骨形态发生蛋白15在兔卵巢中的免疫组化定位

[目的]探讨BMP15蛋白在兔卵巢卵泡发生过程中的调控机制。[方法]采用免疫组织化学方法测定了BMP15在兔卵巢中的表达定位情况。[结果]BMP15蛋白在原始卵泡中没有表达,在初级卵泡、次级卵泡和有腔卵泡卵母细胞及有腔卵泡颗粒细胞和卵泡液中均有表达,在黄体溶解早期也有表达,但是在闭锁卵泡中的表达则受到抑制。[结论]BMP15参与了兔卵泡发育全过程,并且与黄体溶解机制有关;而在闭锁卵泡中,其低水平的表达可能是由其他因子所抑制,进而共同调节了卵泡的闭锁。     

生长分化因子 9 基因的研究进展

目的研究GDF9基因单核苷酸多态性与茶花鸡产蛋性状之间的关系,为进一步阐明该基因的遗传变异提供基础,也为提高茶花鸡产蛋性能的育种工作提供指导。方法采用直接测序法筛选SNPs位点,并将不同基因型的开产日龄、体质量及300日龄产蛋数进行差异性分析。采用qPCR检测GDF9基因在茶花鸡高、低产蛋组不同组织中的表达情况。结果共检测到5个SNPs位点,分别是g.1642A>T、g.1652A>G、g.1804A>G、g.2008C>T和g.2281T>C,其中g.1652A>G导致异亮氨酸(Ile)突变为缬氨酸(Val)。 g.1642A>T、g.1652A>G、g.1804A>G、g.2008C>T和g.2281T>C位点的优势等位基因分别为A、G、G、T和T;除g.1642A>T外,其他位点均符合哈温平衡定律。g.1652A>G和g.2281T>C属于中度多态位点。关联分析表明：g.1652A>G位点AA型开产体质量最高,AG型300日龄产蛋数最高;g.2281T>C位点TT型开产日龄最早。GDF9基因在高、低产蛋组的3个组织中表达一致,由高到低依次为卵巢、垂体和下丘脑。结论本研究揭示了GDF9基因多态性对云南茶花鸡的产蛋性状存在一定的影响,推测g.1652A>G和g.2281T>C可能是影响茶花鸡产蛋性状的重要SNPs位点。     

山羊生长分化因子9基因外显子2 的PCR-SSCP分析

【目的】寻找与产羔数相关的遗传标记，为山羊高繁殖力的标记辅助选择提供科学依据。【方法】以控制Belclare绵羊和Cambridge绵羊高繁殖力的生长分化因子9（growth differentiation factor 9, GDF9）基因为候选基因，根据绵羊GDF9基因序列设计4对引物，采用PCR-SSCP技术检测GDF9基因外显子2在高繁殖力山羊品种(济宁青山羊)以及低繁殖力山羊品种(波尔山羊、文登奶山羊、辽宁绒山羊、北京本地山羊)中的单核苷酸多态性，同时研究该基因对济宁青山羊高繁殖力的影响。【结果】山羊与绵羊的GDF9基因外显子2核苷酸序列同源性为99%(955/965)。引物1和引物4存在多态性。对于引物1扩增片段，5个山羊品种均检测到AA、AB和BB 3种基因型，测序分析发现外显子2第26 bp处有1个G→A的单碱基突变，但没有引起氨基酸改变；济宁青山羊A等位基因频率为0.9128，B等位基因频率为0.0872；AA基因型济宁青山羊产羔数最小二乘均值比AB基因型的多0.54只(P<0.01)，比BB基因型的多0.63只(P<0.01)。对于引物4扩增片段，5个山羊品种均检测到CC、CD和DD 3种基因型，测序分析发现外显子2第792 bp处有1个G→A的单碱基突变并且导致缬氨酸改变为异亮氨酸；济宁青山羊C等位基因频率为0.9266，D等位基因频率为0.0734；CC基因型济宁青山羊产羔数最小二乘均值比CD基因型的多0.57只(P<0.01)，比DD基因型的多0.62只(P<0.01)。【结论】初步表明GDF9基因可能是控制济宁青山羊多胎性能的一个主效基因或是与之存在紧密遗传连锁的分子标记。     

白血病抑制因子在胚泡植入期大鼠卵巢中的表达

采用免疫组织化学超敏SP法,对大鼠胚泡植入期卵巢组织内白血病抑制因子(Leukemia inhibito-ry factor,LIF)的表达进行了检测。结果表明,LIF在不同发育阶段卵泡的颗粒细胞中均有表达,在原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡的卵母细胞中高表达,成熟卵泡的卵母细胞中等表达;在初级卵泡和次级卵泡的内膜细胞中LIF高表达,在成熟卵泡的内膜细胞低表达;在卵巢组织基质细胞、血管内皮细胞、粒性黄体细胞、生殖上皮中高表达,在卵泡液中中等表达。说明LIF在大鼠胚泡植入期卵巢中的多种细胞内均呈高水平表达。     

海门山羊GDF9基因的RFLP分析

采用PCR-RFLP技术,对120只海门山羊生长分化因子9(GDF9)基因的G8位点进行限制性片段长度多态性分析(RFLP),探寻与产羔数相关的遗传标记.结果表明:PCR扩增产物均被切成2个片段,表现出1种基因型,无多态性现象,推测GDF9基因对海门山羊的繁殖性能无显著影响.     

生长分化因子15基因的克隆及重组原核表达载体的构建

为克隆人生长分化因子15基因,构建h GDF15基因的重组原核表达载体,为研究该基因的功能奠定实验基础,利用PCR技术克隆其基因序列,将其分别连接至p ET28a和p Cold I载体,构建重组p ET28a-h GDF15和p Cold I-h GDF15原核表达载体,并进行质粒PCR和双酶切验证以及测序验证。结果表明:重组载体构建成功,为进一步研究h GDF15蛋白的作用机制奠定基础。     

狂犬病病毒免疫组织化学定位方法的建立

应用抗狂犬病病毒的特异性抗体及免疫组织化学方法检测接种了狂犬病病毒SRV-9毒株感染的小鼠脑组织,并对狂犬病病毒抗原进行了组织定位分析。结果表明:在小鼠的小脑分子层蒲肯野氏细胞胞浆出现明显的局灶型阳性颗粒。说明免疫组织化学方法检测狂犬病病毒敏感度高、直观,可作为诊断狂犬病病毒的辅助性方法,对研究狂犬病病毒在脑组织神经细胞及其他组织器官内的分布具有一定的意义。     

绵羊GDF9基因生物信息学分析

利用生物基因组学数据库,对生长分化因子9（Growth Differentiation Factor 9,GDF 9）基因进行生物信息学分析。结果表明,绵羊GDF 9基因含有1个1 362 bp的开放阅读框,编码452个氨基酸;GDF 9蛋白分子质量为51 773.63 D;GDF 9基因主要位于细胞膜及膜外,参与机体的信号转导调控。     

七彩山鸡胃肠道生长抑素细胞的免疫组织化学定位

[目的]应用生长抑素（somatostatin,SS）抗血清研究七彩山鸡（Phasianus colchicas）胃肠道SS免疫活性细胞的分布密度和形态,并探讨其分布型的成因及细胞形态与功能的关系。[方法]采用免疫组织化学方法进行试验。[结果]SS细胞在腺胃及十二指肠以下都有分布。在回肠分布密度最高,空肠和十二指肠较高,盲肠和腺胃次之,直肠很少。SS细胞的型态多样,呈圆形、椭圆形、锥体形等,主要分布于胃肠固有膜、黏膜上皮细胞之间、黏膜上皮细胞基部、腺泡上皮细胞之间。[结论]七彩山鸡胃肠道SS细胞分布型的形成与各部位消化功能有关,根据形态,认为七彩山鸡胃肠道SS细胞具有内、外分泌两种功能。     

泥鳅消化道6种内分泌细胞的免疫组织化学定位

[目的]对泥鳅胃肠道内分泌细胞进行免疫组织化学定位研究。[方法]应用6种胃肠激素抗血清对泥鳅（Misgurnus anguillicaudatus Cantor）消化道内分泌细胞进行了免疫组织化学定位。[结果]5-HT-IR细胞分布在泥鳅消化道的食管、前肠和中肠。以前肠前段密度最高,食管和前肠后段其次,中肠最少,分布差异显著;SS—IR和PP—IR细胞相同,主要分布于食管和前肠,食管段最多,前肠后段较少,前肠前段最少,中肠和后肠中未见分布;Gas—IR、Glu—IR和SP—IR3种免疫活性细胞在消化道各段均未分布。[结论]泥鳅消化道内这6种内分泌细胞分布和其他鱼类比较,既显示了鱼类消化道内分泌细胞分布的共性,又显示了一定的种间差异。     

复合酶制剂对断奶獭兔生长性能与营养物质表观消化率的影响

以60只35日龄断奶獭兔为试验动物,分为对照组和试验Ⅰ组、试验Ⅱ组、试验Ⅲ组3个试验组,每组设3个重复,每重复5只獭兔,研究日粮中添加2、4、6g/kg 3个水平复合酶制剂对其生长性能和营养物质表观消化率的影响。结果表明,3个试验组的平均日增量分别比对照组提高10.65%(P<0.05)、14.49%(P<0.01)、12.39%(P<0.01);料重比分别比对照组降低11.26%(P<0.01)、15.47%(P<0.01)、13.36%(P<0.01);腹泻率分别比对照组降低53.31%(P<0.05)、70.79%(P<0.01)、62.55%(P<0.01),以试验Ⅱ组效果最好。试验组营养物质表观消化率均高于对照组,其中试验组粗蛋白表观消化率分别比对照组提高11.86%(P>0.05)、22.73%(P<0.05)、18.10%(P<0.05);试验组粗纤维表观消化率分别比对照组提高14.53%(P<0.05)、23.00%(P<0.01)、22.15%(P<0.01),以试验Ⅱ组效果最好;试验组粗脂肪表观消化率分别比对照组提高3.5%(P>0.05)、8.68%(P<0.05)、9.36%(P<0.05),以试验Ⅲ组效果最好;试验组其他干物质、粗灰分、钙、磷表观消化率高于对照组,但差异不显著。因此认为,添加4g/kg水平复合酶制剂对提高断奶獭兔生长性能、营养物质表观消化率,降低腹泻率效果最佳。     

小鼠FGF9在大肠杆菌中的表达与纯化

为了建立小鼠FGF9的原核表达体系,获得纯化的FGF9重组蛋白,采用PCR技术扩增FGF9,并将其克隆入原核表达载体pET30a(+)中,经测序验证后将该重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,采用亲和层析技术进行目的蛋白的纯化,并用Western blotting进行了免疫原性验证.测序结果显示插入到载体中的片段与FGF9的天然序列一致,在BL21(DE3)中表达出了可溶性的FGF9重组蛋白,其表达量达到总蛋白的40 %;用镍螯合亲和层析方法获得了纯度大于95 %的FGF9重组蛋白.     

黔东南小香羊GDF9基因遗传变异分析

采用直接测序法检测GDF9基因在黔东南小香羊群体中的单核苷酸多态性。结果表明：在GDF9基因外显子2的550位碱基处发生了突变（A→C）并导致组氨酸突变为脯氨酸;试验检测到AA型、Aa型和aa型3种基因型;A等位基因频率为0．6667,a等位基因频率为0．3334。     

转录因子ABP9基因过表达对植物生长发育的影响分析

【研究目的】为分析玉米ABA/逆境响应转录因子ABP9基因过量表达对植物生长发育的影响以利用该基因开展抗逆分子育种。【方法】本研究构建了35S启动子驱动ABP9组成型表达的植物表达载体,获得了过表达ABP9基因的拟南芥转基因株系,并在正常生长条件下,比较了转基因植株和野生型在种子萌发、营养生长和生殖生长阶段的形态和生理变化,分析了可能的分子机制。【结果】结果表明,正常生长条件下,转基因植株与野生型相比表现出萌发,幼苗生长以及开花阶段的生长抑制;气孔开度减小,叶片内源ABA含量降低;ABA信号传导基因表达增强,而ABA合成基因表达降低;而且这些效应在ABP9基因表达相对较强的转基因株系中表现更明显。【结论】说明ABP9基因过量在正常生长条件下即诱导转基因植株产生耐逆反应,抑制植株的生长发育。因此,在利用ABP9基因进行转基因抗逆育种时须考虑控制ABP9基因适时适量表达。     

栉孔扇贝成长因子研究

[目的]研究栉孔扇贝成长因子。[方法]对麻子港自然海域的栉孔扇贝养殖场进行水质、浮游植物及地形的研究。[结果]结果表明,在扇贝的1个生长周期内各种条件的变化对扇贝的生长都有影响。其中,浮游植物的密度对其影响作用最关键：密度小时扇贝食物来源少生长缓慢,在一定的密度范围内扇贝快速增长,当达到赤潮的密度时又会导致扇贝的大量死亡。其他条件通过影响浮游植物的密度对扇贝起间接的作用。温度也是影响扇贝成长的重要因素。调查表明,10月水温在18℃左右,此时浮游植物的密度相对较大,是扇贝的黄金生长期,扇贝的壳高和肥度有明显的变化,11月中旬扇贝壳高达8 cm,产量可达17 kg/笼,11月中旬后,温度下降,浮游植物含量也随之下降,扇贝大小基本无变化。此时海水只是暂时的存放地,以供鲜货上市。[结论]为找到一种改善栉孔扇贝养殖的方法提供科学依据。     

B_9对马铃薯生长和产量的影响

本文研究了Ｂ９对马铃薯生长及产量的影响。结果表明，于盛蕾期叶面喷施Ｂ９溶液，对马铃薯地上部分的生长产生明显的抑制作用，但块茎的产量却明显提高。适宜处理浓度为２５００ｍｇ／Ｌ。     

妊娠中期奶山羊下丘脑中催产素的免疫组化定位

采用免疫组织化学技术中的链霉素抗生物素-过氧化酶(streptarid in-perox idase,SP)法,对妊娠中期奶山羊下丘脑中催产素(O xytoc in,OT)神经元的定位及分布进行了观察研究。结果表明,下丘脑中分泌OT的神经元主要分布在视上核和室旁核,在环核、视上弥散核、弓状核、室周核、穹窿周核、下丘脑前区、下丘脑外侧区、下丘脑后核和乳头体各核团等也有一定数量的阳性神经元;另外,在室旁核、视上弥散核、视上核、正中隆起和第三脑室附近有较多数量的强阳性神经纤维,在交叉上核有少量阳性神经纤维。提示OT在妊娠中期奶山羊下丘脑中分布广泛,且下丘脑OT经神经垂体,第三脑室,血管三条途径释放,经血液循环最终作用于靶细胞而发挥生理作用。     

影响金城山淫羊藿生长主要环境因子

[目的]研究影响嘉陵江流域金城山森林公园淫羊藿生长的主要环境因子及其适宜范围,为建立农林复合体系、开发淫羊藿中药资源和加强淫羊藿野生资源保护提供一定的指导。[方法]根据回归方程中的因子标准化系数找到最主要的影响因子,在此基础上进行双因素相关性分析以判断它对淫羊藿生长的影响程度。随后,依据聚类分析结果,结合野外调查实际情况,在主要环境因子各段测量值范围上计算淫羊藿生态位,探讨最适宜淫羊藿生长的主要环境因子的数值范围。[结果]在金城山不同环境因子对淫羊藿生长影响强度为:土壤pH值>海拔高度>土壤深度>土壤有机质>相对光照>土壤含水量;在5.73~5.83的pH值范围上,淫羊藿生态位宽度值最大。[结论]土壤pH值是影响嘉陵江流域金城山森林公园淫羊藿生长的主要环境因子,它会对淫羊藿的生长构成较大影响,其适宜的范围为5.73~5.83,在淫羊藿的栽培实践中应特别加以注意。