苹果树腐烂病综合防治试验

通过三种不同防治措施的落实,总结出了苹果树腐烂病的一套综合防治技术,有很强的生产指导性.     

3％甲基硫菌灵糊剂防治苹果树腐烂病田间药效试验

田间试验结果表明,在春季腐烂病发病初盛期用3％甲基硫茵灵糊剂125g／m^2对苹果树腐烂病有较好的防治效果,用量经济,愈合效果好,对作物安全。     

几种杀菌剂防治苹果树腐烂病药效对比试验

该研究通过开展20%丁香菌酯悬浮剂、43%戊唑醇悬浮剂、1.8%辛菌胺醋酸盐水剂、1.6%噻霉酮水剂4种杀菌剂防治苹果腐烂病的田间效果对比试验,结果表明:4种杀菌剂对苹果腐烂病均有一定的防治效果,可作为苹果腐烂绿色防控推广应用药剂;6月底至7月初苹果春梢停止生长期是苹果腐烂病防治的一个关键时期,通过药剂涂抹主干和大枝,可有效防治苹果腐烂病。     

苹果树腐烂病无公害防治技术研究

就菊科、藜科、豆科、蔷薇科、卫矛科、唇形科、芸香科和萝摩科的 10种不同植物组织的水、乙醇和石油醚浸出物对苹果腐烂病原的抑制作用进行了研究 ,并比较了以中草药为原料制成的膏状制剂对苹果腐烂病的防治效果。结果表明 ,茵陈、地肤子、苦参、鸡血藤、雷公藤和地榆、杠柳、黄芩可作为防治苹果腐烂病的杀菌性植物资源。用上述植物组织制成的膏剂防治苹果腐烂病的有效率、病情复发率和愈伤组织形成宽度等优于传统药剂。使用中草药进行果树腐烂病的防治 ,是一种有益于生态环境的技术体系。     

辽宁地区苹果树腐烂病的防治方法

防治腐烂病的重要措施是保护剪锯口和伤口,同时对苹果幼树和老树采取新型修剪模式,能够有效抑制病菌的侵染.     

大戟狼毒石油醚提取物对苹果树腐烂病抑菌活性初步研究

探索大戟狼毒的杀菌活性及活性成分,为新型植物源杀菌剂的研制和开发提供依据,以苹果树腐烂病原菌为供试菌种,用生长速率法测定了大戟狼毒石油醚提取物的对病原菌的抑制率。结果表明:大戟狼毒石油醚提取物对苹果树腐烂病菌病原菌丝生长有一定的抑制作用。其中提取物为2 g.L-1的稀释液对苹果树腐烂病菌病原菌丝生长的抑制作用最好,抑制率最高达到94.0%。大戟狼毒提取物对苹果腐烂病菌具有很好的防治效果,极具有开发潜力。     

0.5%苦参碱水剂对苹果树腐烂病菌的室内毒力测定和田间药效试验

用0.5%苦参碱水剂,40%福美砷WP,2.12%腐植酸铜水剂3种杀菌剂对苹果树腐烂病病菌进行了室内毒力测定和田间药效试验。结果表明,0.5%苦参碱水剂对苹果树腐烂病病菌的抑制作用效果优于福美砷,与2.12%腐植酸铜水剂抑制作用相当,有效中量Ec50为9.97 mg/kg,0.5%苦参碱水剂的毒力效果是40%福美砷WP的1.15倍;0.5%苦参碱水剂涂治后的伤口愈合率为50.18%,明显优于40%福美砷WP的伤口愈合率(37.78%),其相对防效达到83.54%。     

苹果腐烂病菌原生质体制备与再生条件优化

大量高质量且能再生的原生质体是真菌遗传转化、基因修饰的重要保证。本试验选用苹果腐烂病菌强致病力菌株SDAU11-175,从酶种类、菌丝年龄、酶解时间、渗透压稳定剂及再生培养基五个方面对原生质体制备及再生条件进行了优化。结果显示:获得苹果腐烂病菌原生质体最大产量的条件是菌丝年龄54 h、3%崩溃酶和3%裂解酶组合、0.7 mol/L NaCl作为渗透压稳定剂、28℃酶解3 h,所得原生质体在YPS培养基上再生效果最好,再生率可达42.21%。     

10种生物源杀菌剂对苹果树腐烂病菌的室内活性评价

为筛选出对苹果树腐烂病防治高效的生物源杀菌剂,采用菌丝生长速率法、分生孢子萌发法和离体枝条接种法,测定了10种生物源杀菌剂对苹果树腐烂病菌(Valsa mali)菌丝生长和分生孢子萌发的抑制效果及其在苹果离体枝条上的保护作用。结果表明,10种供试生物源药剂对腐烂病菌均有一定的抑制效果,除3%中生菌素WP外,其他9种药剂对分生孢子萌发的抑制效果均优于对菌丝生长的抑制效果。其中,300亿·g^-1解淀粉芽孢杆菌WP、1 000亿·g^-1枯草芽孢杆菌WP和复合微生物菌剂3种药剂的室内毒力最强,对菌丝生长和分生孢子萌发的EC₅₀分别为0.69、0.89、1.88、0.19、0.039μg·mL^-1和0.064μg·mL^-1。其次为0.5%氨基寡糖素AS、3%中生菌素WP、5%香芹酚AS、0.5%小檗碱AS和0.4%蛇床子素SL 5种药剂,对菌丝生长的EC₅₀为26.06～290.7μg·mL^-1,分生孢子萌发的EC₅₀为8.29～136.0μg·mL^-1。而0.3%苦参碱EC和2%农抗120AS对菌丝生长的EC₅₀均>2 000μg·mL^-1,显著>其他几种药剂,室内毒力最差。离体枝条保护试验结果表明,300亿·g^-1解淀粉芽孢杆菌WP、1 000亿·g^-1枯草芽孢杆菌WP、0.5%氨基寡糖素AS和复合微生物菌剂对离体枝条保护作用最强,其室内防效均>85%,而0.3%苦参碱EC和2%农抗120AS保护作用最差,其室内防效与其他药剂之间存在显著差异,这与室内毒力测定结果相一致。综上所述,300亿·g^-1解淀粉芽孢杆菌WP、1 000亿·g^-1枯草芽孢杆菌WP、复合微生物菌剂和0.5%氨基寡糖素AS 4种药剂可作为防治苹果树腐烂病的替代生物源杀菌剂。     

天山野苹果林苹果小吉丁与苹果腐烂病复合危害研究

[目的]研究野苹果林受害与苹果小吉丁及苹果腐烂病复合危害关系,为科学防控提供理论基础.[方法]以苹果小吉丁危害级别代表值(X1)和苹果腐烂病危害级代表值(X2)分别作为自变量,以野苹果受害等级代表值(Y)作为因变量,应用SPSS19.0软件,进行回归分析.[结果]苹果小吉丁危害等级代表值和苹果腐烂病危害等级代表值与野苹果受害等级代表值间有明显相关关系,这种关系可用多元回归方程表示为y=0.973+0.398X1+0.329X2.[结论]野苹果林同时遭受苹果小吉丁与苹果腐烂病危害时,在制定野苹果林有害生物防控技术措施上,应将苹果小吉丁与苹果腐烂病均作为防治对象.     

苹果树腐烂病菌T-DNA插入突变体的筛选及Vmzfp3基因的功能分析

本研究采用接种离体枝条的方法,对150个苹果树腐烂病菌的T-DNA插入突变体库中的突变体进行了致病性的筛选,经过多次试验得到了3个致病力明显减弱的突变体,编号为X4379,X4368,X4468。基因组重测序结果显示,突变体X4379有2个T-DNA插入位点,分别是锌指蛋白3(Vmzfp3)和跨膜蛋白42(Vmtme42)。以苹果树腐烂病菌的全基因组序列为依托,设计引物,构建敲除载体以及互补表达载体。运用PEG的方法转化苹果树腐烂病菌,分别获得Vmzfp3和Vmtme42的敲除转化子和互补转化子。对Vmzfp3和Vmtme42基因敲除转化子、互补转化子以及野生型苹果树腐烂病菌菌丝形态和致病力进行分析。与野生型菌株03-8相比,Vmzfp3的敲除转化子的菌丝生长速率明显减慢,致病力也明显下降,其互补转化子使得这些功能缺陷均得以恢复。Vmtme42的敲除转化子无明显区别。由此证明基因Vmzfp3对病菌的菌丝生长,病菌的致病力具有调控作用。     

苹果黑腐皮壳菌CAP超家族蛋白基因鉴定及毒性功能分析

[目的]CAP(Cysteine-rich secretory protein,Antigen 5 and Pathogenesis related protein 1)超家族蛋白广泛存在于真菌、细菌、动植物等物种,并且参与病原菌的致病过程.本研究旨在鉴定苹果树腐烂病致病菌——苹果黑腐皮壳菌(Valsa mali)的C...     

2株不同地理来源的苹果树腐烂病菌对甾醇生物合成抑制剂类杀菌剂的交互抗药性及生物适合度分析

测定2株不同地理来源的苹果树腐烂病菌对甾醇生物合成抑制剂（SBIs）类杀菌剂的交互抗药性及生物适合度,为SBIs类杀菌剂在苹果树腐烂病的防控上提供理论依据。采用菌丝生长速率法分别测定2株不同地理来源的苹果树腐烂病菌对3种甾醇生物合成抑制剂类杀菌剂和1种苯并咪唑类杀菌剂的交互抗药性,通过繁殖体数量测定法、生物量测定法、离体枝条接种法测定其生物适合度。结果表明,2株病菌（VM09和VM01）对SBIs类杀菌剂苯醚甲环唑、戊唑醇、抑霉唑的敏感性存在显著差异,苯醚甲环唑、戊唑醇、抑霉唑对VM09的EC₅₀值分别是VM01的10.49、9.03、79.09倍,表明腐烂病菌对检测药剂存在正交互抗药性;而对苯并咪唑类杀菌剂甲基硫菌灵无显著差异,不存在交互抗性。对2株病菌的生物适合度分析发现,其生长速率、繁殖体数量、菌丝干重以及对NaCl的渗透敏感性均存在显著差异,但致病力无显著差异。苹果树腐烂病菌菌株VM09对SBIs类杀菌剂存在正交互抗药性,且对SBIs类杀菌剂敏感性降低的菌株的生物适合度发生了明显变化,在一定程度上增加了其适生性。     

苹果树腐烂病菌GTP-环化水解酶II基因敲除载体构建及其突变体的表型分析

【目的】利用反向遗传学方法构建苹果树腐烂病菌（Valsa mali）中表达GTP-环化水解酶II基因Vmgtp1的敲除载体,通过同源重组的方法进行基因敲除分析目标基因的功能,为全面解析苹果树腐烂病菌致病的分子机制奠定基础,并为有效控制苹果树腐烂病的方法技术和药剂研制提供理论依据。【方法】通过对笔者实验室苹果树腐烂病菌转录组数据的分析比对得到GTP-环化水解酶II基因Vmgtp1（暂命名）,该基因在接种5 d后,在病组织中表现出一定的上调表达,推测该基因可能与苹果树腐烂病菌致病相关。采用Double-joint PCR方法,将目标基因Vmgtp1的上游片段UP、下游片段DOWN及筛选标记潮霉素磷酸转移酶基因（hph）进行片段融合。对得到的PCR产物及质粒pHIG2RHPH2-GFP-GUS进行双酶切,通过T4连接酶,将片段UP-HPH-DOWN连接到质粒pHIG2RHPH2-GFP-GUS上,转化到JM109菌株中,挑取阳性克隆,提取质粒,得到含有hph的Vmgtp1敲除载体,再利用PEG介导的遗传转化获得抗潮霉素的突变体,然后用4对引物对突变体进行PCR检测及Southern Blot验证得到敲除突变体,最后对敲除突变体及野生型菌株03-8进行菌落颜色、菌落大小、繁殖体产生情况等表型分析和接种在离体苹果烫伤枝条上观察病斑大小的致病性检测,对检测数据用SPSS软件进行差异显著性分析。【结果】通过上述方法成功构建了表达GTP-环化水解酶II基因的Vmgtp1敲除载体,并利用PEG介导的遗传转化方法在苹果树腐烂病菌中进行了转化,共获得101个能够在含潮霉素PDA培养基上生长的突变菌株,经过PCR及Southern Blot对101个突变菌株进行分析验证,得到1个敲除突变体,编号为ΔVmgtp1-90。在PDA培养基上,敲除突变体ΔVmgtp1-90与野生型菌株03-8相比,ΔVmgtp1-90菌落平均生长速率为11.33 mm?d-1,03-8平均生长速率为24.67 mm?d-1,突变体菌落生长速率明显变慢,颜色变浅,气生菌丝稀疏;ΔVmgtp1-90光照培养40 d仍无繁殖体的产生,而03-8光照条件下培养15 d后就能产生繁殖体,30 d后有分生孢子从繁殖体上溢出。致病性检测试验发现,接种ΔVmgtp1-90菌株7 d后,富士苹果枝条上病斑的平均直径为9.3 mm,与之相比,接种03-8的苹果枝条病斑平均直径为24.8 mm,ΔVmgtp1-90致病性显著减弱。【结论】通过基因敲除和遗传转化获得苹果树腐烂病菌中表达GTP环化水解酶II Vmgtp1的敲除突变体ΔVmgtp1-90,比较Vmgtp1突变体与野生型菌株的表型及致病性差异,发现Vmgtp1可能参与调控苹果树腐烂病菌菌丝生长和繁殖体的产生过程,并且可能在苹果树腐烂病菌致病过程中起作用,但是是否起主要作用还有待进一步研究。