牛胚胎玻璃化冷冻技术研究进展

胚胎冷冻保存是保存和繁殖遗传优势动物的主要工具,是胚胎移植产业的重要组成部分。目前广泛使用的冷冻方法主要有慢速冷冻和玻璃化冷冻2种。由于玻璃化冷冻具有成本低、效率高、操作简单等优点,玻璃化冷冻法越来越受到人们的重视。经过多年研究,研究人员已经在玻璃化冷冻方法、冷冻液等方面取得了大量进展,玻璃化冷冻法已经开始进入商业化应用。本文综述了牛胚胎冷冻保存技术的研究进展,旨在为相关从业人员提供一定借鉴和参考。     

牛体外受精胚胎的玻璃化冷冻及一步脱防冻剂的研究

在过去的１０年中,体外受精技术进展很快,目前已可以利用该技术在实验室内大批量生产牛胚胎。研究简单、有效的冷冻方法无疑会加速体外受精胚胎在生产中的推广应用。玻璃化冷冻法由于操作简便,可以快速冷冻胚胎而日益受到重视。过去的研究已证实,用２５％乙二醇＋２５...     

哺乳动物胚胎冷冻保存的研究进展

哺乳动物胚胎的超低温保存技术不仅为动物种质资源的保存和良种家畜的国际交流提供了简单的手段，而且还是胚胎移植、体外受精、转基因和克隆等胚胎生物技术不可分割的组成部分。1972年，英国学者Whittingham等人首次利用慢速冷冻法保存小鼠胚胎获得成功，此后许多学者对冷冻方法进行了广泛的研究。至今，牛、绵羊、山羊、马、兔子、猫、羚羊、狒狒、狨猴、猴和人等的胚胎冷冻保存也获成功。然而，在     

牛体外胚胎冷冻保存的研究进展

体外胚胎冷冻保存技术是胚胎移植技术的重要组成部分,在辅助生殖技术中发挥重要作用,同时对种质资源保存、加强遗传改良和促进优质种源国际交流等方面具有重要意义。然而,体外胚胎冷冻过程中存在脂质含量过高、活性氧水平升高及机械损伤等问题,导致体外胚胎冷冻效率低,这极大地限制了体外胚胎冷冻保存技术的广泛应用。大量研究表明,通过去脂质、优化体外胚胎培养液、人工塌陷囊胚腔和优化冷冻程序等手段,可以有效提高冷冻后胚胎的存活率和发育能力。因此,本文概述了体外胚胎冷冻保存技术的研究进展和胚胎冷冻过程中存在的问题,总结了提高体外胚胎冷冻效率的方法措施,旨在为提高体外胚胎冷冻保存效率提供一定参考。     

不同冷冻方法对牛体外受精胚胎冷冻效果的影响

通过采用程序降温法(试验1:分步法10%甘油;试验2:直接法1.8mol/L乙二醇+0.1mol/L蔗糖)和玻璃化法(试验3:20%甘油+0.3M蔗糖+0.3M木糖+3%聚乙二醇+20%乙二醇)对牛体外受精胚胎进行冷冻保存及解冻后进行孵化培养试验,用囊胚孵化率对各方法进行了比较。结果表明,10%甘油组、1.8mol/L乙二醇+0.1mol/L蔗糖组及玻璃化组胚胎存活率分别为85%、82.5%、90%;囊胚孵化率分别为50%、55%和80%(P<0.05)。体外受精胚用玻璃化法保存显著优于程序降温法,可获得较高的胚胎存活率(90%)和囊胚孵化率(80%)。     

牛IVP胚胎玻璃化冷冻技术的研究

作者比较了乙二醇传统冷冻和OPS玻璃化冷冻牛IVP胚胎的效果,目的是改善其冷冻效果,提高IVP胚胎的移植妊娠率。结果表明,玻璃化冷冻后的存活率(D7-71)明显高于D7-71L(P<0.01),D7-72组与D7-71L组(传统冷冻方法)的存活率基本一致(P>0.05)。     

猪胚胎冷冻保存研究进展

胚胎冷冻保存技术在大多数哺乳动物上已获得成功,牛胚胎冷冻已经进入商业化应用阶段。猪胚胎由于其特殊的低温生物学特性,冷冻保存研究进展缓慢。本文综述了猪胚胎在冷冻过程中的细胞生物学变化,以及近几年猪胚胎冷冻保存研究所取得的显著进展。     

小鼠的胚胎冷冻保存研究

随着生物工程技术的进步，出现了许多生物工程小鼠品系，促使小鼠胚胎冷冻保存技术得到了广泛的应用，采用胚胎冷冻的方法来长期的保存这些品系，可以节省大量的人力和物力，目前，在小鼠胚胎冷冻方面的研究主要是围绕提高存活率和简化操作过程，本文综述了在小鼠胚胎冷冻保存方面的国内外研究进展。     

哺乳动物胚胎冷冻技术研究进展

胚胎冷冻保存已广泛用于胚胎移植，动物克隆以及动物资源保护。此技术的应用需保证胚胎在冷冻一解冻后具有较高的成活率。自1972年小鼠胚胎冷冻获得成功以来，许多学者在简化冷冻程序，缩短冷冻时间等方面进行了深入研究，试图寻找一种可用于生产的冷冻方法。本文全面地比较了不同的冷冻方法及其结果，籍此为该领域工作者提供一定帮助。     

超低温冷冻对奶牛胚胎超微结构的影响

奶牛冷冻胚胎移植成活率较鲜胚移植明显低.为明确低温冷冻造成胚胎损伤的机理、为冷冻保存方法的进一步改进提供理论依据,利用透射电子显微镜观察了奶牛胚胎常规冷冻和玻璃化冷冻前后的超微结构变化.结果表明,奶牛鲜胚细胞分为两种类型:一种位于内细胞团(ICM)外层,胞质电子致密度低而着色浅,并含有大量的线粒体和内质网;另一种位于ICM中心区域,着色较深,溶酶体的数量多,其余细胞较较少.常规冷冻后,透明带和卵周隙明显变宽,细胞间接触变得松散.囊胚中含有退化的胞核和凋亡小体,内质网变大、变粗,脂滴明显增多.玻璃化冷冻后,ICM细胞的结构发生破坏,部分细胞发生崩解,细胞碎片大量分布于细胞间隙和卵周隙中,并可见大量的脂滴,凋亡细胞和凋亡小体增多.冷冻过程对早期胚胎细胞器的损伤可能是移植后成活率下降的主要原因.     

绵羊精液冷冻保存研究进展

绵羊精液保存技术目前虽然已进入生产应用阶段,但冷冻精液人工授精受胎率低仍是限制绵羊冷冻精液进行生产推广的重要因素。目前,对于绵羊精液冷冻的研究主要集中在冷冻稀释液组分和冷冻程序等方面。文章针对国内外有关绵羊精液冷冻保存稀释液、冷冻程序、解冻方法和冷冻损伤等研究进展作一综述,旨在对今后精液冷冻保存研究提供一定的参考。     

切割取样后胚胎的冷冻保存技术的研究

研究了切割取样后小鼠胚胎和牛胚胎冷冻-解冻的技术方法。结果表明：（1）分别以10％甘油、10％乙二醇作为冷冻液以及在以上两种冷冻液中分别添加10％葡聚糖＋0．1mol／L蔗糖作为冷冻液常规方法冷冻切割后的小鼠胚胎，冷冻-解冻后体外培养72h总发育率分别为56．9％（259／455）、81．8％（604／738）、84．8％（540／637）和59．5％（308／518）。（2）取样后胚胎体外短暂培养（0-4h）并不能提高切割取样后小鼠胚胎冷冻-解冻体外培养发育率。（3）切割取样小鼠胚胎在25％甘油＋0．25mol／L蔗糖＋20％的血清为冷冻液，在-100～-110℃左右熏蒸2min快速冷冻后体外培养发育率为73．3％（33／45），切割取样牛胚胎快速冷冻-解冻移植妊娠率为57．1％（4／7）。     

小鼠胚胎的玻璃化冷冻研究

用不同冷冻载体(玻璃管、塑料管和0.25 mL细管)及不同冷冻方法(程序化冷冻和玻璃化冷冻)对小鼠3.5 d~4 d桑椹胚和囊胚进行冷冻保存,并与不做任何冷冻保存处理直接培养进行对比。结果表明,使用玻璃管、塑料管和0.25 mL细管作为胚胎的承载材料进行玻璃化冷冻,效果差异不显著;采用程序化冷冻与OPS玻璃化冷冻法,对小鼠胚胎进行冷冻保存可以取得较好的结果。从而得出,用不同材质的冷冻载体进行玻璃化冷冻,可以获得与程序化冷冻相同的良好效果。     

鸭胚成纤维细胞培养、传代及保存方法的研究

本研究旨在建立鸭胚成纤维细胞离体培养、传代以及冷冻保存体系,为鸭胚胎或生殖干细胞的离体培养奠定基础。利用胰酶-EDTA消化鸭胚胎组织,10% FBS+DEME营养液培养,获得原代和传代成纤维细胞。分别用DMSO、甘油以及乙二醇作为冷冻保护剂对F1代鸭胚成纤维细胞进行冷冻保存,检测复苏后细胞的生长情况。利用此方法可以获得高活性的鸭胚成纤维细胞,并可成功传至第三代。其中F1代与F2代细胞活力最好,达到90%以上。3种冷冻剂保存的细胞复苏后均与F1代细胞的活力存在明显差异,均小于80%,其中用DMSO冷冻保存的细胞复苏后活力最强,生长密度保持较好。