哈密瓜种子带毒率检测及带毒种子的热处理效果研究

 南瓜花叶病毒(SqMV)和西瓜花叶病毒二号(WMV-2)是严重侵染新疆哈密瓜的2种主要病毒。作者采用免疫电镜法(SSEM)和酶联免疫吸附分析法(ELISA)测定了哈密瓜病瓜种子的带毒率,并对带毒种子进行了热处理,结果简报如下。     

新疆哈密瓜病毒类型及分布

 1981-1984年对新疆主要瓜产区的病毒发生情况进行了调查,可归纳为6个病毒类型。除1类型尚需进一步鉴定外,其他5类型分别属于黄瓜花叶病毒(CMV)、西瓜花叶病毒二号(WMV-2)、南瓜花叶病毒(SqMV)、烟草坏死病毒(TNV)和甜瓜叶脉坏死病毒(MVNV)。在大流行的1983年WMV-2和CMV,WMV-2和SqMV,CMV和SqMV以及WMV-2、SqMV和CMV的混合侵染率比1982年为高。各类型病毒的侵染率在不同地区也有较大的变化。     

新疆、甘肃甜瓜病毒病的鉴定及防治

对甘肃、新疆两省(区)186个厚皮甜瓜病毒病标样的鉴定结果表明,病毒种类有黄瓜花叶病毒(CMV)、西瓜花叶病毒2号(WMV-2)和南瓜花叶病毒(SqMV)。其中WMV-2是主要病毒种类。不同地区或同一地区不同年份各个病毒的消长有较大的变化。桃蚜(Myzus persicae)、豆蚜(Aphis craccivora)及麦二叉蚜(Schizaphis graminum)可传播WMV-2,其中桃蚜的传毒效率最高。棉蚜(Aphis gossypii)可传CMV。种广可传带SqMV,其带毒率为7.6%。对1300个甜瓜品种及材料的抗病性试验结果没有发现任何免疫和抗病类型,但白兰瓜类型较哈密瓜类型抗病,薄皮甜瓜较厚皮甜瓜抗病,其中中国梨瓜龙田一号发病很轻。覆盖银灰膜、喷高脂膜及种植高粱隔离诱杀带等综合防治措施可使发病率减少82.0%,增产15.7—40.5%。     

棉花抗枯萎病品种抗性稳定性初步研究

病原学研究证明新疆哈密瓜花叶病主要由西瓜花叶病毒2号(WMV-2)、黄瓜花叶病毒(CMV)、南瓜花叶病毒(SqMV)引起,大田发病以 WMV-2为主。研究证明 WMV-2的介体主要为麦二叉蚜、苜蓿蚜、桃蚜、伞形蚜,其次是麦长管蚜、叶虫甲。CMV 的介体有桃蚜、苜蓿蚜、伞形蚜。SqMV 的介体为叶(虫甲)。哈密瓜在田间感染病毒的时间与上述蚜虫开始迁飞的时间有相关性。有翅蚜的发生、消长与田间发病成正相关。6月份降雨量与病害发生,有翅蚜消长成反相关。据五家渠、昌吉等地区调查,WMV-2的自然寄主有蚕豆、豌豆、西葫芦,它们的发病时间比甜瓜早。     

新疆哈密瓜上两种病毒的血清学特性

1982～1983年,作者等对从新疆哈密瓜上分离出的两种病毒西瓜花叶病毒2号(简称 WMV-2)和黄瓜花叶病毒(简称 CMV)进行了提纯,制备了抗血清。用部份提纯的 CMV 注射兔子,获得了1/512效价的抗血清。用制备的抗血清与 CMV-3(黄瓜株系)和 CMV-4(豇豆株系)进行了琼质双扩散,发现新疆哈密瓜上的 CMV 与 CMV-3和 CMV-4有一定差异,但与 CMV-3有一定相关。WMV-2提纯比较困难,因为在提纯过程中病毒极易聚集。用 PEG 沉淀法病毒重新悬浮困难,丢失较多,最后采用差速离心。在超速离心时加20%蔗糖垫。在两次差速离心后再经一次20～50%蔗糖梯度离心。得到了较好的提纯效果,制备了1/64效价的抗血清。用作者等制备的 WMV-2抗血清与美国、丹麦和日本的 WMV 抗血清进行了比较试验,证实新疆的 WMV-2与美国和丹麦的 WMV-2有相同的抗原性。用作者等制备的 WMV-2抗血清与哈密瓜病株的蔓、叶、花、果及种子进行血清反应,发现病株的蔓、叶、花、果各部均有大量病毒存在。     

新疆哈密瓜病毒病毒源的分离和鉴定

新疆哈密瓜是驰名中外的特产,是我国重要的外销产品之一。五十年代末,六十年代初,由于病毒病的感染,使哈密瓜产量降低,含糖量下降,严重地影响了哈密瓜的产量和质量。 1980～1981年,在新疆石河子,吐鲁番和昌吉等地进行调查时,在哈密瓜和其它瓜类上采集病毒病标样19个,通过鉴别寄主,血清学和电子显微镜的鉴定,把19个标样分为两大类。一类寄主范围广,除侵染葫芦科外,还侵染豆科、茄科、藜科、菊科等多种植物,与黄瓜花叶病毒(CMV)血清发生明显沉淀反应,电镜下观察为球形粒体,确定为CMV的一个株系,另一类寄主范围狭窄,除侵染葫芦科外,还侵染豆科、藜科。电镜下形态为长线条状。与WM-V-2血清发生反应,应为西瓜花叶病毒2号(WMV-2)。WMV-2是哈密瓜病毒中发生最严重的毒源。占田间病株90％以上。     

哈密瓜花叶病毒病的防治研究简报

哈密瓜在新疆各地广泛栽培,有160多个栽培品系,种植面积多达25万亩。但是近十年来病毒病害的流行日趋严重,对哈密瓜的产量和品质影响十分严重,病株滞长,病果畸形,含糖量降低,香味减弱。我们在分离鉴定侵染哈密瓜病毒种类的基础上,针对目前流行的主要三种病毒,即西瓜花叶病毒(WMV-2),黄瓜花叶病毒(CMV)和南瓜花叶病毒(SqMV)的传播途径和理化性质,采取有效措施,干扰破坏病毒流行的必要环节来进行防治。现将1980～1983年各项防治试验及其结果简报如下。     

侵染西瓜的小西葫芦花叶病毒的生物学特性鉴定

西瓜病毒病是制约西瓜产量及品质的顽疾.据报道,该病害造成的经济损失达到30%～50%.1981～1999年皖、苏、鲁、豫西瓜的病毒病曾几次大发生.危害西瓜的病毒病有西瓜花叶病毒1号(WMV-1)、西瓜花叶病毒2号(WMV-2)、黄瓜花叶病毒(CMV)、烟草花叶病毒(TMV)、烟草环斑病毒(TRSV)、南瓜花叶病毒(SqMV)等32种[1].小西葫芦花叶病毒(ZYMV)是侵染葫芦科的主要病毒之一,1973年首次在意大利北部发现此病毒,至今已成为一个全球性的植物病毒[2].笔者对ZYMV合肥分离物的生物学特性进行了研究.     

胶体金免疫电镜技术检测和鉴定病汁液中不同形态的植物病毒

 本文报道胶体金免疫电镜技术的建立:铜网捕获病毒后,用其稀释约200倍的同源抗血清修饰处理3~5分钟,羊抗兔IgG-金复合物标记3~5分钟,经磷钨酸负染,电镜下可见病毒粒子周围金颗粒特异性吸附,而背景上非特异性吸附很少。用此技术成功地快速检测和鉴定了病汁液中线状病毒(大麦黄花叶病毒,大麦温和花叶病毒,小麦梭条斑花叶病毒,芜菁花叶病连和马铃薯Y病毒)、棒状病毒(烟草花叶病毒、长叶车前草花叶病毒和土传小麦花叶病毒)以及球状病毒(水稻矮缩病毒、黄瓜花叶病毒和大麦黄矮病毒)。用0.5M PBSpH7.0制备病汁液,可大幅度提高同源抗血清对黄瓜花叶病毒的捕获能力。     

用A蛋白免疫电镜快速检测几种蔬菜作物的两种杆状病毒

 应用A蛋白免疫电镜技术对几种蔬菜作物的长叶车前草花叶病毒(RMV)、烟草花叶病毒(TMV)的检测比常规的电镜负染技术至少要灵敏近10,000倍,比普通的免疫电镜技术要灵敏10~100倍,抗血清浓度稀释至400,000倍,病毒粗提液稀释到1,000,000倍或病毒提纯液浓度为2.5×10^-7 mg/ml时均能观察到病毒粒子。同时由于抗体分子能特异性地结合到病毒粒子表面,能够很容易地区分不同的病毒种类。
应用此项技术作者检测了杭州地区几种常见的蔬菜病毒病,对大白菜(Brassica campestris L.),蕃茄(Lycopersicum esculentum Mill),榨菜(Brassica juncea var.tsatsai Mao),雪里(Brassicajuncea var.multiceps Tsen et Lee)等作物发病期的叶或果的浸提液用A蛋白免疫电镜进行快速检测,结果在大白菜,番茄等病株上检测到较多的病毒粒子,且大多能被RMV抗血清修饰,同时在番茄病株检测到的少量病毒粒子亦能被TMV抗血清修饰,而榨菜及雪里等病株上检测到的病毒粒子很少能被RMV及TMV抗血清所修饰,另外,病毒粒子的含量以番茄病果中为最高,要比其它几种蔬菜作物叶子中高约10~30倍。     

用聚丙烯酰胺凝胶电泳病毒衣壳蛋白快速诊断瓜类作物上的三种病毒Ⅰ

 本试验以发生在我国葫芦科作物上的三种主要病毒WMV-2,CMV和SqMV为研究对象,尝试用病毒衣壳蛋白亚基的SDS——聚丙烯酰胺凝胶电泳诊断瓜类作物病毒。试验结果说明,对病株叶片或其他组织进行初步的澄清和病毒浓缩处理,可以检测出病毒衣壳蛋白亚基谱带。根据病毒衣壳蛋白亚基的分子量差异,可以区别这三种病毒。这种方法有其他常规诊断方法(包括生物学测定,电镜观察和血清学方法等)所不具有的优点。病毒浓度的检测限度在1-50μg/ml水平。     

新疆哈密瓜上两种病毒的血清学特性

铜绿金龟(虫甲)是北京地区的一种重要害虫,一年发生一代,以3龄幼虫在土壤51～75厘米深层越冬。成虫每年6～9月出现,成虫有较强的趋光性,一日内以19:30′～21:00′活动最盛。成虫食性杂,每一雌虫一生可产卵30～40粒。产卵期为4～5天。在9种含水量(0.3、2、4、6、8、10、15、20和25%)土壤与5种温度(10、17、25、30、37℃)组合下,试验结果卵在温度25℃与8～15%含水量土壤内孵化率最高。卵的发育起点温度是9.14±1.15℃,发育有效积温为178.05日度。幼虫季节性垂直分布与10厘米土温变化有关,秋季当10厘米土温低于10℃,幼虫向土壤深层迁移,春季当10厘米土温高于6℃幼虫向土壤表层迁移。每年4～5月及8～9月幼虫10厘米作物外进行为害,这时亦导防治的有利时机。     

The partial characterization of melon vein-banding mosaic virus, a newly recognized virus infecting cucurbits in Taiwan

A potyvirus (designated as no. 656) causing mosaic or vein-banding symptoms on melons was isolated and characterized. The virus was mechanically transmitted to 14 herbaceous plant species, and induced mosaic symptoms in most cucurbitaceous plants. Aphis gossypii transmitted the virus non-persistently, and flexuous filamentous virus particles c. 755 nm in length were consistently observed in extracts of the infected pumpkin leaf tissues. Pinwheel and tubular inclusions were observed in the cytoplasm of infected zucchini leaf tissues. The virus was purified from infected pumpkin leaves by isopycnic centrifugation (Cs₂SO₄). The molecular weights of purified capsid and cylindrical inclusion proteins as estimated by SDS-PAGE were 32·5 and 73 KD_a, respectively. In SDS-immunodiffusion tests, antiserum to virus particles from isolate 656 was serologically unrelated to ZYMV, WMV-2, PRV-W and a type W variant of PRV, but antiserum to its cylindrical inclusion protein did produce spur precipitin bands between homologous and WMV-2 antigen wells. However, neither WMV-2 virus particle nor cylindrical inclusion antisera reacted with this virus. Furthermore, this virus was not serologically related to BCMV, BYMV, CYVV, SMV, WMV-M or ZYFV. Based on test results and symptomatology, this virus appears to be a new potyvirus, for which the name melon vein-banding mosaic virus (MVbMV) is proposed.     

免疫电镜法测定3种Potyvirus组病毒的研究

 对大豆花叶病毒(SMA),花生斑驳病毒(PMV)和豇豆蚜传花叶病毒(CAMV)3种Potyvirus病毒进行了免疫电镜(ISEM)的测定。ISEM法同样证实了这3种病毒在血清学关系上的不同。3种病毒抗血清对同源抗原都具有"捕获"大量病毒粒体的能力,"捕获"数量是异源关系或正常血清的20~50倍.ISEM方法的灵敏度和专化性受到包被抗血清的稀释度和在抗原上处理时间等因素的影响."捕获"病毒粒体最适的抗血清稀释度是10-3或10-4;抗原处理时间,在一定范围内随处理时间的延长而增加"捕获"病毒粒体的数量,处理时间超过10-20小时即不再增加"捕获"粒体数量.同源抗体抗-抗原反应对病毒粒体上有"装饰"作用,而异源关系没有"装饰"作用。"装饰"的免疫电镜法是鉴别同源病毒的重要标准。     

应用A蛋白免疫电镜技术快速检测病株中大麦黄花叶病毒

 用A蛋白免疫电镜技术,检测大麦病汁液中的大麦黄花叶病毒(BaYMV),其捕获抗血清的适宜工作浓度范围很宽,320-20,480倍均能达到满意的结果;抗原孵育条件以室温(约25℃)下30分钟或冰箱(约4℃)中3小时,捕获到的病毒粒子数量较多。应用这项技术,在稀释3,125倍的病汁液中还能检测到BaYMV粒子,比普通免疫电镜方法的灵敏度至少高5倍。BaYMV在病株中的分布以症状明显的花叶中含量最高,黄化叶中较少,茎和根中找不到病毒。利用该技术可以快速而灵敏地进行大麦品种抗病性的鉴定与筛选。本文最后还讨论了BaYMV的稳定性。     

Detection of squash mosaic virus in seeds of melon (Cucumis melo) by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)

Squash mosaic virus (SqMV, comovirus) is seed-transmitted in severalCucurbitaceae. Therefore, the use of virus-free seed is important to prevent establishment of this virus in the Netherlands and to avoid spread to other countries.This study was undertaken to develop an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of SqMV in melon seeds. An antiserum was produced to a serotype 1 isolate from melon. Two ELISA variants were investigated viz. an ELISA variant with simultaneous incubation of sample and enzyme conjugate (ELISA 1) and an ELISA variant with successive incubation of sample and enzyme conjugate (ELISA 2). The sensitivity of ELISA was tested by mixing fluor of ground infected and non-infected seeds in different proportions. SqMV was detected by both ELISA variants at dilutions of 1 160 (1 part of infected flour mixed with 159 parts of non-infected flour) or higher after a substrate incubation period of 4 h. However, ELISA 1 gave relatively higher absorbance values than ELISA 2 for nearly all dilutions. Since ELISA 1 is also faster than ELISA 2, ELISA 1 is advised for routine testing. In these test, using subsamples of 100 melon seeds SqMV is detected reliably. ELISA 1 is now used in the Netherlands for routine-indexing of melon seed lots for SqMV.Samenvatting Het pompoenemozaïekvirus gaat over met het zaad van verscheideneCucurbitaceae. Het gebruik van virusvrij zaad is belangrijk om te voorkomen dat het virus zijn intrede doet in Nederland en zich naar andere landen verspreidt.Een antiserum werd geproduceerd tegen een serotype 1 isolaat van meloen. Met behulp van dit antiserum werd een ELISA ontwikkeld om pompoenemozaïekvirus in zaden van meloen aan te tonen. Twee varianten van ELISA werden vergeleken, namelijk een variant waarbij monster en enzymconjugaat gelijktijdig geïncubeerd werden (ELISA 1) en een variant waarbij monster en enzymconjugaat na elkaar geïncubeerd werden (ELISA 2). De gevoeligheid van de ELISA varianten werd uitgetoetst door meel van zieke zaden in verschillende verhoudingen te mengen met meel van gezonde zaden. Het pompoenemozaïekvirus werd met beide ELISA varianten aangetoond in verdunningen van 1 160 (1 deel meel van zieke zaden gemengd met 159 delen meel van gezonde zaden) of hoger na 4 uur incubatie met substraat. ELISA 1 gaf doorgaans hogere extinctiewaarden dan ELISA 2 voor bijna alle verdunningen. Omdat ELISA 1 ook nog sneller is dan ELISA 2, wordt ELISA 1 aanbevolen voor routinematig gebruik. Wanneer voor routinematig gebruik 100 meloenezaden per submonster getoetst worden, kan het pompoenemozaïek virus betrouwbaar worden aangetoond. In Nederland worden momenteel per zaadpartij 20 submonsters van 100 zaden getoetst.