牛胚胎性别鉴定与取样胚胎移植应用技术的研究

本研究应用ＰＣＲ技术扩增牛ＳＲＹ序列进行奶牛胚胎性别鉴定。经１０９枚鲜、冻胚的移植，获鲜胚移值妊娠率５８．６％（３４／５８），常规冷冻胚胎移植妊娠率４４．４％（１２／２７），一步细管冷冻解冻胚胎移值妊娠率１６．７％（４／２４）。犊牛性别验证与ＳＲＹ鉴定结果均相符合。实验中对胚胎发育时期的划分，胚胎质量评定和胚龄的确定，胚龄与受体发情时间在移植中的关系，胚胎的切割取样，取样胚胎的冷冻进行了研究。     

高产奶牛性控雌性冻胚规模化移植试验

从美国引进高产奶牛性控雌性胚胎，在农村条件下，选择自然发情的黄牛作受体，移植合格受体牛648头。结果显示，自然发情黄牛924头中，经直肠检查合格受体牛648头，使用合格率为70．13％（648／924）；氯前列烯醇同期处理476头，使用合格率为36．13％（172／476），差异极显著（P〈0．01）。80～100d怀孕检查，自然发情移植成功率41．98％（272／648），同期发情移植成功率40．12％（69／172），差异不显著（P〉0．05）。自然发情黄牛不同黄体级别的移植成功率分别为：A级44．09％（41／93），B级42．43％（199／469），C级37．21％（32／86），差异不显著（P〉0．05）。单胚移植580头，移植成功率42．41％（242／580），双胚移植68头，移植成功率44．12％（30／68），差异不显著（P〉0．05）。正常胚胎单枚移植541头，移植成功率42．51％（230／541），裸胚单枚移植39头，移植成功率30．77％（12／39），裸胚比正常胚移植成功率低11．74％。怀孕牛已出生犊牛83头。其中母犊79头．公犊4头，母犊占95．18％，与自然发情的性比例（50％）相比较，差异极显著（P〈0．01）。     

高产奶牛超数排卵移植黄牛技术研究

2002-2004年,从饲养的812头奶牛群中,选择69头高产奶牛作供体进行超数排卵处理,63头供体牛共获胚胎495枚,超排成功率达91．3％(63／69),平均获胚胎7．17枚／头,可用胚胎402枚,平均可用胚胎5．82枚。其中采用加拿大生产的促卵泡素超排处理奶牛供体10头,获卵106枚,可用胚胎87枚,平均获可用胚胎8．7枚/头;采用鲜胚移植奶牛受体8l头,妊娠44头,妊娠率为54．3％,产犊28头,待产16头;采用冷冻胚胎移植黄牛受体278头,妊娠114头,妊娠率为41．0％。产犊22头,待产92头。     

牛胚胎移植技术在中国内蒙古的研究和应用

1991－1996年，对6个品种138头供体母牛超排处理199次，共获得A、B级胚胎1148枚，平均每次每头获可用胚5．77枚；共移植受体1299头（包括鲜胚和冻胚），妊娠产犊593头，总移植妊娠率为45．7％。对牛的超数排卵技术进行了深入研究，对不同超排方法的超排效果、不同品种肉牛的超排反应及重复超排的效果进行了分析，获得了适于重复应用、效果稳定的超排方案，邓用FSH－PG法，FSH总剂量在4－6mg,5d 10次递减注射。同时，对受体牛饲养管理条件与受体诱导同期发情效果和移植妊娠率之间的关系进行了探讨，对经产牛和育成牛受本移植妊娠效果进行了比较，并对移植人员技术熟练程度对妊娠率的影响进行了分析，从而为大规模实施牛ET计划提供了受体牛选择依据。     

红安格斯牛鲜胚移植效果研究

为了探讨红安格斯牛超排后的鲜胚移植效果,采用CIDR+PG+FSH法对红安格斯牛进行超数排卵处理,同时,对西门塔尔受体牛进行同期发情处理,研究了3枚鲜胚移植到3头西门塔尔受体牛体内的受孕数和产犊数,结果 3头受体牛均受孕和产犊,受孕率和产犊率均为100%。结果表明,鲜胚移植是提高胚胎移植成功率的有效手段之一。     

奶牛分割胚胎移植黄牛效果观察

用便携式分割仪在现场分割7日龄鲜胚。二枚半胚成对移植给172头黄牛受体．受体移植妊娠率50％(86／172），现已有68头受体产犊91头．其中23对为同卵双胎．双胎率33．8％(23／68)。对分割胚胎的移植妊娠率产犊率、妊娠期、季节、黄体状况等多种因素进行了研究和比较，结果表明差异皆不显著。     

牛胚胎移植技术发展概况

家畜胚胎移植是家畜胚胎工程的重要组成部分,目前已成为一项比较成熟的生物技术。我国目前在牛的超数排卵、同期发情、胚胎移植、胚胎冷冻、胚胎分割、性别鉴定等技术已与国外基本同步。在正常情况下,平均每头供体牛获可用胚5．6枚,鲜胚移植受胎率为55％～70％,冻胚移植受胎率为45％～60%．每年移植受体牛在5000头以上。     

摩拉、尼里水牛与本地水牛成胚后的胚胎移植研究

为了在建立稳定的水牛胚胎体外生产技术的同时,开展胚胎移植技术研究,探讨水牛体外胚胎质量、安全性、移植方法以及移植效果。实验采用摩拉（Murrah）、尼里／拉菲（Nili／Rivi简称尼里）水牛冻精与本地水牛卵母细胞进行人工体外受精生产的鲜胚和冻胚,分别以本地母水牛、摩拉和尼里母水牛为受体,进行胚胎移植。结果表明：鲜胚移植受胎率为44．40％（36／81）,平均每头受体移胚1．83次,产下36头犊牛,繁殖率为83．7％（36／43）;冻胚移植受胎率为32．0％（8／25）,平均每头受体移胚1．67次,产犊8头,繁殖率为53．3％（8／15）,犊牛全部成活,其中双胞胎3例,采用人工授精与胚胎移植共生的双胞胎1例。     

不同胚胎移植方法对天祝白牦牛受胎率的影响

为提高胚胎移植技术在牦牛上的运用效果,选用51头甘肃省天祝县健康黑牦牛作为受体,以纯种天祝白牦牛作为供体生产胚胎,分别对同期发情处理和自然发情的受体牛进行鲜胚和冻胚移植试验。结果,同期发情处理的受体牛鲜胚移植的受胎率显著高于冻胚移植的受胎率(P0.05),分别为52%和38.5%;在自然发情受体牛的胚胎移植中也得到了相似结果,鲜胚和冻胚的移植受胎率分别为60%和50%,同期发情处理牛的平均妊娠率则低于自然发情受体牛的平均妊娠率(P0.05),二者分别为47.5%和54.5%。结论,牦牛鲜胚移植的受胎率明显高于冻胚移植的受胎率,而且自然发情受体牛的受胎率高于同期发情处理牛。     

退掉性别控制胚胎移植试验

试验的目的是研究分选X型冻精与常规冻精品质的比较，结果显示：分选X精子的精液密度、活率、存活指数等各方面指标均明显低于常规冻精（P〈0．05）；使用4支分选X型冻精进行体内受精胚胎生产，结果对排卵数小于17枚的供体母牛进行体内受精胚胎生产效果良好，大于17枚则部分未受精；分选X型冻精奶牛鲜胚双胚移植与分选X型冻精奶牛鲜胚单胚移植进行比较，结果性控奶牛鲜胚双胚移植与单胚移植产犊率差异不大，双胚移植经济效益较高；分选X型冻精与常规冻精所产母犊比较，结果性控胚胎移植所产犊牛初生和60日龄各项指标与常规冻精所产犊牛差异不显著（P〉0．05）。     

荷斯坦牛生产体内性控胚胎的试验研究

本研究采用荷斯坦牛X-性控冻精和超数排卵技术生产奶牛体内性控胚胎。结果显示,使用阴道栓(Cue-Mate)对31头供体奶牛进行同期发情处理,发情率为100%,且发情时间较集中。31头供体奶牛共回收胚胎321枚,头均回收胚胎10.35枚,其中可用胚胎225枚,头均可用胚胎7.26枚。选择36头黄牛受体进行单胚移植,其中21头移植鲜胚,妊娠10头,妊娠率47.62%;15头移植冻胚,妊娠6头,妊娠率40.00%。     

奶牛冷冻胚胎分割移植效果探讨

分割加拿大奶牛冷冻胚胎 ,借荷斯坦牛受体移植。共分割冷冻胚胎 1 5枚 ,分割为裸半胚 30个 ,分割成功率 1 0 0 %。移植受体 2 7头 (其中移植一对半胚的受体 3头 ) ,移植妊娠 1 4头 ,受体移植妊娠率51 .85% ,产犊 1 4头 ,半胚产犊率为 4 6 .6 7% ,按未分割的整胚计算 ,产犊率达到 93.34 % ,比整胚移植产犊率还提高 1 8.34个百分点。移植半胚生产 1头犊牛需胚胎 1 .0 7枚 ,比整胚减少 0 .2 6枚 ,降低成本1 51 0 .6 0元。说明胚胎分割是降低成本 ,扩大卵源 ,增加良种牛数量的有效方法。     

和牛母牛超数排卵及胚胎移植试验研究效果初报

[目的]研究和牛母牛超数排卵及胚胎移植效果。[方法]利用纯种和牛母牛作为供体,荷斯坦母牛及西杂母牛作为受体,通过供体牛的超数排卵、人工授精、采胚、胚胎冷冻及受体牛的同期发情和鲜胚移植,快速获得纯种和牛及和牛胚胎。[结果]对4头青年纯种和牛母牛进行超排,重复冲卵13头次,共采卵数122枚,其中75枚可用胚胎,可用胚率为61.5%,平均5.76枚/头次。对75头荷斯坦牛及西杂母牛同期发情,结果获得89.2%的同期发情率。67头受体牛移植了鲜胚,2个月后妊娠检查有35头怀孕,移植妊娠率为52.23%。[结论]可以利用超数排卵及胚胎移植增加和牛母牛利用效率。     

转基因鲜胚和冻胚对黄牛受胎率的影响

本试验对转基因体细胞克隆胚胎经两种方式(鲜胚体温长途运送和冷冻胚胎复苏)移植到受体牛妊娠和产犊情况进行比较.结果为两组的妊娠率为33.08%和29.32%,出生率为5.70%和5.54%,差异均不显著(P>0.05),说明冻胚解冻后移植与鲜胚长途运输移植的效果无差异,转基因体细胞克隆胚胎低温冻存可应用于实际生产.     

LAMP法鉴定奶牛早期胚胎性别的效果研究

本试验利用Lamp法对28枚鲜胚进行了性别鉴定，将其中13枚雌性胚和3枚雄性胚胎给受体牛移植，妊娠率达45．5％，性别鉴定的准确率为100％。说明Lamp法用于奶牛早期胚胎性别鉴定是切实可行的。     

安格斯牛冻胚洲际间引种试验成功

我们从澳大利亚引入安格斯（Ａｎｇｕｓ）牛７日龄冻胚１６枚。这１６枚冷冻胚胎在液氮中保存８９４天后，用３６℃水浴解冻（２５秒钟），全部回收，在室温２７℃条件下，用１０％蔗糖一步脱除抗冻剂（甘油）１０分钟后，移入２００％犊牛血清ＰＢＳ１０分钟，再移入同样浓度的犊牛血清ＰＢＳ中１０分钟。按常规形态鉴定方法，对胚胎评级，１０枚为可用胚胎，解冻后胚胎可用率为６２．５％（１０／１６。将１０枚可用胚胎用非手术法，移入发情周期与胚胎发育期同步的５头受体牛，结果２头妊娠，移位妊娠率为４０％（２／５）。妊娠足月后，２头受体牛各产公犊１头。在我国首次获得成功。     

牛胚胎移植技术在生产中的应用

随着现代畜牧业水平的不断提高,一些发达国家胚胎移植技术已走向生产应用,近年来美、加两国移植产犊数已超过万头,法国仅国家胚胎公司一家每年就移植上千头牛。目前国外胚胎移植水平是:鲜胚移植受胎率为40—60％;冻胚移植受胎率为40—50％;供体牛超排一次平均得可用胚胎3.77—5枚。     

奶牛性别控制胚胎移植试验

试验的目的是研究分选X型冻精与常规冻精品质的比较,结果显示:分选X精子的精液密度、活率、存活指数等各方面指标均明显低于常规冻精(P<0.05);使用4支分选X型冻精进行体内受精胚胎生产,结果对排卵数小于17枚的供体母牛进行体内受精胚胎生产效果良好,大于17枚则部分未受精;分选X型冻精奶牛鲜胚双胚移植与分选X型冻精奶牛鲜胚单胚移植进行比较,结果性控奶牛鲜胚双胚移植与单胚移植产犊率差异不大,双胚移植经济效益较高;分选X型冻精与常规冻精所产母犊比较,结果性控胚胎移植所产犊牛初生和60日龄各项指标与常规冻精所产犊牛差异不显著(P>0.05)。     

利用杂交牛进行胚胎移植及其效益分析

2004年12月到2005年3月,在广西贺州西牛牧业公司牛场选择10头次西门塔尔牛做超数排卵处理,超排成功率90%(9/10),共获得胚胎(包括未受精卵)102枚,可用胚胎64枚;可用胚胎平均7.1枚/头。利用从山东购进的杂交牛240头作受体进行西门塔尔牛和荷斯坦牛的胚胎移植,结果西门塔尔牛鲜胚移植受胎率平均55%,冻胚移植受胎率平均45.8%;荷斯坦牛冷冻胚胎移植受胎率为41.5%。目前已经产犊134头,其中母犊68头,公犊66头。对其经济效益进行分析,效益较佳。     

纯种和牛快速扩繁关键技术研究

为达到快速扩繁纯种和牛的目的,试验从供体牛高强度超数排卵、胚胎性别鉴定及不同品种受体牛移植对产犊、妊娠期和犊牛初生重的影响进行研究。结果表明,纯种和牛连续超排9次,每次间隔30 d,第2次头均回收胚数22.78枚,显著高于第5~9次结果（P< 0.05）,其余各组之间无显著差异（P> 0.05）;第1~3次头均可用胚数分别为8.67、13.78、8.56枚,组间无显著差异（P> 0.05）,第2次头均可用胚数显著高于第4~9次头均可用胚数（P< 0.05）,极显著高于第7、9次头均可用胚数（P< 0.01）。性别鉴定胚胎和常规胚胎移植妊娠率和产犊率差异均不显著（P> 0.05）,性别鉴定胚胎的母犊率为95.56%。西门塔尔杂交牛受体产犊率高于和牛杂交牛、荷斯坦奶牛受体,但差异不显著（P> 0.05）。和牛杂交牛受体妊娠期极显著高于西门塔尔杂交牛和荷斯坦奶牛受体（P< 0.01）,西门塔尔杂交牛和荷斯坦奶牛之间差异不显著（P> 0.05）;西门塔尔杂交牛受体所产和牛母犊初生重显著高于和牛杂交牛受体（P< 0.05）,极显著高于荷斯坦奶牛受体（P< 0.01）,3个品种受体牛产和牛公犊初生重之间差异不显著（P> 0.05）;同一品种受体牛其产公、母犊牛的妊娠期及初生重均相近。