延伸45 s,35个循环;最后72℃延伸3 min。     

枇杷主要种类的RAPD分析

应用14个10聚体随机引物对解放钟、森尾早生、旱钟6号、贵州野生、台湾枇杷、栋叶枇杷、乌脐、白梨、洛阳青、俨糖枇杷、湖北六二等11个枇杷品种或种类的基因组DNA进行RAPD扩增，共得到130条扩增带，其中33条为非多态性条带，多态性程度为74．62％。进行聚类分析，以D1＝0．599进行划分时，可将枇杷的11个遗传资源分成栽培和非栽培两个类群。以D2＝0．649进行划分时，8个普通种可分为两个类群，即白肉类群和红肉类群，并在DNA分子水平上说明枇杷果肉色泽可作为分类的一个指标。运用RAPD技术为枇杷遗传资源的鉴定和分类提供了新的途径。     

野生与养殖羔花红点鲑群体DNA多态性RAPD分析

采用RAPD技术对野生与养殖花羔红点鲑群体各17个个体进行了DNA多态性检测.用13个随机引物在野生群体和养殖群体中分别扩增出119和86条DNA片段,其中多态性片段数分别为64和51条,多态性片段的比例分别为52.46%和41.80%,平均杂合度分别为0.2177和0.1802,遗传相似率分别为0.7844和0.7985,群体间遗传相似率为0.6468,由此得出野生群体的遗传多样性高于养殖群体.通过Nei指数统计的花羔红点鲑群体内遗传多样度平均为0.1989,群体间遗传多样度为0.1359,群体间遗传分化为34.53%.Shannon遗传多样性指数表明,两群体中的遗传变异有64.05%来自群体内,只有35.95%来自群体间,此分化值与Nei指数估测得到的遗传分化相近.     

葡萄基因组DNA的提取及RAPD条件优化

采用改良CTAB法提取葡萄属22种植物的基因组DNA,对其完整性进行了测定,通过单因素五水平试验,筛选模板、Mg2+、Taq酶、dNTPs和随机引物的浓度及其用量,建立了葡萄RAPD技术最优体系,即25 μL体积中模板DNA为40 ng·μL-1,MgCl２ 2.0 mmol·L-1,dNTP 0.8 mmol·L-1,Taq DNA 聚合酶1 U·μL-1,引物 0.8 μmol·L-1,建立了葡萄基因组DNA的RAPD 反应扩增程序,即94℃预变性4 min, 94℃循环变性 45 s,37℃退火 55 s,72℃ 延伸 80 s,40个循环,最后72℃ 延伸10 min。     

辣椒基因组DNA提取与RAPD分析

采用液氮－ＳＤＳ法、ＳＤＳ法和氯化苄法对辣椒的ＤＮＡ进行了提取。结果表明：液氮－ＳＤＳ法提取的ＤＮＡ具有典型的天然ＤＮＡ分子的标准紫外吸收光谱,其Ａ２６０／Ａ２８０在１．６０～１．７０之间,Ａ２６０／Ａ２３０在１．５～１．８之间,１００ｍｇ叶子ＤＮＡ产量为６０～９０μｇ。用该法提取的辣椒ＤＮＡ适于进行ＲＡＰＤ分析。ＳＤＳ法、氯化苄法不适于辣椒ＤＮＡ的提取。     

红花基因组DNA的提取及RAPD体系的优化

用多种方法提取红花老叶及嫩叶DNA,进行比较,最后确定老叶DNA的提取用高盐低pH法,嫩叶用Michael等的方法.设计两次正交实验来确定红花RAPD体系中各成分的浓度,最终确定了一个既稳定又能扩增出最多条带的适合红花的RAPD最优体系,即25 μL反应液中,dNTP 200 μM, Mg2+1.5 mM,引物0.8 μM,Taq酶1U,模板30～60 ng.