检测鸡传染性支气管炎病毒抗体的三种血清学方法的比较

应用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、琼脂扩散沉淀试验（ＡＧＰ）和鸡气管环培养中和试验（ＳＮｉｎＴＯＣｓ）三种常规血清学方法对实验鸡血样的鸡传染性支气管炎病毒抗体进行了检测。从实验鸡血样的检测结果表明，ＥＬＩＳＡ和气管环中和试验的灵敏度较好，而ＡＧＰ的灵敏度相对较差，但三者均有较好的特异性。对田间送检血样的检测结果表明，ＥＬＩＳＡ与气管环中和试验、ＥＬＩＳＡ与ＡＧＰ的一致性均较好，而气管环中和试验与ＡＧＰ的一致性较差。ＥＬＩＳＡ效价与气管环中和试验效价的相关系数为０．８４     

检测鸡慢性呼吸道病抗体ELISA方法的建立

用败血支原体（ＭＧ）Ａ５９６９株制备ＥＬＩＳＡ抗原,与抗鸡ＩＧ单抗ＩＢ７酶结合物建立了检测鸡血清抗体水平的间接ＥＬＩＳＡ方法,交叉试验、阻断试验、重复性试验等表明该方法重复性好、特异性强、灵敏度高。确立了将鸡血清６４倍稀释监测ＥＬＩＳＡ效价（ＥＴ）的回收方程ｙ＝１．３８３＋０．２２４ｘ,可用于定量测定,血凝抑制试验（ＨＩ）与ＥＬＩＳＡ比较试验表明,ＥＬＩＳＡ法比ＨＩ试验敏感性高４倍以上。     

用抗传染性氏囊病毒单克隆抗体建立夹心阻断ELISA检测鸡血清抗体及 …

用酶标记抗传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体，建立夹心阻断ＥＬＩＳＡ，检测ＩＢＤＶ鸡血清抗体。用Ｄ７８细胞毒免疫２４日龄的雏鸡，每周采血一次，共４次，用夹心阻断ＥＬＩＳＡ、微量细胞中和试验（ＶＮ）、琼脂扩散试验（ＮＧＰ）检测鸡血清抗体，结果表明：夹心阻断ＥＬＩＳＡ同ＶＮ之间具有较高的相关性（ｒ＝０．８１２６），与ＡＧＰ的相关性较低（ｒ＝０Ｘ．７５７５）。     

快速检测鸡新城疫病毒的聚乙二醇单抗夹心ELISA试验的建立和应用

以抗鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）单抗夹心ＥＬＩＳＡ试验为基础，在６０００，建立了ＰＥＧ－ＥＬＩＳＡ法，使用此法检测临诊样品，与单抗夹心ＥＬＩＳＡ相比，时间缩短７０分钟且提高了ＯＤ４９０值，易于识别。结果表明，ＰＥＧ－ＥＬＩＳＡＩ法具有实际应用价值。ＰＥＧ能加强抗原－抗体反应的速率和强度，这种效应在固相夹心ＥＬＩＳＡ第二步表现尤其明显。ＰＥＧ的这种非特异性效应对于检测其它抗原或抗体的ＥＬＩＳＡ试验可能具有     

应用ELISA和AGP检测鸡白血病病毒的比较

应用ＥＬＩＳＡ和ＡＧＰ检测羽随和蛋清中鸡白血病病毒ＡＬＶ，样品采用同一品系的普通原种鸡群。当用此二种方法同时检测同一种样品中ＡＬＶ的群特异性抗原时发现，ＥＬＩＳＡ的阳性率高于ＡＧＰ，ＥＬＩＳＡ显示出较高的敏感性。当同时用ＡＧＰ检测羽髓样品和用ＥＬＩＳＡ检测蛋清样品来鉴定同一鸡群中潜在的ＡＬＶ感染母鸡时，结果表明ＥＬＩＳＡ的阳性率高于ＡＧＰ，而且有一定比例的ＡＧＰ阳性鸡用ＥＬＩＳＡ检测时为阴性，因此     

生物素─亲和素强化斑点试验检测口蹄疫病毒抗体的研究

常规酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）一般用辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记ＩｇＧ进行检测．ＨＲＰ稳定性好，但敏感性稍差。为了克服这一不足，引入碱性磷酸酶检测系统，进行免疫强化斑点试验检出口蹿疫病毒抗体．用光敏生物素标记纯化的Ａ蛋白（ＳＰＡ）代替第二抗体．通过ＡＰ标记的亲和素（Ａｙｉｄｉｎ－ＡＰ）检测生物素化抗体，最后加底物ＢＣＩＰ和ＮＢＴ显色判定。该法具有良好的特导性和重复性，由于引入生物素系统和ＡＰ，使灵敏度大大提高，能检出微量抗体，比常规ＥＬＩＳＡ更敏感．     

应用间接酶联免疫吸附试验检测鸡传染性法氏囊病病毒

用制备的抗鸡ＩｇＧＭｃＡｂ－ＨＲＰ作为免疫试剂，以ＩＢＤＶ的高免阳性鸡血清作为抗体，用间接ＥＬＩＳＡ法检测经ＩＢＤＶ强毒攻击的各脏器含毒情况，同时与ＡＧＰ法进行比较。结果表明两种方法具有良好的平行关系，间接ＥＬＩＳＡ法比ＡＧＰ法更为敏感；攻毒鸡的法氏囊带毒最多，而在脾、胸腺、肾中均未检出病毒抗原。     

抗鸡IgG重链单克隆抗体的制备与应用

以提纯鸡ＩｇＧ做抗原免疫Ｂａｌｌ／ｃ小鼠，取鼠细胞在ＰＥＧ１０００作用下与小鼠骨髓细胞（Ｓｐ２／ｏＡｇ１４）融合，采用间接免疫荧光（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测上清抗体，阳性孔经有限稀法进行细胞克隆，共获得了７株分泌抗鸡ＩｇＧ单克隆抗体的杂交瘤细胞（２Ｈ８、４Ｄ８、４Ｄ８、１Ｂ７、２Ａ７、２Ｂ３、１Ｇ１２、３Ｄ１２）将这些细胞分别接种间系小鼠制备出腹水抗体，ＥＬＩＳＡ效价可达１０＾     

间接法Dot—ELISA检测鸡减蛋综合症抗体的建立及应用研究

应用ＳｅｐｈａｄｃｘＧ－２００层析法纯化鸡减蛋综合症病毒，利用ＮＣ膜作为载体，成功建立了检测ＥＤＳ－７６血请抗体的斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）。抗原包被浓度为２μｇ／ｍｌ，被检血清浓度为１：２０，酶标兔抗鸡１ｇＧ浓度为１：２００．底物溶液最适ｐＨ值为７．２。对Ａ－Ｆ６个养禽场随机抽检血清１６０份，分别用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ、ＨＩ和ＡＧＰ检测，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检出阳性率为５１．９％，ＨＩ检出阳性率为４６．９％，ＡＧＰ检出阳性率为３１．９％。对１４０日龄鸡人工感染试验，测定抗体消长规律。本方法不需特殊仪器。适用于基层兽医部门和养鸡场对ＥＤＳ－７６的血清学诊断和流行病学调查。     

鸡传染性喉气管炎ELISA诊断方法的研究──SPA—ELISA检测室内外ILTV病鸡效果

鸡传染性喉气管炎ＥＬＩＳＡ诊断方法的研究──ＳＰＡ—ＥＬＩＳＡ检测室内外ＩＬＴＶ病鸡效果黄承锋，吕敏娜，彭万强，孔庆飞，朱治远，幸桂香，杨海金（广东省农科院兽医研究所广州５１０６４０）用ＳＰＡ—ＥＬＩＳＡ诊断方法，在室内检测ＩＬＴＶ人工接种鸡胚尿囊膜...     

间接酶联免疫吸附试验检测禽流感抗体的最佳工作条件

禽流感病毒（ＡＩＶ）感染的鸡胚尿囊液经差速离心后,再经蔗糖密度梯度离心,提纯ＡＩＶ,纯化的ＡＩＶ经ＮＰ４０处理并反复冻融,即为ＡＩＥＬＩＳＡ抗原,用该抗原包被聚苯乙烯微量反应板。将健康鸡ＩｇＧ提纯后免疫兔,制备兔抗鸡ＩｇＧ,用过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡ＩｇＧ。确立了间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测禽流感抗体的最适工作条件,即：抗原包被浓度１．９～３．８μｇ／ｍｌ,每孔１００μｌ,４℃冰箱过夜;用含０．５％牛血清白蛋白（ＢＳＡ）的磷酸盐缓冲液,３７℃封闭６０分钟;待检血清最佳稀释度为１８０～１６４０,作用６０分钟;酶标抗体作１２０００稀释,作用６０分钟。根据对５２份ＳＰＦ鸡血清的检测结果制定了判定标准。     

抗原捕捉ELISA与常规方法滴定IBDV的比较

作者建立了两种抗原捕捉酶联免疫吸附试验方法（多抗和单抗ＡＣ－ＥＬＩＳＡ），用于滴定用不同宿主系统增殖的传染性氏囊毒病，这些宿主系统包括ＢＧＭ－７０传代细胞系。鸡胚成纤维细胞和鸡法氏囊，两种检测方法都有较高的特异性，但是多克隆ＡＣ－ＥＬＩＳＡ比单克ＡＣ－ＥＬＩＳＡ更加敏感（Ｐ〈０．０５），结果还表明，滴定ＩＢＤＶ抗原的常规方法（细胞培养物和鸡胚）比多抗ＡＣ－ＥＬＩＳＡ更敏感。     

用PPA-ELISA检测鸡痘病毒抗体的研究

建立了检测鸡痘病毒抗体的ＰＰＡ－ＥＬＩＳＡ。用该法检测７５份鸡血清样品，鸡痘病毒抗体检出率（２１．３３％）高于琼脂扩散试验（１０．６７％）。经血清抗体吸收和重复性试验，证明ＰＰＡ－ＥＬＩＳＡ法具有特异性强和重复性好特点。此外，对４种封闭液的封板结果表明：１０％犊牛血清ＰＢＳ／Ｔ效果最好，次之为０．２５％白明胶ＰＢＳ／Ｔ、０．５％牛血清白蛋白ＰＢＳ／Ｔ、０．１％牛血清白蛋白ＰＢＳ／Ｔ。     

用PPA—ELISA检测鸡痘病毒抗体的研究

建立了检测鸡痘病毒抗体的ＰＰＡ－ＥＬＩＳＡ，用该法检测７５份鸡血清样品，鸡痘病毒抗体检出率（２１．３３％）高于琼凝扩散试验（１０．６７％），经血清抗体吸收和重复性试验，证明ＰＰＡ－ＥＬＩＳＡ法具有特异性强和重复性好特点，此外，对４种封闭液的封板结果表明，１０％犊牛血清ＰＢＳ／Ｔ效果最好，次之为０．２５％白明胶ＰＢＳ／Ｔ，０．５％牛血清白蛋白ＰＢＳ／Ｔ，０．１％牛血清白蛋白ＰＢＳ／Ｔ。     

禽流感病毒重组核蛋白ELISA诊断技术的研究

用表达禽流感病毒（ＡＩＶ）核蛋白基因的杆状病毒感染Ｓｆ９昆虫细胞。以其表达产物制备抗原,建立了以杆状病毒系统表达的ＡＩＶ核蛋白为抗原的禽流感间接酶联免疫吸附试验诊断技术（ｒＮＰ－ＥＬＩＳＡ）。其抗原最适包被量为０．６μｇ／孔,等检血清最适稀释度为１：２００,酶标抗体使用浓度为１：１０００。根据对１４０份ＳＰＦ鸡血清检测结果的统计分析,确定其判定标准为ＯＤ均为阴性;检测Ａ型ＡＩＶ１５个不同亚型（Ｈ１￣Ｈ１５）毒株的特异性血清均为阳性;对人工接种ＡＩＶ的ＳＰＦ鸡第３天即能检出抗体,到第１６２天试验结束时检测仍为阳性。其批内和批间重复试验的变异系数分别在２．９％￣７．２％和３．４％￣９．８％之间。对３１３８份鸡血清进行监测,ｒＮＰ－ＥＬＩＳＡ与全病毒间接ＥＬＩＳＡ与全病毒间接ＥＬＩＳＡ（ＡＩＶ－ＥＬＩＳＡ）、琼脂扩散     

鸡传染性支气管炎可疑病料的病毒分离及初步鉴定

１９份鸡传染性支气管炎（ＩＢ）可疑病料通过ＳＰＦ鸡和鸡胚感染试验、血凝（ＨＡ）试验、气管环培养（ＴＯＣ）感染试验、单克隆抗体（Ｍａｂ）ＥＬＩＳＡ和电镜形态学观察，初步证明其中１３份病料含ＩＳ病毒（ＩＢＶ）．在用其中９份接种８～９周龄ＳＰＰ鸡进行的发病试验中，全部呈现临床症状，其中３份引起病死亡率（６０～８０％），接种后５周从存活鸡采血作ＩＢＶ血凝抑制（ＨＩ）试验，结果均为阳性．     

鸡传染性支气管炎可疑病料的病毒分离及初步鉴定

１９份鸡传染性支气管炎可疑病料通过ＳＰＦ鸡和鸡胚感染试验，血凝试验，气管环培养感染试验，单克隆抗体ＥＬＩＳＡ和电镜形态学观察，初步证明其中１３份病料含ＩＢ病毒，在用其中９份接种８－９周龄ＳＰＦ鸡进行的发病试验中，全部呈现临床症状，其中３份引起高死亡率（６０－８０％），接种后５周从存活鸡采血作ＩＢＶ血凝抑制试验，结果均为阳性。     

鸡传染性法氏囊病的快速诊断

应用鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体及其荧光标记物，对接种ＩＢＤ疫苗、强毒感染和自然病例鸡组织进行直接荧光抗体试验、斑点酶联免疫吸附试验和琼脂扩散试验三种检测方法的比较，结果表明，鸡接种疫苗后１０天内ＤＦＡ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ均呈阳性反应，而ＡＧＰ只在接种后６－８天的样品中检出抗原。２２例人工感当鸡和４０例自然发病鸡组织的检测结果表明，ＤＦＡ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的敏感性基本一致，且高于ＡＧＰ，它们的     

用鸡气管上皮细胞粘附─间接ELISA评价鸡源大肠杆菌致病性

用鸡气管上皮细胞粘附＿间接ＥＬＩＳＡ评价鸡源大肠杆菌致病性恽时锋（南京军区南京总医院动物实验科２１００２）郑明球蔡宝祥（南京农业大学动物医学院）采用１日龄鸡气管上皮细胞作为抗原包被ＥＬＩＳＡ板，分别用大肠埃希氏菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）单因子血清与鸡源Ｅ．ｃ...     

应用C—ELISA检测禽流感病毒核蛋白抗体

应用杆状病毒表达的重组核蛋白及单抗建立了竞争ＥＬＩＳＡ（Ｃ—ＥＬＩＳＡ）,用于抗Ａ型禽流感病毒核蛋白抗体的检测。试验检测了７５６只鸡,１１２３只火鸡,７０７只鸸鹋和１２６１只鸵鸟的共３８４７个血清样品。与琼脂扩散试验（ＡＧＩＤ）对比,Ｃ—ＥＬＩＳＡ方法对上述四种血样的敏感性均为１００％;而与血凝抑制试验（ＨＩ）相比,则其敏感性在鸡、火鸡和鸸鹋为１００％。鸵鸟为９６．２％。经ＡＧＩＤ检测为阴性而Ｃ—ＥＬＩＳＡ阳性的样品中有９０％以上通过ＨＩ试验至少一种血清亚型呈阳性反应。试验发现Ｃ—ＥＬＩＳＡ和ＡＧＩＤ方法的特异符合率在８５．５％—９９．８％之间。这些结果表明,Ｃ—ＥＬＩＳＡ和ＨＩ一样都比ＡＧＩＤ更敏感、更特异。因此,Ｃ—ＩＬＩＳＡ有可能取代ＡＧＩＤ,用于禽类（包括平胸鸟）Ａ型流感病毒血清学监测。