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1.
采用光敏生物素标记A群轮状病毒(GARV)全基因组RNA,制备了GARV群特异核酸探针,该探针与样品进行打点杂交,经亲和素-碱性磷酸酶(AV-AP)系统显色,可检出100pg病毒RNA序列。试验表明轮状病毒光敏生物素核酸探针具有特异、灵敏、稳定的特点,可用于GARV的检测和进行基因相关性研究。 相似文献
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本文应用聚合酶链反应(PCR)技术从构建的新城疫病毒(DNV)cDNA文库中扩增含编码F糖蛋白前体-Fo酶切位点序列的359bp的F蛋白基因cDNA片段。将此359bp cDNA片段经光敏生物素标记后,即成DNV-cDNA探针。该探针能特异性地从感染的尿囊液中检测出DNV强毒株和疫苗毒株的基因组RNA,而不与IBDV-dsRNA,AIBV-ssRNA,EDS76-dsDNA、MDV0dsDNA、F 相似文献
3.
用IBDV特异引物对IBDVRNA进行逆转录和PCR扩增。以低触点琼脂糖凝胶电泳法回收PCR扩增带,经酚-氯仿纯化后,用DIG际记制备IBDVCDNA核酸探针.斑点杂交试验证明,该探针能与IBDV不同毒株(STC、Lukert、B_2和LQ)发生阳性杂交反应,敏感度为1pg.本实验制备的IBDVcDNA核酸探针不仅为IBDV的流行病学研究和分子生物学鉴定提供了敏感可靠的手段,而且也是核酸探针制备方法的一次探索。 相似文献
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DIG—标记鸡传染性法氏囊病病毒cDNA探针的制备 总被引:7,自引:1,他引:6
用IBDV特异引物对IBDV RNA进行逆转录和PCR扩增。以低融点琼脂糖凝胶电泳法回收PCR扩增带,经酚-氯仿纯化后,用DIG标记制备IBDV cDNA核酸探针。斑点杂交试验证明,该探针能与IBDV不同毒株发生阳性杂交反应,敏感度为1pg。本实验制备的IBDV cDNA核酸探针不仅为IBDV的流行病学研究和分子生物学鉴定提供了敏感可靠的手段,而且也是核酸探针制备方法的一次探索。 相似文献
5.
从母牛接种过A组BRV株NCDV-Lincoln(P1:G6)苗的两个吡邻牛场分离到两株牛轮状病毒(BRV),编号为NS-1和NS-2,Northern-blotting试验表明,NS-1和NS-2有相的的A组RNA电泳模式,而且全部基因片段同源,体外中和试验表明,NS-1株病毒能被G6特异性单克隆抗体(McAs)和抗BRVB641株(P5:G6)豚鼠高免血清(GPAS)中和,但不被G10特异性M 相似文献
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用核酸探针检测新城疫病毒的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
用光敏生物素标记鸡新城疫cDNA制备核酸探针,经斑点杂交和碱性磷酸酶显色后,探针同该cDNA的PCR产物,PCR产物重组子和新城疫强,弱毒株呈现阳性反应,与IBV,ILT,MG和正常尿囊液等均呈阴性杂交反应,田间病料的杂交试验也表明该cDNA探针是且特异的检测方法。 相似文献
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用光敏生物素标记鸡新城疫cDNA,制备核酸探针,经斑点杂交和碱性磷酸酶显色后,探针同该cDNA的PCR产物、PCR产物重组子和新城疫强、弱毒株呈现阳性反应,与IBV、ILT、MG和正常尿囊液等均呈阴性杂交反应,田间病料的杂交试验也表明该cDNA探针是敏感且特异的检测方法 相似文献
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将兔出血症病毒(RHDV)感染死亡兔肝反复冻融,分别经氯仿抽提,聚乙二醇(PEG)沉淀浓缩,蔗糖垫底超速离心,Sepharose4B柱层析及蔗糖密度梯度离心,得到纯化的RHDV。电镜观察,RHDV粒子无囊膜,大小为32~34nm。核酸展层法显示,病毒基因组核酸长度约为7.0kb。用苯酚抽提法从上述病毒悬液中提取的核酸,在琼脂糖凝胶电泳呈现2条主带;当以λDNA-HindⅢ消化物为分子量标准时,它们分别位于相当于20kb(A带)和2.0kb(B带)的位置。用DNAse、RNAse及S1核酸酶消化试验分析表明,A带是一种双股DNA,而日带为单股RNA。在Northernblot中只有B带可以与德国提供的RHDV-cDNA克隆探针发生杂交反应,而A带不与该探针显示任何反应。此外,用相同方法也可从临床健康兔肝得到在电泳中的表现与A带一致的核酸提取物。本研究表明,在我国流行的RHD病料中,出现的约7.0kb的单股RNA是RHDV病原特异的。 相似文献
11.
PCR结合分子杂交法检测鸡传染性支气管炎病毒 总被引:6,自引:2,他引:4
利用逆转录-PCR(RT-PCR)特异性扩增鸡传染性支气管炎病毒(IBV)基因组中M基因和N基因之间一段核酸片段。以pUC19质粒载体将此片段克隆,用EcoRI和HindⅢ酶切此重组质粒,回收克隆片段后,制成生物素标记的核酸探针。用RT-PCR及生物素核酸探针法分别对IBV,IBDV,ILTV,MDV及NDV进行检测,结果证明该方法为IBV特异性检测方法。对人工感染IBV的SPF鸡口腔棉拭样品进行跟踪检测,证明本方法能在SPF鸡接毒后1~10d内检出IBV。 相似文献
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本文应用聚合酶链反应(PCR)技术从构建的新城疫病毒(NDV)cDNA文库中扩增含编码F糖蛋白前体──Fo酶切位点序列的359bp的F蛋白基因cDNA片段。将此359bpcDNA片段经光敏生物素标记后,即成NDV-cDNA探针。该探针能特异性地从感染的尿囊液中检测出NDV强毒株和疫苗毒株的基因组RNA,而不与IBDv-dsRNA、AIBv-ssRNA、EDS76-dsDNA、MDV-dsDNA,FPV-dsRNA及AILV-dsDNA发生交叉杂交反应。试验结果表明:尽管该探钎含有编码Fo蛋白酶切位点序列的碱基顺序,但它还是不能把NDV的强、弱毒株区分开。这说明NDV强、弱毒株比区域内的碱基存在着相当大的同源性。不过,此探针对NDV来说具有特异性,这就为NDV的诊断技术开创了基因水平检测的新途径。 相似文献
13.
用亚硫酸氢钠—乙二胺溶液对B组轮状病毒的ssRNA胞嘧啶修饰和转氨基作用,与生物素e—氨基己酸N—羟基琥珀酰亚胺酯反应,制备探针与样品在硝酸纤维膜上进行点杂交,经亲合素—碱性磷酸酶系统显色,可测出106.25-212.5pg的RNA靶序列,特异性试验表明:B组生物素探针只能与B组核酸杂交,而与无关核酸无杂交信号,用B组探针检测45份仔猪腹泻粪样,检出B组阳性5份,检出率11.1%,明显高于PAGE法,实验结果表明,生物素核酸探针制备简单并且有特异、灵敏、稳定的优点,可用于各组轮状病毒的检测。 相似文献
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1987年3-7月,在168例马驹腹泻病例中观察到89例(53%)由轮状病一道因清3型引起,从62病例粪便中共分离到51株RV,分离株(CH-3)具有独特的毒RNA电泳型且不同于该农场广泛流行的其他病毒株,用抗人和动物的RV血清1-12型抗血清分别与CH-3病毒进行中和试验均呈阴性,但C-3病毒株双股RNA能与马源RV血清3型株进行探针杂交。 相似文献
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用地高辛标记的核酸探针从尿囊液和组织中检测传染性支气 … 总被引:1,自引:0,他引:1
将IBVT株基因组S1基因上0.6kb片段(位于S1基因上1121bp~1723bp之间)克隆到PIB-PCR Cloning vector中,用地高辛标记探针,分别与9株IBV 的PCR产物和12株IBV的核酸进行点杂交均呈阳性反应,而该探针不与IBDV和NDV的RNA,EDS-76病毒的DNA及正常鸡胚尿囊液的抽提物反应。探针检测IBV-PCR产物的灵敏度为100~200pg。用该探针检测不同毒株IBV在鸡胚中的繁 相似文献
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参考禽副粘病毒的融合蛋白基因(F基因)cDNA序列,设计并合成了1对引物,以他离到对鹅有致病力的Ⅰ型禽副粘病毒GPMV/QY97-1株的核酸(RNA)为模板,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对其融合蛋白基因3'端进行扩增,获得了预计的884bp左右的片段。将该片段克隆进pGEM-T Easy质粒载体,获得重组质料T-GPMVF3',采用限制性内切酶和PCR方法对该重组质粒进行鉴定,证明所克隆的 相似文献
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光敏生物素标记EDSV—DNA探针检测鸡减蛋综合症(EDS)的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
应用光敏生物素标记EDSV-DNA与pUC19重组质粒DNA做探针,检测人工发病减蛋综合症蛋鸡的粪便,蛋,输卵管样品,以新城疫病毒(NDV),传染性病毒(IBDV),传染性支气管炎病毒(IBV),包涵体肝炎病毒(IBHV)作对照。实验结果显示:探针能特异地检出EDS病鸡粪便,输卵管,蛋清样品中的病毒,与NDV,IBDV,IBV及IBHV均呈阴性反应。探针灵敏度达10pgEDSV-DNA。 相似文献
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选择覆盖肾综合征出血热病毒(HFRSV)膜蛋白(MP)基因的保守区核苷酸序列合成2对引物,采用异硫氰酸胍一步抽提RNA,建立了RT-PCR检测鼠体恙螨及游离恙螨体内HFRSV-RNA的方法,扩增产物经凝胶电泳及斑点印迹杂交证实具有特异性。结果显示,HFRSV抗原阳性鼠体恙螨50只组、10只组、游离螨50只组,HFRSV抗原阳性鼠肺1000mg、500mg组经RT-PCR检测为阳性;HFRSV抗原阳性鼠体恙螨5只组,HFRSV抗原阴性鼠体恙螨50只和10只组,游离螨10只和5只组,鼠肺HFRSV抗原阳性100mg组均未见有明显扩增带。进一步用套式反转录-聚合酶链反应(NestedRT-PCR)检测,在RT-PCR未测出HFRSV-RNA的各组中均检测有HFRSV-RNA。结果表明NestedRT-PCR具有高特异、高敏感的特点,可用于检测恙螨体内微量HFRSV-RNA,为确认恙螨作为HFRSV的传播媒介提供了分子生物学证据。 相似文献
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新城疫病毒F48E8株融合蛋白基因的克隆 总被引:2,自引:0,他引:2
以提纯的我国标准UDVF48E8强毒株基因组RNA为模板、化学合成的融合蛋白(F)基因特异寡核苷酸为引物,反转录合成F基因cDNA,并采用同聚物加尾的方法克隆到细菌质粒pGEM3Zf(-)。经AIX平板筛选和酶切分析,并用F基因片段核酸探针作dot-blot检测,共获得插入片段长度在0.6 ̄2.8kb之间的阳性克隆34个,其中插入片段大于1.5kb的阳性克隆8个。用多种限制性内切酶对阳性克隆pF7 相似文献