EPO及EPOR在成年牦牛菱脑中的表达与分布

[目的]了解成年牦牛(Bos grunniens)菱脑中促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)及其受体(erythro-poietin receptor,EPOR)的表达分布特征,对其与低氧适应性之间的关系进行探讨.[方法]利用qRT-PCR及免疫组织化学技术,对EPO及EPOR在牦牛菱脑中的表达与分布...     

藏猪生长激素基因(pGH)多态性研究

猪生长激素基因(pGH)是猪生长发育性状重要的候选基因之一。采用PCR-RFLP技术检测藏猪pGH基因+159~+734 bp片段的DraI、ApaI和MspI酶切多态性。结果显示,藏猪群体中DraI酶切全部切开,无多态;ApaI酶切具有4个等位基因,出现5种基因型,其中CC基因型(299A/432C)频率最高,为0.7857;藏猪群体MspI酶切出现3种基因型,杂合性CT基因型频率最高,为0.5089,等位基因C和T频率分别为0.5580和0.4420。经比较,藏猪pGH基因DraI酶切位点与其他猪种一样无多态性,而ApaI酶切出现了特异的432突变位点,MspI酶切等位基因分布相对均衡,表现出与其他猪种的差异。     

中国藏猪ESR基因PvuⅡ位点多态性分析

采用PCR-RFLPs方法,对中国藏猪ESR基因多态性进行了研究,并与太湖猪、金华猪、成华猪、内江猪、长白猪、大白猪等中外猪种的ESR基因频率、基因型频率作了对比分析。结果表明藏猪有3种ESR基因型,ESR等位基因之间的频率较其它猪种均衡,从而证明西藏猪选择压力较小,ESR基因的分布处于原始的自然状态。     

鸡卵清蛋白基因调控序列指导人促红细胞生成素转基因鸡的制备

本研究将鸡卵清蛋白5端调控区调控人促红细胞生成素的pOV-hEPO特异表达载体用脂质体包埋，和供体细胞融合后，显微注射入450枚受体胚盘，采用代用蛋壳法培养制备转基因鸡，PCR和斑点杂交检测外源基因已整合入早期鸡胚胎生殖系统，为制备表达人促红细胞生成素的鸡输卵管生物反应器奠定了基础。     

左旋卡尼汀联用促红细胞生成素治疗血液透析患者肾性贫血的疗效观察

目的：观察左旋卡尼汀联合重组人促红细胞生成素（rhEPO）治疗肾性贫血的临床疗效。方法：54例维持血液透析的肾性贫血患者随机分为三组：A组18例．透析后静脉注射左旋卡尼汀1g;B组18例．采用rhEPO 3000IU皮下注射．2～3次／N;C组18例,透析后静脉应用左旋卡尼汀1g．同时应用rhEPO 3000IU皮下注射2～3次／N。观察三组患者治疗前及治疗4、8、12周的血浆白蛋白、血红蛋白、红细胞体积的情况。结果：随着治疗的进行,A组血浆白蛋白显著升高,与B组比较．差异有显著性（P〈0．05）;C组血浆白蛋白、血红蛋白上升最明显,与A、B组比较差异有显著性（P〈0．05）;C组rhEPO用量明显低于B组。结论：左旋卡尼汀可改善维持血液透析患者的状态．提高rhEPO的疗效．减少rhEPO的用量。     

藏猪和大约克猪FABP3基因多态性及差异表达分析

【目的】脂肪酸结合蛋白3(FABP3)参与长链脂肪酸的摄取及利用,在脂肪沉积中发挥重要作用。探究FABP3基因在藏猪和大约克猪间的基因多态性和表达差异可为藏猪品质改良提供分子机制参考。【方法】选取180日龄藏猪和大约克猪为研究对象,对两猪种FABP3基因5’侧翼区和CDS区进行单核苷酸多态性（SNPs）筛选,使用实时荧光定量检测FABP3基因在肝脏、背最长肌和背脂3个组织中的表达量。【结果】在FABP3基因5’侧翼区筛选到T-114C和C-635A等2个SNPs位点,且SNPs位点基因型频率在藏猪与大约克猪群体间均呈极显著差异（P <0.01）;经转录因子预测发现这2个SNPs位点与前脂肪细胞的更新、分化以及脂肪沉积相关,推测这两个多态性位点是参与调控FABP3基因表达的重要功能位点。FABP3基因在藏猪肝脏、背最长肌中的表达量极显著高于大约克猪（P<0.01）,在背脂中的表达量显著高于大约克猪（P <0.05）。【结论】推测FABP3基因可能为调控藏猪脂肪代谢的重要候选基因,在藏猪脂肪沉积中呈正向调控作用。     

缺氧诱导因子和促红细胞生成素及其受体基因在绵羊各组织中表达量

【目的】研究缺氧诱导因子(HIF)及其下游靶基因促红细胞生成素(EPO)及其受体(EPOR)在绵羊正常生理状况下各组织的表达,为靶向调控或缓解绵羊缺氧应激的研究提供组织学依据。【方法】采用实时荧光定量PCR方法,检测4只新疆细毛羊14种组织中HIF、EPO和EPOR基因的相对表达量。【结果】HIF-1α和HIF-2α基因均在绵羊肺组织的相对表达量最高,且极显著高于其它组织(P<0.01);在肺脏HIF-2α基因的表达量约为HIF-1α表达量的5.2倍。EPO基因在绵羊肾脏的相对表达量最高且显著高于垂体、结肠、脾脏、盲肠、肝脏、肾上腺、瘤胃、下丘脑以及心脏(P<0.05)。EPOR基因在肺脏的表达量最高,肺脏和睾丸的相对表达量显著高于脾脏、下丘脑、肾脏、心脏等组织(P<0.05)。【结论】HIF-1α、HIF-2α和EPO及其受体基因在绵羊的肺部或肾脏的高表达,可能是绵羊缺氧应激感受及其调控的重要器官。     

左卡尼汀联合促红细胞生成素对维持性血液透析肾性贫血患者的治疗分析

目的观察分析采用左卡尼汀和促红细胞生成素(r-HEPO)联合治疗维持性血液透析肾性贫血患者的临床效果及不良反应情况。方法选取接受维持性血液透析治疗的肾性贫血120例,按照患者对药物的选择分为对照组49例,治疗组71例,所有患者均进行血液透析治疗,对照组的患者在透析治疗后皮下注射r-HEPO,治疗组的患者在透析治疗后皮下注射r-HEPO的基础上静脉注射左卡尼汀1.0g,所有患者治疗12周,观察两组治疗前后各指标差异。结果 2组患者治疗前后的HCT、Hb和血清白蛋白均有所增高(P<0.05),且治疗组的Hb、HCT的增高量高于对照组(P<0.05);治疗组用药剂量较对照组明显减少(P<0.05),治疗组引起血压升高例数明显低于对照组(P<0.05)。结论对于维持性血液透析肾性贫血患者最有效的治疗方法就是采用左卡尼汀和r-HEPO联合治疗,其疗效显著,而且还能减少用药剂量和血压升高现象的发生率。     

消化道肿瘤贫血患者促红细胞生成素与贫血治疗方案的关系

目的分析消化道肿瘤患者内源性促红细胞生成素水平及贫血状态,探讨使用重组人促红细胞生成素治疗消化道肿瘤相关性贫血的方案.方法内源性促红细胞生成素采用Elisa检测,血红蛋白采用常规检测.消化道肿瘤非贫血患者为对照组,消化道肿瘤贫血患者组为观察组.结果统计发现男女之间的贫血率没有差异,消化道肿瘤相关性贫血患者占38.95%,其中以胃癌居首,占42.2%,食管鳞癌最低,占35.6%.消化道肿瘤患者在化疗前贫血比非贫血患者EPO高而Hb低,两者存在逆相关关系,化疗后贫血患者Hb继续降低,EPO上升;而在化疗后非贫血患者中出现的26例贫血患者,其中16例出现EPO急剧上升,10例EPO几乎不变,EPO存在极显著差异,具有统计学意义,而Hb没有明显的差异.结论消化道肿瘤相关性贫血发生率较高,在临床治疗中要密切关注.     

藏猪IGF I基因外显子4和IGF II基因内含子7 PCR-RFLP分析

藏猪为我国高原特色的原始小型猪种,其生长发育速度缓慢.本研究采用PCR-RFLP技术检测藏猪IGF I基因外显子4和IGF II基因内含子7酶切多态性.结果发现藏猪IGF I基因exon4-PCR-Hha I-RFLP出现AA、AB和BB 3种基因型,AA基因型频率较高,为66.07%;等位基因A和B频率分别为80.36%和19.34%.藏猪IGF II基因intron7-G162C位点全部为GG基因型,intron7-C179G位点全部为CC基因型.藏猪这2个基因的基因型分布与国内外其他猪种表现差异,这可能与其生长速度慢有关.     

藏猪肌肉生长抑制素基因外显子1的PCR-SSCP分析

采用PCR-SSCP技术分析了藏猪肌肉生长抑制素(MSTN)基因的单核苷酸多态性.根据GeneBank上猪MSTN基因全序列设计的两对引物,扩增了MSTN基因完整的外显子1,经SSCP分析,只有P1扩增产物存在多态性,表现为3种基因型(AA、AC和CC),A和C两种等位基因的频率分别为46.88%和53.12%.测序分析发现,CC型与AA型相比在MSTN基因编码区的第71bp处有一个A→C的单碱基突变,该突变导致编码的第24位氨基酸由天冬酰胺改变为苏氨酸.     

藏猪肌肉纤维生长发育规律研究

[目的]探讨藏猪肌肉纤维性状的生长发育规律。[方法]对藏猪公猪23头、母猪20头进行肌纤维性状测定。[结果]试验结果表明：2～6月龄藏公猪、藏母猪均出现肌纤维面积逐渐增大,其中藏公猪肌纤维增长幅度小于藏母猪。通过相关分析可知藏猪肌纤维面积与单位面积根数呈极显著负相关（P〈0．01）。[结论]该试验可为藏猪种质特性的深入研究提供参考。     

松辽黑猪血液蛋白质多态性的研究

本研究采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)法检测了松辽黑猪28个样本的13个血清蛋白(酶)位点。结果表明:除Alb、Pa2、Cp为单态外,Pa1、Po1、Po2、Tf、Ptf、Akp、Hpx、Am1、Am2、Es均存在多态性,分别受2～4个等位基因控制。卡方检验结果表明,Pa1、Pa2、Ptf、Akp不处于Hardy-Weinberg平衡状态,其余的Po1、Po2、Tf、Am1、Am2、Hpx、Es都处于Hardy-Weinberg平衡状态。松辽黑猪群体内有效等位基因数、遗传杂合度、以及遗传均质度分别为2.077 9、0.508 3和0.128 8。     

藏猪兴奋性氨基酸转运载体EAAC1基因的克隆与原核表达

兴奋性氨基酸转运载体EAAC1是肠道内谷氨酸的主要载体.本研究根据人的基因编码区设计一对特异性引物,以藏猪空肠总RNA为模板,通过RT-PCR获得一长约1600 bp的cDNA片段,T/A克隆后测序,并进行序列分析;将该基因片段连接到原核表达载体pET-32a(+)中构建融合表达质粒,转化到E.coli BL21(DE3)中进行表达.测序结果显示,获得的cDNA全长为1575 bp,编码524个氨基酸;EAAC1分子量为57 kD,等电点为5.34,GenBank登录号为GQ375513;该蛋白质具有3个N-糖基化位点、8个蛋白激酶C磷酸化位点和1个cAMP/cGMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点,含有7个跨膜结构域和一个信号肽序列;SDS-PAGE电泳检测结果表明,表达蛋白质与预期蛋白质大小一致.上述结果为进一步研究EAAC1的功能及其调控奠定了基础.     

3种猪孕酮受体基因(pgr)多态性分析

采用混合基因组DNA池PCR扩增和测序技术,对小梅山猪、枫泾猪、大白猪pgr基因的外显子区域进行扫描,共发现1个单核甘酸多态性位点(SNP)。外显子1序列中1 319 bp处发生C→T的碱基突变,即C1319T,未引起氨基酸的变化,属于同义突变;针对突变位点,建立错配PCR–限制性长度多态性(RFLP)方法进行检测,发现3种猪的pgr基因可以分为AA、BB、AB 3个基因型,小梅山和枫泾猪有AA、AB 2种基因型,大白猪中有BB、AB 2种基因型。     

Erythropoietin Receptor Gene （EPOR） Polymorphisms are Associated with Sow Litter Sizes

The erythropoietin receptor (EPOR) has shown to play an important role in fetal survival by promoting the maturation of red blood cells in many studies of uterine capacity and litter size in swine. In this study, we screened the porcine EPOR gene for mutations and identified five single nucleotide polymorphisms (SNPs): g.705G＞T in intron 1, g.2 373C＞T in intron 4, and g.2 882C＞T, g.3 035A＞G, and g.3 132A＞T in intron 6. We then genotyped 247 Beijing Black (BB) sows and compared the polymorphism data with the litter sizes of 1 375 parities among the sows. At first parity, there was no association of g.2 882C＞T and g.3 132A＞T with litter sizes. However, the CT sows in g.2 882C＞T had 2.13 higher total number born (TNB) (P＜0.01) and 1.81 higher number bom alive (NBA) (P＜0.01) than the CC sows and the heterozygous sows in g.3 132A＞Thad the highest litter size when compared to the two homozygotes for the later parities (P＜0.05). In the g.3 035A＞G SNP,for the later parities, the TNB of the sows with the GG genotype was 3.81 higher (P＜0.01) and the NBA was 2.75 higher(P＜0.01) than that with the AA genotype but no difference at first parity. The G allele of the EPOR g.705G＞T SNP wasassociated with a greater litter size at both the first parity (P＜0.05) and later parities (P＜0.01). Furthermore, we determined the allele frequencies for this SNP among five Chinese indigenous pig breeds (Erhualian, Laiwu Black, Meishan, Min, and Rongchang) and three western commercial pig breeds (Duroc, Landrace, and Large White). The G allele of the EPOR g.705G＞T SNP was significantly more common in the more prolific Chinese breeds. These results indicated that the EPOR could be an important candidate gene for litter size and g.705G＞T can serve as a useful genetic marker for improving litter size in both first and later parities in swine.     

西藏林芝地区藏猪心电图分析

[目的]通过对西藏林芝地区藏猪的心电图测定和分析,探索其心电图特征,为兽医临床诊断提供资料。[方法]利用数字单道心电图仪,分别描记和分析了西藏林芝地区46头藏猪的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ标准导联,a VR、a VL、a VF单极加压肢体导联和V1、V2、V3、V4、V5和V6单极胸导联的心电图。[结果]西藏林芝地区藏猪心率为(124.49±44.06)次/min,心电图均为窦性心律,但窦性心律不齐发生率为39.13%;QRS心电轴范围为-80°至186°,其中左偏、右偏发生率分别为19.6%;各波形和波向在不同导联一致性较好,各波的间期时间分别为:P波(37.17±7.85)ms、P-R间期(83.62±13.15)ms、QRS间期(50.86±8.13)ms、Q-T间期(226.23±19.12)ms、Q-Tc间期(225.47±31.23)ms,但各波和间期时间在成年和幼年间及公猪和母猪间均无显著差异(P0.05)。[结论]心率较快、心律不齐和心电轴偏离发生率较高是西藏藏猪正常心电图的特征。     

圩猪H-FABP基因多态性分析及其与IMF含量的相关性

 【目的】探究圩猪心脏脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因的多态性,及其与IMF含量的相关性【方法】采用PCR-RFLP(HinfⅠ、HaeⅢ及MspⅠ3种限制性内切酶)分子标记技术,分析了123头圩猪H-FABP基因5'-上游区和第二内含子区的遗传变异情况。【结果】()在5'-上游区：HinfⅠ位点上存在多态性,等位基因H的基因频率为0.6545,表现为中度多态(PIC=0.3500);第二内含子区：HinfⅠ*位点上存在多态性,等位基因B的基因频率为0.7195,表现为中度多态(PIC= 0.3222);Hae Ⅲ位点上也存在多态性,等位基因D的基因频率为0.6301,表现为中度多态(PIC=0.3575);而MspⅠ位点上尚未检测到多态,基因型均为AA型。(2)被测猪群的基因频率和基因型频率都处于Hardy-Weinberg平衡状态(P＞0.05);(3)所检测的基因型对肌内脂肪(IMF)含量影响的趋势为：HH＞Hh＞hh,dd＞Dd＞DD,BB＞Bb＞bb;遗传效应值分别为：4.6918、4.2665、3.7712、4.6124、4.3167、3.8173、4.3042、4.2358、4.1970;(4)对H-FABP基因3个PCR-RFLP多态片段进行克隆测序分析发现,HinfⅠ-RFLP是由于1 324 bp处存在T→C的突变引起,HaeⅢ-RFLP是由于1 811 bp处存在C→G的突变引起,HinfⅠ*-RFLP是由于1 970 bp处存在T→C的突变引起。测序结果与GenBank公布的X98558和Y16180序列有97.9%及98.3%的同源性。【结论】圩猪H-FABP基因5'-上游区和第二内含子区的多态性对其IMF含量有一定影响,但是否可作为研究该基因与圩猪IMF含量相关的重要遗传标记还需做进一步研究。     

藏獒血液蛋白遗传多样性的研究

采用不连续垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对河曲藏獒、青海藏獒、青海藏狮犬和青海土种犬共4个群体103只犬的9个血液蛋白基因座(Tf、Po、Es-1、Es-2、Sα_2:、Hb、Alb、Pr、Amy)的多态性进行了检测,分析了两个藏獒群体的群体内和群体间的遗传变异,并以Nei氏标准遗传距离(D)为基础用UPGMA法探讨了不同犬群之间的遗传关系.结果表明,在4个被测犬群中,Tf、Po、Es-1、Es-2和Sα_2 5个基因座上存在多态性,其中Tf、Es-1和Po分别由3个等住基因所控制,Es-2和Sα_2,分别由2个等位基因所控制,而Hb、Alb、Pr和Amy基因座均呈现单态;河曲藏獒群体内遗传变异较青海藏獒丰富,而两个藏獒群体间的遗传分化程度很低(G_(ST)=0.0187);以Nei氏标准遗传距离(D)为基础的UPGMA法聚类结果表明.青海藏獒与青海藏狮犬和青海土种犬的遗传关系近于河曲藏獒.     

3个外来种猪群ESR基因位点多态性及其与繁殖性能相关性分析

试验采用PCR-RFLPs技术分析了杜洛克、长白猪和大白猪的ESR基因位点的多态性,采用SAS统计分析软件分析了多态性与母猪繁殖性能的相关性。结果表明:ESR位点的总产仔数、产活仔数和断奶头数呈现AA相似文献