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1.
用禽网状内皮组织增生病病毒(REV)感染SPF鸡胚次代成纤维细胞涂片为抗原,建立了检测REV抗体的间接免疫荧光法(IFA)。确定了待检血清稀释度1∶64和兔抗鸡IgG荧光抗体的稀释度1∶32的工作浓度。应用该IFA方法对人工感染REV的20只30日龄SPF鸡进行了检测,接种后4天时均呈阴性反应,7天时8只鸡呈阳性反应,14天20只全部呈阳性的反应。通过对NDV、IBDV、ALV、MDV、CIAV、AIV等标准阳性血清的交叉试验,证明该方法特异性强。应用该IFA方法对我国辽宁、山东、黑龙江省部分鸡群进行REV抗体检测,证明该方法特异性强、敏感性高,适于在生产中推广应用。 相似文献
2.
应用间接免疫荧光法检测鸡传染性贫血病病毒抗体的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
用鸡传染性贫血病病毒(CIAV)MSBI-TK5803毒株感染的MDCC-MSB;细胞涂片为抗原,建立了检测CIAV抗体的间接免疫荧光法(IIFA)。应用该IIFA方法对人工感染的SPF鸡进行了检测15只1日龄SPF鸡在接种后第7、14天时均呈阴性反应;21天时2只鸡呈弱阳性反应,28天时均呈弱阳性反应,21天时2只鸡呈弱阳性反应,28天时均呈弱阳性反应,35天时呈明显阳性反应;14只40日龄SP 相似文献
3.
采用鸡传染性法氏囊病(IBD)病毒(IBDV-2512)研制了检测IBOV抗体的ELISA试剂盒。抗原最佳包被浓度为5.12μg/ml,被检血清最佳稀释度为1:200,酶标结合物最佳工作浓度1:1000.本试剂盒与美国KPIIBD-ELISA试剂盒比较,结果敏感性、特异性、重复性均达到美国同类产品水平,且易于操作.在4℃可稳定保存6个月、对北京地区4个非免疫鸡群的103只鸡测得其阳性率为54%,对45只SPF鸡的阳性率为0%。 相似文献
4.
间接免疫荧光检测禽脑脊髓炎病毒抗体 总被引:3,自引:0,他引:3
AEV Van Roekel鸡胚适应株在鸡胚成纤维细胞和鸡胚神经胶质细胞传代,用盲传至第6代的CEF,CEB制成荧光标本。建立了AEV荧光抗体检测方法,确定了待检血清稀释度1:10和荧光抗体FITC羊抗鸡IgG的稀释率1:10的工作浓度。通过对NDV,MDV,IBDV,AIV,Reo等标准阳性血清的交叉试验,证实该法特性强且简单,方便经济,适合于鸡群AEV抗体的检测。 相似文献
5.
禽流感病毒重组核蛋白ELISA诊断技术的研究 总被引:47,自引:1,他引:47
用表达禽流感病毒(AIV)核蛋白基因的杆状病毒感染Sf9昆虫细胞。以其表达产物制备抗原,建立了以杆状病毒系统表达的AIV核蛋白为抗原的禽流感间接酶联免疫吸附试验诊断技术(rNP-ELISA)。其抗原最适包被量为0.6μg/孔,等检血清最适稀释度为1:200,酶标抗体使用浓度为1:1000。根据对140份SPF鸡血清检测结果的统计分析,确定其判定标准为OD均为阴性;检测A型AIV15个不同亚型(H1 ̄H15)毒株的特异性血清均为阳性;对人工接种AIV的SPF鸡第3天即能检出抗体,到第162天试验结束时检测仍为阳性。其批内和批间重复试验的变异系数分别在2.9% ̄7.2%和3.4% ̄9.8%之间。对3138份鸡血清进行监测,rNP-ELISA与全病毒间接ELISA与全病毒间接ELISA(AIV-ELISA)、琼脂扩散 相似文献
6.
AEVVanRoekel鸡胚适应株在鸡胚成纤维细胞(CEF)和鸡胚神经胶质细胞(CEB)传代,用盲传至第6代的CEF、CEB制成荧光标本。建立了AEV荧光抗体检测方法,确定了待检血清稀释度1∶10和荧光抗体FITC羊抗鸡IgG的稀释度1∶10的工作浓度。通过对NDV、MDV、IBDV、AIV、Reo等标准阳性血清的交叉试验,证实该法特异性强,且简单、方便、经济,适合于鸡群AEV抗体的检测。 相似文献
7.
禽流感RT-PCR诊断法的建立 总被引:5,自引:0,他引:5
根据禽流感病毒(AIV)A/Chicken/Breslin/1902(H7N7)株的血凝素(HA)基因参考序列设计合成一对H7HA特异引物,并应用SDS-蛋白酶K法提取病毒RNA,建立了逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测AIVRNA的方法。应用此法对鸡胚培养的AIV尿囊液、SPF感染鸡粪便进行了检测,并与琼脂扩散试验和电镜技术作了对比。特异性试验以新城疫病毒(NDV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、减蛋综合征病毒(EDS-76V)等的感染鸡胚尿囊液作为对照。结果表明,AIV尿囊液RT-PCR全部阳性,SPF感染鸡粪便87份,RT-PCR检出69份阳性,样品处理浓缩后琼脂扩散检出11份,电镜检测了23份样品,仅检出2份阳性。非特异性对照样品经RT-PCR检测全部阴性。将AIV感染鸡胚尿囊液作10倍系列连续稀释,可检出稀释度为10-2的病毒尿囊液。RT-PCR最早检出时间为感染后第3天,而琼扩和电镜均是7天。该法具有高度的特异性和灵敏性,且节约时间(只需8小时左右),可从分子水平上对AIV进行早期快速诊断和流行病学调查 相似文献
8.
马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B抗原Ⅰ型特异性和群共同性决定簇的单克隆抗体 总被引:3,自引:1,他引:2
用能表达马立克氏病病毒(MDV)糖蛋白B(gB)的重组杆状病毒感染的Sf9细胞免疫小鼠,制备针对MDVgB的单克隆抗体。以Ⅰ型马立克氏病病毒GA株感染的鸡胚成纤维细胞作为检测抗原,同时以免疫荧光试验(IFA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)来筛选杂交瘤细胞,结果获得了IFA和ELISA均为阳性的2株单克隆抗体细胞株,定名为BA4和BD8。在IFA和免疫沉淀试验中,单抗BD8与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型MDV均呈阳性反应;单抗BA4只对Ⅰ型MDV(包括CVI988疫苗株)呈阳性反应。免疫沉淀反应进一步确证2株单抗识别的是MDV糖蛋白B抗原。 相似文献
9.
用单抗介导的荧光抗体技术检测鸡尿囊细胞内传染性支气管炎病毒的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
用传染性支气管炎病毒(IBV)H120、H52、M41、ARK、澳大利亚T株、野外分离株RS、RY及鸡新城疫病毒(NDV)、鸡传染性法氏囊病毒(IBDV),鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)、减蛋综合症病毒(EDSV)等分别接种9日龄SPF鸡胚,37℃孵育48小时后,将其尿囊液离心,沉淀用PBS悬浮,涂片,用抗IBV单抗MC作一抗、进行间接荧光抗体检测。结果:H12O、H52、M41“ARK、T株及RS、RY均显阳性,而NDV、IBDV、ILTV、EDSV均为阴性。结果表明、用此法检测鸡胚尿囊液中IBV.具有快速、敏感、特异的优点。 相似文献
10.
针对鸡新城疫病毒(NDV)弱毒株F蛋白前体(F0)F2片段的特异结构,人工合成特异性多肽,将多肽与牛血清白蛋白(BSA)化学偶联制和轩成全抗原后免疫小鼠,制备抗多肽血清。经ELISA检测,该抗体与MDV弱毒株呈阳性反应,而与鸡痘病毒(FPV),鸡传染性腔上囊病病毒(IBDV),MDV强毒F48E8株和四平析呈阴性反应,试验结果证明该抗体可以用于鉴别NDV弱毒株。 相似文献
11.
鸡传染性法氏囊病的快速诊断 总被引:4,自引:1,他引:4
应用鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体及其荧光标记物,对接种IBD疫苗、强毒感染和自然病例鸡组织进行直接荧光抗体试验、斑点酶联免疫吸附试验和琼脂扩散试验三种检测方法的比较,结果表明,鸡接种疫苗后10天内DFA和Dot-ELISA均呈阳性反应,而AGP只在接种后6-8天的样品中检出抗原。22例人工感当鸡和40例自然发病鸡组织的检测结果表明,DFA和Dot-ELISA的敏感性基本一致,且高于AGP,它们的 相似文献
12.
产蛋下降综合征(EDS-76)病毒DNA探针的制备及应用研究 总被引:2,自引:0,他引:2
用纯化的产蛋下降综合征(EDS-76)病毒(H91毒株)悬液提取的核酸,经琼脂糖凝胶电泳只出现1条分子量较大、背景清晰的核酸带。用BamHI酶消化产生4个片段,大小分别为17kb、10kb、4.0kb和2.0kb。将其中的2.0kb片段克隆进pUC18DNA载体中,重组质粒DNA用digoxigenin标记作为DNA探针,在dotblot中该探针不与鹅胚尿囊液核酸抽提物、马立克氏病病毒(MDV)DNA、鸡传染性贫血病毒(CAV)DNA、SPF鸡基因组DNA等核酸反应,只与3株EDS病毒(EDS标准毒株AV-127、EDSH91毒株和从健康鹅体中分离的EDSY81毒株)DNA呈阳性反应。人工感染产蛋母鸡和雏鸡后24h即可用该探针从泄殖腔棉拭子样品中检测出EDS病毒DNA,在感染后35h仍能从部分感染鸡样品中检出。对部分探针检测阳性鸡的泄殖腔棉拭子样品用SPF鸡胚分离病毒,并用HA和HI试验检测分离病毒的特异性;在感染过程中,同时检测了血清中HI抗体的消长情况。结果表明,人工感染鸡排毒至少可以维持2个月左右,而且血清中HI抗体即使很高,也不能阻止感染鸡的排毒。 相似文献
13.
用IBD-ELISA快速诊断盒对IBDV阳性法氏囊囊毒及IBD阳性出血清,IBDV阴性法氏囊及IBD阴性血清和IB,ILT,ESD-76,REO,ND,MD等6种鸡传染病的抗原及阳性血清检测,只有IBDV阳性法氏囊囊毒及阳性血清呈阳性反应,证明快速诊断盒对IBDV法氏囊囊毒抗原及其抗体的检测是特异的,与其它6种传染病的抗原和抗体无效叉反应。与AGP对比试验结果表明,检测IBDV阳性法氏囊囊毒时,快 相似文献
14.
禽流感抗体斑点—ELISA诊断技术的研究 总被引:22,自引:1,他引:21
以混合纤维素酯微孔滤膜为固相载体,用自制的禽流感全病毒抗原和酶标抗体,建立了禽流感抗体斑点 E L I S A 检测法,其抗原最适包被量为 0.06μg/点;血清抗体最佳稀释度为 1100;酶标抗体作 1200 稀释;出现明显清晰的斑点者判为禽流感抗体阳性。该方法对 S P F鸡血清及新城疫、传染性法氏囊病等其它 11 种鸡疫病阳性血清均为阴性,对不同亚型特异性的禽流感病毒( A I V)分型血清、琼扩( A G P)阳性血清及血凝抑制( H I)阳性而 A G P疑似的血清样品均呈阳性;对人工接种 A I V 的 S P F鸡第 3 天即能检出抗体阳性,第 5~117 天可全部检出。与间接 E L I S A 法比较,不仅其特异性、敏感性、重复性相一致,而且结果可用肉眼判定,更适合现地禽流感抗体监测及流行病学调查。 相似文献
15.
在1日龄和3周龄鸡的脾粘着(CSA)细胞中,检测到了被正常鸡血清(NCS)中和过的传染性法氏囊病毒(IBDV)的感染性,有3周龄鸡的(CSA)细胞中,检测到了被母源抗体(MN-Ab)中和过的IBDV的感染性。此外,发现1日龄鸡制备的CSA细胞含有补体受体(CR),1周龄鸡制备的CSA细胞既含有CR又有Fc受体(FcR)。然而,即使CSA细胞上的FcR被热凝集NCS(56℃,60分钟)阻断的情况下, 相似文献
16.
从疑似IBD病鸡的法氏囊组织中分离到1株ARV 总被引:5,自引:2,他引:3
从暴发类似传染性法氏囊病(IBD)的江苏省某鸡场采集病鸡法氏囊组织制成组织悬液,接种鸡胚卵黄囊,部分鸡胚3~5d死亡,部分鸡胚不死亡但有病变。用感染胚卵黄囊和绒尿膜混合物,接种鸡胚成纤维细胞(CEF),盲传3代后,发现以合胞体为特征的细胞病变(CPE)。感染细胞做超薄切片电镜观察,可见细胞浆内病毒粒子呈整齐的晶格状排列。用免疫沉淀法提取病毒抽提核酸,经SDS-PAGE电泳,可见规律排列的10条带,呈3-3-1-3排列。与禽呼肠孤病毒(ARV)参考毒株S1133株的核酸谱带的数目和位置相同。血清学试验与ARV呈阳性反应,与传染性法氏囊病病毒(IBDV)呈阴性反应。证明分离病毒为ARV 相似文献
17.
猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)分离鉴定及其与欧、美PRRSV抗原的比较 总被引:7,自引:0,他引:7
在我国吉林省某地猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)抗体阳性猪群的4头2日龄弱仔猪实质脏器中分离到2株PRRSV。间接荧光抗体试验(IFA)结果表明,PRRSV(LV.VR-2332)抗血清与2个分离株呈阳性反应;分离到病毒的弱仔猪血清与参考株(LV.VR-2332)也呈阳性反应;而分离株与HCV、PrV、PPV、TGEV、PEDV和HEV无交叉抗原。以上试验证明,我们已成功地分离到2株地方性PRRSV。进一步用六种PRRSV单抗(A~F)进行IFA试验,结果2个分离株与VR-2332的荧光反应谱相同。说明它们之间在抗原结构上具有同源性。 相似文献
18.
抗IBDV独特型抗体疫苗的制备与应用 总被引:1,自引:1,他引:0
应用提取纯化的抗IBDVIgG免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞在PEG作用下融合,应用ELISA法检测筛选,经有限稀释法克隆2次,获得2株(2B6株,5F4株)分泌抗IBDV独特型抗体的杂交瘤细胞株,其能诱生BALB/c小鼠产生高效价的含抗IBDV独特型抗体的腹水。用此独特型抗体分别与福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂按1∶1比例乳化制备成抗IBDV独特型抗体疫苗,免疫接种SPF鸡和普通京白公鸡,然后用IBDV野毒株经点眼和滴鼻方式攻毒,保护率分别为8/8、14/14,从而证实抗独特型抗体疫苗有潜在的研究和应用价值。 相似文献
19.
异源抗原在建立ELISA检测传染性法氏囊病毒抗体中的应用 总被引:4,自引:0,他引:4
本文报告采用vero细胞增殖的IBDV抗原建立了间接酶联免疫吸附试验(ELISA),用于定量检测鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)抗体。该法快速、敏感性高、特异性强、重复性好。同时,通过30份血清样品ELISA效价(ET)的对数值(logET)与血清P/N值(待检血清OD值与阴性血清OD值之比)的线性回归分析,得直线方程y=3.0589+0.0739x(r=0.9174),从而血清样品的ET可通过血清单一稀释度的P/N值来计算。用不同来源抗原作ELISA表明,从vero细胞增殖的抗原比从鸡胚成纤维(CEF)细胞增殖的抗原可提高检测血清OD值近20%,表现出异源抗原具有更高的特异性 相似文献
20.
将AEV-VR株接种于6日龄SPF鸡胚卵黄囊,孵化至16日龄时迫杀,采集鸡胚绒毛尿囊膜、尿囊液、胚体称重,研磨、离心取上清液加入福尔马林灭活,以灭菌PBS(pH7.2)稀释成1:1、1:10、1:20三种浓度,加入吐温-80制成水相,另以白油、司斑-80和硬质酸铝煮沸灭菌制成油相,搅拌混合制成不同浓度的灭活油乳剂疫苗,分别免疫2日龄SPF雏鸡,安全可靠.用AEV-VR、AEV-1143、AEV-NH937三株混合毒做攻毒试验证明1:1稀释的灭活苗效果最好,保护率可达100%.用AEV-VR,AEV-1143、AEV-NH937及以上三株混合毒同法制成1:1浓度的灭活油乳剂疫苗,分别免疫2日龄商品雏鸡后用其相应的毒株做攻毒试验,表明该疫苗是安全的,而且可使免疫鸡抵抗AEV的感染,具有良好的免疫效果. 相似文献