重瓣榆叶梅花中多糖提取工艺及动态含量研究

采用超声波辅助提取法,优化重瓣榆叶梅花朵中多糖提取的工艺条件,并在最佳工艺条件下研究了重瓣榆叶梅花朵生长过程中多糖含量的动态变化。在单因素试验的基础上,利用响应面分析法对多糖的主要提取工艺参数进行优化和方差分析。得到最佳工艺条件为:提取温度70℃,提取时间40min,超声波功率120 W,液料比为60mL/g,在上述工艺条件下,测得处于花开初期的重瓣榆叶梅花中多糖的含量最高,其提取率可达到2.809%。说明花开初期时的重瓣榆叶梅花利用价值相对较高。     

重瓣榆叶梅花中蛋白质提取工艺及动态含量研究

重瓣榆叶梅花中蛋白质提取研究表明,最佳提取工艺为采用pH7.0的磷酸氢二钠提取液、液料比为30∶1(mL∶g)、30℃、500 W、超声提取3次(每次120min)。在该提取工艺条件下,测得开花14d花中蛋白质含量最高,为13.237mg·g-1;开花21d花中蛋白质含量最低,仅为5.150mg·g-1。     

中国水仙MADS-box基因克隆及其序列分析

采用同源克隆方法首次克隆了一条中国水仙MADS—box基因,命名为NtMADS。该基因长599bp．编码199AA,具有植物MADS—box基因特有的典型结构MADS—box和K—box。     

白来航鸡MHC-I重链基因克隆与序列分析

参照GenBank发表的鸡MHC-Ⅰ重链(BF2)基因序列,设计并合成1对引物,无菌采取纯系来航SPF鸡抗凝静脉血,直接提取总RNA,采用RT-PCR技术,PCR扩增BF2基因,并进行克隆和序列测定。测序结果表明,获得了来航鸡BF2基因,其大小为1 035 bp,包含一个完整阅读框,共编码345个氨基酸。与GenBank上鸡BF2基因序列进行比较,其核苷酸同源性在93.0%~97.6%之间,氨基酸同源性在83.2%~97.1%之间。来航鸡与人和其他种动物的MHC-Ⅰ重链基因核苷酸同源性在12.9%~83.6%之间。     

高效毛细管电泳法研究重瓣榆叶梅花中蛋白质的动态变化

为验证毛细管电泳方法,研究测定重瓣榆叶梅花朵生长过程中的DNA酶、RNA酶和细胞色素C含量及动态变化的有效性,以磷酸氢二钠溶液为提取液,超声提取重瓣榆叶梅花朵中的蛋白质作为待测液,考察缓冲溶液种类、浓度、pH、分离电压、分离温度及进样时间等因素对HPCE分离检测蛋白质的影响。确定了HPCE最佳测定条件为:运行缓冲液为pH为2.5、浓度为30mmol/L的磷酸氢二钠溶液,0.5MPa压力进样5s,分离电压为8kV,电泳温度为25℃,检测波长为254nm。在最佳条件下,样品可在20min内完全分离,线性关系良好。该方法准确、快速、简便,可同时检测样品中的DNA酶、RNA酶和细胞色素C。     

重瓣萱草AGAMOUS基因的克隆与表达分析

AGAMOUS(AG)基因是花发育ABC模型中的C类基因,通过对各类观赏植物的重瓣化诱导研究发现,C类基因突变会诱导产生重瓣花。萱草作为园林景观的应用植物,其花型补充改造一直是育种研究的重要目标之一。以单瓣萱草品种秋红、重瓣萱草AH6为试验材料,克隆C类基因AG的全长cDNA,分别将其命名为qhHfAG、ahHfAG,并进行生物信息学分析,用Real-time PCR分析其表达模式。结果表明,HfAG全长为624 bp,编码207个氨基酸,具有典型的植物MADS-box基因结构,但是与其他物种相比缺少AG基序Ⅱ。与单瓣品种相比,重瓣品种中部分氨基酸位点发生了变化,这也导致重瓣品种该蛋白的疏水性、不稳定指数和二级结构发生了改变,推测这可能是导致重瓣表型的原因。Real-time PCR分析结果表明,在不同瓣化程度的萱草品种中,HfAG基因在花器官中的相对表达量有差异。研究首次从萱草中克隆出AG基因并进行分析,并对单瓣、重瓣萱草基因序列进行比较,进一步探究C类基因在重瓣表型萱草培育中发挥的功能,为通过基因工程手段开展萱草重瓣育种奠定了基础。     

滇重楼辣椒轻斑驳病毒分离物的鉴定及全基因组序列分析

滇重楼(Paris polyphylla var. yunnanensis)是多年生草本植物,其药用部位为地下根茎,是一种重要的中药材。为明确侵染滇重楼的病毒病原,对采自云南省曲靖市的滇重楼进行透射电镜观察、DASELISA和RT-PCR技术检测。在透射电镜下观察到杆状病毒粒子,大小为(200～300)nm×(20～36)nm。对采集到的7份病样进行DAS-ELISA检测,结果表明,其中5份病样呈阳性。通过RT-PCR技术扩增、克隆获得1个全长为6 357 bp的曲靖分离物PMMoV-QJ的全基因组序列。将PMMoV-QJ的全基因组序列与国内外已经报道的10个PMMoV分离物进行同源性分析比对,其同源性为99.42%～99.81%。基于全基因序列的系统发育分析表明,PMMoV-QJ与韩国分离物亲缘关系密切。本研究明确了该分离物的亲缘关系,从分子水平鉴定该分离物,为后续滇重楼病毒病的预防提供理论依据。     

固始鸡α干扰素基因克隆与序列分析

参照GenBank上登陆的鸡α干扰素基因序列设计一对引物,应用PCR技术直接从固始鸡肝组织基因组DNA中扩增鸡α干扰素基因.将特异性片段克隆入pGEM-T Easy载体中,转化JM109感受态细胞,经质粒PCR鉴定及酶切鉴定筛选阳性菌株送往大连宝生物公司测序.测序结果表明,固始鸡α干扰素基因为582 bp.用DNAStar软件对克隆的固始鸡α干扰素基因与GenBank发表的其它品种鸡α干扰素基因序列进行同源性分析,核苷酸同源性在97.9%以上,氨基酸同源性在96.9%以上.     

单瓣与重瓣紫花木槿雌雄配子体发育的比较研究

该文对单瓣和重瓣紫花木槿雌雄蕊的发育进行了系统的观察.结果表明:单瓣紫花木槿的小孢子母细胞经过减数分裂形成四面体状的四分体,成熟花粉是二细胞型,圆球状,表面有刺,雌蕊发育滞后于雄蕊发育一周左右,即雄蕊发育至单核小孢子时期时,珠心内大孢子母细胞开始进行减数分裂,历经蓼型胚囊的发育模式,发育为成熟胚囊.重瓣紫花木槿的雌雄蕊均瓣化并败育.单瓣紫花木槿开花后第4天开始进行双受精,胚的发育历经球形原胚、心形胚、鱼雷胚、子叶胚及成熟胚时期,核型胚乳,种子成熟后无胚乳.      

蜀葵ArbHLH148基因克隆与表达分析

为解析蜀葵ArbHLH148基因在雄蕊瓣化中的功能,以红色重瓣蜀葵花朵为试材,结合转录组数据,采用逆转录PCR方法克隆了ArbHLH148基因,并对其序列特征和表达特性进行了分析。结果表明,ArbHLH148基因cDNA序列全长为672 bp,该基因与树棉bHLH148转录因子基因具有80%的一致性（E值为1e-119）。在系统进化上,ArbHLH148与拟南芥AtbHLH147、AtbHLH148、AtbHLH149、AtbHLH150关系很近,而且其具有典型的碱性螺旋-环-螺旋保守结构域（Basic helix?loop?helix,bHLH）。氨基酸序列预测显示,该蛋白质是位于细胞核内的亲水性蛋白,也是没有跨膜区的非分泌蛋白。组织特异性表达分析显示,ArbHLH148及其功能相关基因ArIAA1、ArARF8、ArTIR1在萼片、花瓣、雄蕊和瓣化雄蕊中均有表达,但其在雄蕊中的表达量相对较多,在花瓣、瓣化雄蕊中的表达量依次减少,这与生长素信号相关基因ArIAA1、ArARF8、ArTIR1在雄蕊、花瓣、瓣化雄蕊中的表达模式及生长素含量变化相似。表明ArbHLH148基因和生长素信号...     

油果实中查尔酮合成酶基因PsCHS的克隆表达分析及其启动子的分离

从成熟果实均一化全长cDNA文库中分离了编码CHS基因的全长cDNA序列,命名为PsCHS,根据其序列设计引物,采用Genome Walking方法从基因组DNA中分离获得PsCHS基因上游的调控序列,命名为PsCHSp,PsCHS基因全长1 442bp,其中ORF 1 176bp,编码392个氨基酸;采用APA-Walking技术,获得该基因的5ˊ端调控区,经在线软件预测,启动子序列含有典型的结构特征元件TATA-box和CAAT-box,还包含光响应元件、厌氧诱导元件、胚乳表达相关元件、MYB结合位点以及激素响应元件;RT-PCR结果显示,PsCHS基因在果实发育的前期表达量较高,花后40d表达量最高,随后开始下降,果实成熟期表达量较低。分离获得的PsCHS基因属于查尔酮合成酶基因家族成员之一,查尔酮合成酶(Chalcone synthase,CHS,EC 2.3.1.74)是类黄酮合成途径中的一个重要酶,该基因可能对类黄酮的合成起到调控作用。     

鸭瘟病毒强弱毒株TK基因的克隆及序列比较分析

根据GenBank中已发表的鸭瘟病毒TK基因序列,设计一对引物,对1株鸭瘟病毒强毒和1株鸭瘟病毒疫苗毒进行PCR扩增。将扩增的目的片段分别克隆到pMD18-T载体,经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定,获得阳性重组质粒,然后对阳性重组质粒进行序列测定及分析。结果表明,本实验所扩增的鸭瘟病毒TK基因及侧翼UL24基因大小为1 995 bp,鸭瘟强、弱毒株TK基因及侧翼UL24基因序列完全相同,该病毒TK基因与鸭瘟病毒其它毒株AY911509与AY963569,四川株DQ640611,AV1221株EF173464,sd-01株EF417996同源性分别为99.5%,99.9%,100%,99.9%,100%,而该病毒UL24基因与鸭瘟病毒其它毒株AY911511,DQ227739,EF417996同源性为99.9%,99.8%,99.9%,表明鸭瘟病毒强弱毒株TK基因及侧翼UL24基因高度保守。为构建鸭瘟病毒TK基因缺失的转移载体奠定了基础。     

谢瓦氏曲霉间型变种veA基因全长克隆及序列分析

为进一步研究谢瓦氏曲霉间型变种中veA基因的结构及其与有性发育的关系,以谢瓦氏曲霉间型变种为有性发育研究材料对veA基因进行全长克隆,根据已克隆到的veA保守区片段设计基因特异性引物(GSP),使用RACE技术从总RNA克隆到了长度为2 515 bp的veA基因的cDNA。序列分析表明,该cDNA编码有562个氨基酸残基,其预测蛋白质序列与丝状真菌的其他种相应预测蛋白质比对结果发现,其相似性较好,保守区序列集中于蛋白质的N端。进一步研究表明,该基因开放阅读框内只含一个内含子,长度为54 bp,位于起始密码子下游149 bp处。说明,已成功地从谢瓦氏曲霉间型变种中克隆到了veA基因。     

榆叶梅花粉生活力及贮藏特性的研究

以榆叶梅花粉为试材,利用离体培养法、碘-碘化钾染色法、醋酸洋红染色法和TTC(氯化三苯基四氮唑)染色法对花粉生活力进行测定,并研究了不同贮藏条件对花粉萌发的影响。结果表明:培养基中添加不同浓度的蔗糖和硼酸对花粉的萌发有促进作用,榆叶梅花粉萌发的最适条件为在培养基中添加15%蔗糖+0.004%硼酸,萌发率达41.52%。花粉生活力随着贮藏时间的延长而下降,不同的贮藏条件对其有显著的影响,适当的低温可有效延长花粉贮藏时间。其中-80℃萌发率最高,为最佳贮藏方法。     

紫叶李叶片花色素及花色苷HPLC定量分析

利用高效液相色谱（HPLC）法首次定量分析了紫叶李鲜叶片中芍药色素（Peonidin）、花青素3,5-二葡萄糖苷（Cyanidin 3,5-di-O-glucoside）、天竺葵色素3,5-二葡萄糖苷（Pelargonidin 3,5-di-O-glucoside）、芍药色素3-葡萄糖苷（Peonidin 3-O-glucoside）、飞燕草素（Delphinidin）、花青素（Cyanidin）和锦葵色素（Malvidin）的存在。花青素3-葡萄糖苷（Cyanidin 3-O-glucoside）、芍药色素和色素12是紫叶李鲜叶片中三种重要色素,其相对含量均超过检测到色素总含量的10%,分别占检测到色素总含量的27.54%、24.08%和14.95%,鲜叶片中实际含量分别为3.396、2.969、2.108 mg/g。除芍药色素3-葡萄糖苷极微量外,花青素3,5-二葡萄糖苷、锦葵色素、飞燕草素、天竺葵色素3,5-二葡萄糖苷和花青素在鲜叶片中的含量分别为0.005、0.0075、0.0185、0.3590、0.0360 mg/g。其它28种色素的结构和含量需要进一步分析。     

中国水仙叶绿体ATP合成酶基因NtATPF的克隆与序列分析

以多效唑诱导中国水仙的抑制差减杂交文库(SSH)获得的cDNA片段为基础,采用RACE及RT-PCR技术,分离克隆到1个ATP合成酶CF0 B亚基基因NtA TPF.此基因包含有1个555 bp完整阅读框架(ORF),编码184个氨基酸,具有1个跨膜区域(27～49),分子量为20.809 5 kD,理论等电点为5.69.聚类分析表明:其氨基酸序列与葱的叶绿体ATP合成酶CF0 B亚基蛋白氨基酸序列亲缘关系最近.     

新疆奶牛乳腺炎致病性金黄色葡萄球菌FnbpA基因的克隆与序列分析

采集新疆奶牛隐性乳腺炎乳样,经分离、鉴定,从中得到金黄色葡萄球菌,参考GenBank中发表的FnbpA基因序列,用Oligo 6.0软件设计一对特异性引物。提取分离株中的基因组DNA,经PCR扩增得到1 654 bp的目的片段FnbpA,将其插入PMD18-T克隆载体中构建PMD18-FnbpA重组质粒,将其转入到大肠杆菌DH5α中,并进行测序分析。结果表明,克隆的FnbpA基因片段全长1 654 bp,共编码314个氨基酸。分析表明,FnbpA蛋白基因潜在的蛋白质抗原决定簇有17个,抗原性很强,与16株FnbpA基因标准序列的同源性为77.1%~100%,本研究所克隆的FnbpA基因与AM990992株亲缘性最近。     

黑龙江地区流行犬瘟热病毒H基因克隆及序列分析

对临床上流行的犬瘟热病毒CDV(ZH-10株)的H基因进行克隆和序列分析。结果显示:H基因全长约为1824bp;CDV ZH-10株与国外的Convac和Onderstepoort疫苗株亲缘关系较远,核苷酸同源性分别为91.3%、91.4%;ZH-10株与国内近期大部分分离株属于野毒株谱系,在基因型上归属Asia-1型。研究揭示了CDV基因型的地域性差异是近年来我国CD流行的一个主要原因,为将来研制出更加有效的CD疫苗奠定了基础。     

油桃染色体核型分析

油桃染色体核型分析郭振怀，张淑云，王秀伶（河北农业大学园艺系，保定０７１００１）（中国枣研究中心，保定０７１００１）关键词油桃，染色体，核型ＫａｒｙｏｔｙｐｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆＰｒｕｎｕｓＰｅｒｓｉｃａｖａｒ．ｎｅｃｔａｒｉｎａＭａｘｉｍ￥ＧｕｏＺ...