犬实验感染CDV的病理学研究

对实验感染犬瘟热病毒的病犬进行了系统的病理学观察,并用酶标ＳＰＡ法对病犬脏器组织中ＣＤＶ抗原进行了定位检查。结果表明,淋巴系统各器官组织是ＣＤＶ急性感染早期首先侵犯的靶器官。脏器组织的病理改变与ＣＤＶ抗原检出呈正相关。脏器组织中包涵体的检出与形态结构具有一定的特征性和示病意义,但采用免疫组化方法检查ＣＤＶ抗原,更具优越性。作者认为,ＣＤＶ９３０３９株和ＣＤＶ９３０４１株是致病力很强的泛嗜性ＣＤＶ。     

犬瘟热病毒的分离鉴定、致病特点和单克隆抗体的研究

犬瘟热是由犬瘟热病毒（ Ｃａｎｉｎｅ Ｄｉｓｔｅｍ ｐｅｒ Ｖｉｒｕｓ, Ｃ Ｄ Ｖ）引起的犬的一种高度接触传染性疾病。近年来,随着我国军、警犬、实验用犬和宠物犬饲养量的大幅度增加,以及异地交流的增多,犬瘟热在我国犬群中的发病率和致死率均有升高的趋势,而且临床表现也与以往有所不同。分析原因,除母源抗体干扰、疫苗效价低及使用不当外,犬群中是否出现了 Ｃ Ｄ Ｖ 新毒株亟待研究证实。本研究在从国内病犬分离到 Ｃ Ｄ Ｖ 的基础上,进行了 Ｃ Ｄ Ｖ 理化特性、致病特点、回归动物试验以及研制成功分泌抗 Ｃ Ｄ Ｖ 单克隆抗体,并进行了初步应用,取得了较为满意的研究结果。在研究中应用免疫组化方法进行病原检查,证实可很好地解决以往病理观察中无法进行病毒性疾病的特异性诊断的问题。１）采用免疫组化间接 Ｂ Ａ 法,对临诊疑似犬瘟热病犬脏器组织进行了 Ｃ Ｄ Ｖ 抗原定位检查及系统病理学观察。结果表明：发病犬大脑、小脑、心、肺、肝、脾、肠、肾、肾上腺、淋巴结、膀胱等组织细胞及血管内皮、支气管上皮细胞胞浆内均可见抗原阳性反应。同时,抗原阳性反应组织、器官均可见不同程度的病理变化。２）从病死犬肺、肝和淋巴结分离到 ２株 Ｃ Ｄ Ｖ,即 Ｃ Ｄ Ｖ９３０３９ 和      

NDV单苗,NDV／IBV联苗对鸡头部相关淋巴组织的影响

本文选用１０株ＮＤＶ疫苗、１０株ＮＤＶ／ＩＢＶ联苗，察接种２周龄雏鸡后对头部相关淋巴组织（ＨＡＬＴ）的影响。通过对接种鸡进行一系列体内试验，检测了哈德氏腺（ＧＨ）对布氏杆菌灭活抗原滴眼的反应情况。根据这一结果，对ＨＡＬＴ的几个部位和支气管进行组织学检查，并见到有微观变化。本研究表明：３种ＮＤＶ／ＩＢＶ联苗（１株Ｂ１／Ｍａｓｓ＆Ｃｏｎｎ、２株ＬａＳｏｔａ／Ｍａｓｓ＆Ｃｏｎｎ）可干扰ＧＨ对布氏抗原的反     

马立克氏病（MD）胚胎免疫攻毒后病毒抗原的定位研究

本试验利用异硫氰酸荧光黄标记抗体和免疫金标记探针，对胚胎免疫攻毒试验鸡组织脏器中马立克氏病病毒（ＭＤＶ）抗原进行定位及动态观察。结果发现，不同组织细胞内ＭＤＶ抗原的表现形态略有不同，淋巴组织中阳性细胞内ＭＤＶ抗原多呈颗粒状或斑点状定位子细胞浆、细胞核内；脏器组织中阳性着染的实质细胞内病毒抗原则主要呈均匀弥散性分布于感染细胞（肾小管上皮细胞、肝细胞）的胞浆中而不发生瘤变。阳性细胞动态观察的结果则显示     

犬瘟热病毒小熊猫株(LP)的动物感染试验

将从死亡小熊猫肝脏病料中分离到ＣＤＶ ＬＰ株第９代ＭＤＣＫ细胞培养毒,按不同剂量各接种７只２～３月龄的健康幼犬,接种犬全部发病。于接种后７天时各捕杀２只犬进行检测,电镜检查、ＣＤＶ ＲＴ－ＰＣＲ、ＣＤＶ的分离及中和试验结果均为阳性,说明接种犬发生了ＣＤＶ感染。结合接种犬出现的临床症状及病理解剖学变化结果进行的分析表明,ＣＤＶ ＬＰ株是一株强毒,并且具有很强的免疫原性。人工感染犬试验结果表明某动物园     

马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B抗原Ⅰ型特异性和群共同性决定簇的单克隆抗体

用能表达马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｂ（ｇＢ）的重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞免疫小鼠，制备针对ＭＤＶｇＢ的单克隆抗体。以Ⅰ型马立克氏病病毒ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞作为检测抗原，同时以免疫荧光试验（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）来筛选杂交瘤细胞，结果获得了ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ均为阳性的２株单克隆抗体细胞株，定名为ＢＡ４和ＢＤ８。在ＩＦＡ和免疫沉淀试验中，单抗ＢＤ８与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ＭＤＶ均呈阳性反应；单抗ＢＡ４只对Ⅰ型ＭＤＶ（包括ＣＶＩ９８８疫苗株）呈阳性反应。免疫沉淀反应进一步确证２株单抗识别的是ＭＤＶ糖蛋白Ｂ抗原。     

CDV93039株在Vero细胞上增殖的研究

ＣＤＶ９３０３９株感染Ｖｅｒｏ细胞后主要表现细胞变性、坏死，空泡化、合胞体形成和包涵体的出现。感染后４天可见胞浆包涵体，８天可见核内包涵体，核内包涵体的产生可能与病毒的毒力有关。与文献报道的ＣＤＶ其他毒株相比，ＣＤＶ９３０３９株在Ｖｅｒｏ细胞上的感染速率属中间型。ＣＤＶ９３０３９株在Ｖｅｒｏ细胞上增殖后的毒力较高，除不同毒株间可能存在差异外，培养温度的高低亦是原因之一。ＣＤＶ９３０３９株在Ｖｅｒｏ细胞上的最佳增殖条件是在３３℃培养８～１２天。     

南昌某犬场发生犬瘟热病毒感染的诊断

对南昌某犬场从外地引进的德国牧羊犬发病死亡的病料进行电镜检验,发现存在犬瘟热病毒（ＣＤＶ）样病毒粒子,病料的ＲＴ－ＰＣＲ检测均为ＣＤＶ阳性,并且从部分病料中分离出了ＣＤＶ,说明德国牧羊犬发病是由于ＣＤＶ感染所致。用从德国牧羊犬肝脏病料中分离中的ＣＤＶ ＮＣＳ株接种幼犬进行的动物感染试验结果表明ＮＣＳ株能够引起全部试验犬ＣＤ的发生,进一步证明了德国牧羊犬所发生的疾病是ＣＤ。     

CDV93039株在Vero细胞上增殖的研究

ＣＤＶ９３０３９株感染Ｖｅｒｏ细胞后主要表现细胞变性，坏死，空泡化，合肥体形成和包涵体的出现。感染后４天可见胞浆包涵体，８天可见核内包涵体，核内包涵体的产生可能与病毒的毒力有关。与文献报道的ＣＤＶ其他毒株相比，ＣＤＶ９３０３９株在Ｖｅｒｏ细胞上的感染速率属中间型。     

犬瘟热的微生物学诊断研究

对临床诊断为犬瘟热的１４例病犬，取其脑组织，运用细胞培养、合胞体检查、包涵体检查、免疫荧光试验、电镜观察等５种检测方法，就犬瘟热的微生物学诊断进行了系统的研究。结果表明，犬脑组织块与猫胚（ＦＥ）细胞或非洲绿猴肾（Ｖｅｒｏ）细胞共同培养，盲传的培养物出现不稳定的细胞病变，通过对不同代次的培养物检查包涵体，并作超薄切片或负染，电镜观察犬瘟热病毒（ＣＤＶ）粒子，证实分离到ＣＤＶ野毒。病犬脑组织切片经ＨＥ染色检查包涵体及用ＣＤＶ荧光抗体直接法检测脑抹片及接种犬脑的细胞培养物，均获得一定的阳性结果。建立的改良离子捕获电镜法，用于检测犬脑匀浆和犬脑接种细胞培养物，与离子捕获电镜法、免疫电镜法及直接电镜法相比，效果更为理想。１４例临床诊断为犬瘟热的病犬，综合运用上述微生物学手段检测，结果为１２例阳性，２例疑似。     

马立克氏病病毒（MDV）糖蛋白D基因的分离克隆,定序及其在大肠杆…

用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术，从马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）基因组ＤＮＡ中扩增出ＭＤＶ糖蛋白（ｇＤ）抗原基因１２０９ｂｐ编码序列。将该ＰＣＲ扩增产物于ＥｃｏＲＩ和ＫｐｎⅠ位点克隆进行ｐＵＣ１８质粒载体中。将ｇＤ重组ｐＵＣ１８质粒ＤＮＡ用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ（Ｄｉｇ）标记后，在Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ中，该探针能识别ＭＤＶ基因组ＤＮＡ的Ｂａｍ ＨＩ－Ａ克隆中的Ａ     

应用单克隆抗体探针检测IBDV病毒抗原

应用单克隆抗体２Ｅ６和２Ｇ１０对传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）Ｐ３００９株作免疫斑点试验，检测细胞培养物法氏囊组织和脾组织中的ＩＢＤＶ抗原。这两株单克隆抗体探针测定病毒抗原的界限为４８ｎｇ。应用这两株探针检测出５株血清Ⅰ型和１株血清Ⅱ型的病毒，结果显示具有显著的特异性。这两种探针与来自７株其他非相关禽病病毒抗原不发生交叉反应。探针检测ＩＢＤＶ抗原，在接种后两天即可从小鸡囊和脾脏组织中检测到。用这两     

猪圆环病毒发病机理的研究

通过口／鼻和静脉注射途径，用猪圆环病毒（ＰＣＶ）实验性感染未吮初乳仔猪，检查其病毒和抗原的分布，分别用病毒分离和冰冻切片间接免疫荧光抗体技术检查ＰＣＶ和抗原。结果，在机体组织中都检出了ＰＣＶ抗原，特别是在脾、胸腺和肺。中枢神经系统的组织中未检出ＰＣＶ抗原或病毒。检查自然发生流产／死胎母猪的胎儿，结果从同一农场两窝死产仔猪的２份血清和１份脾脏病料中分离出３株ＰＣＶ；检查１６０份胎儿血清，未检出ＰＣＶ     

昆明某犬场犬传染性肝炎的病毒分离鉴定及防治研究

在犬腺病毒分子流行病学调查过程中，从昆明某犬场发生的一起临床上表现犬传染性肝炎的病犬脏器中，分出了１株病毒（ＣＡＶ－１－ＫＭ），并对其进行了病毒形态学、理化学、血清学交叉中和试验、动物感染试验与分子生物学系统鉴定，证明为一株犬传染性肝炎强毒，用特异性的抗犬生肝炎免疫血清对处于危险中的犬，进行了紧急预防注射，有效地控制了疾病的流行。用犬Ⅱ型腺病毒疫苗作预防注射，一年多来该犬场再未发生该病。     

犬瘟热诊疗初探

犬瘟热诊疗初探周昌贵，李真银，刘友平，何锡荣（四川省江津市农牧渔业局６３２２６０）犬瘟热是由犬瘟热病毒（ＣＤＶ）引起的主要危害犬、特别是２～４月龄幼犬的一种高度接触性传染病，病死率高，流行面广。据资料报道ＣＤＶ感染病犬自然死亡率可达８０％以上，对犬危...     

抗犬细小病毒高免血清的制备和应用

应用差速离心和密度梯平衡离心技术从患ＣＰＶ性肠炎的犬粪便和肠内容物中提纯的ＣＰＶ抗原接种犬，制备了高效价的抗血清，用该血清共治疗７８头病犬，治愈率达８２％（６４／７８），实践表明，自制的高免血清对患ＣＰＶ性肠炎的病犬具有治疗和控制疾病发展的作用，特别是早期病例，仅用抗血清即可治愈，对中期病犬结合支持和对症疗法，可大大提高治愈率，有很高的应用价值。     

应用反转录多聚酶链反应（RT－PCR）对鸡传染性法氏囊病毒的基因检测研究

参考Ｃｕｌ株核酸序列自行设计一对２０ｂｐ序列为引物，经反转录和ＰＣＲ扩增传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）核酸高度保守的Ｖｐ４编码区中１５０ｂｐ的片段，用于检测ＩＢＤＶ。对德国Ｃｕｌ株、美国标准强毒ＳＴＣ和变异株１０８４Ｅ、中国ｑ８０１以及７个国内野外分离株分别进行扩增，同时对新城疫病毒（ＮＤＶ）、马立克氏病毒（ＭＤＶ）、禽呼肠孤病毒（ＲＥＯＶ）、禽腺病毒（ＨＡＡ）、Ｖｅｒｏ细胞、ＳＰＦ鸡法氏囊组织进行扩增后，２％琼脂糖凝胶电泳分析，１１株ＩＢＤＶ都出现分子量大小与设计相符合的ＤＮＡ扩增带，４种其他病毒、囊组织和Ｖｅｒｏ细胞都未出现任何扩增带。建立了直接采用细胞毒或组织毒进行ＰＣＲ的快速简便的核酸提取方法，应用二级ＰＣＲ扩增出了与一级ＰＣＲ相符的更加清晰的扩增带。     

牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体：野外分离株和猪瘟病毒株…

用牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）单克隆抗体检查了大量北美ＢＶＤＶ分离株和血清学相关的瘟病毒属中的猪瘟病毒（ＨＣＶ）。结果，没有一种ＢＶＤＶ单克隆抗体能与所有ＢＶＤＶ分离株发生反应，交叉反应性最强的单克隆抗体为抗Ｐ８０／Ｐ１２５抗体，这种抗体与１７５／１８０株北美分离株发生阳性反应（９６％）、抗ｇｐ５３单克隆抗体与少数分离株的交叉反应性也较高（９４％）。７株单克隆抗体中至少有１株能与所有ＢＶＤＶ分离株     

流行性出血热病毒气溶胶感染乳鼠的免疫病理学研究

采用免疫组化ＢＡ法，对流行性出血热病毒（ＥＨＦＶ）气溶胶感染乳鼠脏器组织中的病毒动态分布进行了观察，并对其抗体消长进行了测定。结果表明：①ＢＡ法为病理诊断ＥＨＦＶ感染提供了一种准确的手段；②ＥＨＦＶ可通过气溶胶途径感染乳小鼠，乳小鼠感染ＥＨＦＶ的ＬＤ５０值可作为环境浓度的参考值；③ＥＨＦＶ气溶胶途径感染乳鼠后，４ｈ即可在心、肺，１ｄ在嗅球部检出，并可在其组织细胞中增殖，经血循、嗅神经、单核巨噬细胞系统等多途径扩散，造成多组织脏器的泛发性感染。感染后１２～１４ｄ，病毒检出率和病毒量均达峰值。动物自身免疫系统对ＥＨＦＶ有一定的清除能力；④感染乳鼠脑、肺、肾等脏器组织的病变与人类感染ＥＨＦＶ的病变有一定的相似性，提示可作为人ＥＨＦＶ的模型动物；⑤抗原检出率高于抗体检出率，ＥＬＩＳＡ法检出率高于ＩＦＡ法检出率。     

用RT—PCR检测犬外周血液单核细胞中犬瘟热病毒核衣壳蛋…

为了迅捷地诊断犬瘟热病毒（ＣＤＶ）感染，本研究采用及转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，检测犬外周血液核细胞（ＰＢＭＣ）中ＣＤＶ核衣壳蛋白（ＮＰ）基因。以两套引物针对ＣＤＶＯｎｄｅｒｓｔｅｐｏｏｒｔ毒株ＮＰ基因的两个片段。应用ＲＴ－ＰＣＲ〉以６株ＣＤＶ毒株感染Ｖｅｒｏ细胞，用ＣＤＶ人工感犬染的的ＰＢＭＣ，在这两处细胞的提的ＲＮＡ中，手增ＮＰ基因片段，取得了较好的结果。在３２例临床疑为ＣＤＶ感染