一种快速提纯兔抗鸡EDS-76病毒IgG的方法

本试验采用辛酸加硫酸铵沉淀二步法提纯兔抗ＥＤＳ－７６病毒血清中的ＩｇＧ。在０．０６Ｍ醋酸盐缓冲液（ｐＨ４．８）稀释的血清中,每ｍｌ血清滴入３３μｌ辛酸时,非ＩｇＧ类蛋白可被基本除去。利用本法提纯的ＩｇＧ,免疫活性和生物活性不发生改变。该方法简便、快速、节约试剂,所获ＩｇＧ纯度高、活性好,适用于从大批量样品中提纯ＩｇＧ。     

对EDS—76病毒快速检测方法的研究

用平板红细胞凝集（ＨＡ）试验对鸡产蛋下降综合症（ＥＤＳ－７６）病毒进行了快速定性检测，并与微量ＨＡ试验进行了对比。结果表明，当病毒ＨＡ滴度在５×２＾１２及其以上时，在１０－２５℃范围内于半分钟可与１０％鸡红细胞（ＲＢＣ）发生极明显的大片凝集。当病毒ＨＡ滴度在５×２＾１０以下时，则凝集片明显较小，且反应时间在２分钟以上。这种凝集现象可被ＥＤＳ－７６阳性血清特异性抑制。此法可用于对大批量样品中高效价病     

抗EDS—76病毒单克隆抗体的研究：Ⅰ.分泌抗ESD—76病毒单克隆抗体细…

建立了５株分泌抗ＥＤＳ－７６病毒的单克隆抗体细胞株，分别是Ｃ４＾１３，Ｃ１１＾１３，Ｃ１１＾１５，Ｅ７＾１５和Ｆ９＾１３，各株分泌抗体的能力均稳定，且者是抗ＥＤＳ－７６病毒的特异性抗体，不与其它多种禽病毒发生交叉反应。其中Ｃ４＾１３，Ｃ１１＾１５分泌的抗体是ＩｇＧ２ａ，Ｃ１１＾１３分泌的抗体是ＩｇＧ１。这５株细胞株所分泌的抗体都有较强的中和活性。     

ND—EDS76病毒血凝特性测定

对不同红细胞浓度与病毒血凝特性的相关性，不同甲醛灭活浓度，不同灭活时间，反复冻融等因素对病毒血凝特性的影响以及不同的繁毒时间与所繁毒量和毒价高低的关系进行了测定。结果表明，高红细胞浓度使病毒凝价降低，高浓度甲醛灭活也会降低毒价，不同的繁毒时间与繁毒的毒价有一定的相关性，而不同的灭活时间以及反复冻融等似乎对毒价影响不大。     

EDS——76陕西分离株理化与血凝特性的研究

本文对ＥＤＳ－７６陕西分离株的部分理化特性及血凝特性进行了初步研究。结果表明：该株对乙醚和氯仿不敏感、对酸，对热敏感，５６℃、６０℃、７０℃１ｈ均可使其失去对鸭胚的感染性，染料的光动力作用对其感染性也有影响。该病毒能凝集鸡、鸭、鹅、鸽子和麻雀的红细胞，且血凝性能好，但不能凝集燕子，牛、马、绵羊、兔、狗、小白鼠和豚鼠的红细胞；其中对ＥＤＳ－７６病毒能凝集麻雀而不能凝集燕子红细胞特性的确定，属国内外尚     

鸡IgG快速分离纯化和纯度鉴定

随着免疫学实验技术的普及和发展,从鸡高免血清中提纯IgG已成为常用的免疫化学技术. 在提纯鸡IgG过程中,不但要保证除去绝大多数杂蛋白和白蛋白,保留大多数免疫球蛋白,包括各种IgG亚类,而且又不影响IgG生物活性.这就需要一种好的提纯方法,既要保证IgG纯度,又要保证其生物活性. IgG的经典提纯法是先用硫酸铵盐析,得到粗制的Ig(Immoun-globulin)然后再经分子筛层析,离子交换层析,亲和层析等方法进一步分离纯化IgG.这些纯化方法需要一定的仪器、设备,操作复杂,工艺流程较长,且试剂昂贵,在一般实验室难以推广使用.而且辛酸-硫酸铵两步法提纯的IgG同样能得到高纯度、高生物活性的IgG.     

鸭血清IgG的提纯方法比较

本文对鸭血清分别采用了硫酸钠法、辛酸-硫酸铵法、硫酸铵法进行了鸭IgG的提取。提取后的鸭IgG样品用纯度和蛋白含量两个指标来衡量。用辛酸-硫酸铵法提取的鸭IgG样品蛋白含量为9.45mg/ml,纯度能达到用于免疫标记技术的要求,而且操作简单、价格低廉,适于从大批量样品中提纯鸭IgG;用硫酸钠法提取的鸭IgG样品蛋白含量为9.14mg/ml,相对较高,但纯度较低;用硫酸铵法提取的鸭IgG样品蛋白含量、浓度都较低。     

产蛋下降综合征（EDS－76）病毒DNA酶切图谱分析

选用ＥｃｏＲＩ、ＰｓｔⅠ、ＰｖｕⅡ、ＨｉｎｄⅢ、ＢｇｌⅠ和ＢｇｌⅡ６种限制性内切酶，对国内４株ＥＤＳ－７６病毒鸡源分离株和国外标准株ＡＶ－１２７及１株鹅源腺病毒的ＤＮＡ进行酶切图谱的比较，结果发现４种鸡源分离株与ＡＶ－１２７株用上述６种酶切的片段数分别为４、８、１０、１０、６和７条。各酶切图形、片段大小亦十分相似，表明均为ＥＤＳ－７６病毒。ＥｃｏＲＩ－ＨｉｎｄⅢ和ＰｓｔＩ－ＥｃｏＲＩ的双酶切也得到同样结果。鹅源分离株的酶切片段数分别为６、７、９、７、４和１０条，酶切图形和片段大小均与ＡＶ－１２７有很大不同，表明该分离株可能为１株血清型相同而基因组不同的ＥＤＳ－７６鹅腺病毒。     

检测EDS76病毒抗体Dot—ELISA方法建立的及应用

建立了检测ＥＤＳ７６病毒抗体Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ方法。待检血清最适稀释度为１∶１０,ＥＤＳ７６病毒ＤＥＦ细胞培养物最佳工作浓度为１∶５,ＨＲＰ－ＭｃＡｂ工作浓度为１∶４００。所建方法与常见几种鸡的传染病血清无交叉反应,１２０份临床样本中检出６６份阳性。     

鸭IgG提取方法的比较试验

用辛酸－硫酸铵法提取鸭IgG并与传统提取方法硫酸钠、硫酸铵法进行比较，结果表明，3种方法回收的IgG依次为12．35、8．36和10．14mg/mL，而且辛酸－硫酸铵法回收IgG纯度高，可用于免疫标记，比色谱层析快速、操作简单、价格低廉。用该法以鸭卵黄提取IgG，回收的IgG为13．58mg/mL，氯仿法为8．55mg/mL，PEG不能回收；辛酸－硫酸铵法从鸭卵黄得到的IgG活性最高。