小麦杂种优势群研究III普通小麦和斯卑尔脱小麦微卫星分子标记遗传差异的研究

选用１５份我国不同生态区的普通小麦品种（系）及９份不同国家的斯尔脱小麦品种（系）,利用微卫星分子标记对小麦种间,品种（系）间遗传差异进行了研究,探讨扩大杂交小麦育种亲本遗传基础的途径。所利用的１８对微卫星引物的２４份材料中均有搁增产物,共扩增出分子量小于５００ｂｐ的条带４９５条,其中４６８条带（占９６．７８％）具有多态性,平均每个引物可拉增出２６．６条多态性带。研究发现,９份斯卑尔脱小麦微卫星多态     

小麦杂种优势群研究：I.利用RAPD标记研究小麦品种间遗传差异

选用我国的３８个冬小麦品种（系）和２个加拿大春小麦品种（系），利用ＲＡＰＤ标记进行小麦基因型之间分子标记遗传差异研究，探讨分子标记在建立小麦杂种优势种中的应用。利用５９个随机引物对４０个小麦基因型ＰＣＲ扩增结果表明，其中２９个引物（占４９％）扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分离表现多态性，这２９个引物共扩增出１６８条带，其中７８条带（占４６．６％）具有多态性，每个引物可扩增１￣６条多态性带，平均２．７条带     

粘类小麦雄性不育系线粒体DNA的AFLP标记及SCAR转化

为了能在分子水平上有效鉴定具有粘果山羊草(Aegilops kotschyi)、偏凸山羊草(A.ventricosa)、普通小麦变种斯卑尔脱(Triticum spelta)细胞质雄性不育系及其保持系90-110和8222,提高其在杂交小麦(Triticum aestivum L.)研究与应用中的定向遗传改良,本研究对其线粒体DNA进行了扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphism,AFLP)标记和序列特征性片段扩增区域(sequence characterized amplified region,SCAR)标记。通过AFLP标记方法,应用64对引物组合EcoRⅠ-NNN/MseⅠ-NNN对小麦同核异质雄性不育系和保持系进行扩增,共扩增出682条带,其中113条为多态性条带。引物E-AGG/M-CTA组合在粘果山羊草细胞质雄性不育系中扩增出一条大小约300 bp的特异性条带,对该特异条带进行回收、测序,利用Primer Premier 5.0软件重新设计SCAR引物,并对这3种类型同核异质小麦细胞质雄性不育系和保持系进行扩增,其中引物YW1在3种细胞质雄性不育系和保持系中都扩增出条带,而引物YW2仅在粘果山羊草细胞质雄性不育系扩增出一条198 bp的特异性片段,结果表明,已成功地将AFLP标记转化为操作简便、表现稳定的SCAR标记。此片段与小麦线粒体基因组有很高的同源性(同源性为99%),为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶基因(GenBank登录号:EU534409.1)上的序列,该酶是线粒体中氧化磷酸化的入口酶,与小麦细胞质雄性不育密切相关。本研究可以用于粘类小麦细胞质雄性不育系分子标记辅助育种,也为小麦细胞质种性鉴定提供了技术支撑和理论依据。     

水稻农垦58与农垦58s的RAPD和ISSR分析

以光敏核不育水稻农垦５８ｓ及其原始株农垦５８核ＤＮＡ为模板,进行了ＲＡＰＤ和ＩＳＳＲ多态性分析,结果表明：在可扩增的１５４个ＲＡＰＤ引物和７８个ＩＳＳＲ引物中,８个ＲＡＰＤ引物和７个ＩＳＳＲ引物的扩增产物表现出ＤＮＡ多态性,ＲＡＰＤ－ＰＣＲ产物的多态性标记分别出现在农垦５８ｓ,农垦５８或二者同时出现,而ＩＳＳＲ－ＰＣＲ扩增产物的多态性标记只出现在农垦５８或农垦５８ｓ中。获得多态性ＲＡＰＤ标记及ＩＳ     

烟草品种RAPD分子标记遗传差异研究

用２３５个随机引物对来源于中国,美国等国家的２３个烤烟和地方晒晾烟品种基因组ＤＮＡ进行了ＲＡＰＤ分析。结果表明：２５个引物可以扩增出多态性产物;利用其中１６个引物共扩增出１２８条带,其中４６条品种间表现多态性,这种多态性可以进行品种鉴定;根据多态性的带计算了品种间遗传距离,按类平均法可将２３个品种划分６类,各类内含不 地理来源和不同调制类型的品种,说明品种地理来源和调制类型差异与遗传差异没有必然的     

斯卑尔脱小麦高分子量谷蛋白亚基组成分析

采用十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）方法，鉴定分析了80份斯卑尔脱小麦（Triticum spelta L.)高分子量谷蛋白亚基（HMW－GS）组成特点，3个位点上一共检测到13种不同的亚基类型，其中在Glu-Al和Glu-Bl位点上，以1和6＋8亚基出现频率最高，分别高达93．75％和78．75％，与普通小麦（T.aestivum L.)相比，斯卑尔脱小麦高分子量谷蛋白亚基具有其明显的组成特点。在Glu-Dl位点上，斯卑尔脱小麦以2＋12亚基出现频率最高（87．5％），5＋10亚基次之（11．25％）。表明2＋12亚基和5＋10亚基为其主要变异类型，这与普通小麦的研究结果相似，但远低于粗山羊草（Aegilops squarrosa L.)1D染色体上的高分子量谷蛋白亚基变异形式。另外，研究还筛选出9份具有5＋10优质亚基的材料，为提高斯卑尔脱小麦与普通小麦是杂交种的品质杂种优势提供了基础材料。     

小麦RIL群体SSR标记偏分离的遗传分析

以普通小麦3338与斯卑尔脱小麦Altgold杂交得到的F6代重组近交系群体为材料，筛选出334个（271个SSR和63个EST-SSR标记）多态性标记，以此为基础构建了一个包含287个分子标记的遗传图谱。对这些多态性标记进行偏分离分析发现82个表现为偏分离（P＜0.05），其中70个可以定位到遗传连锁图谱中。这些偏分离标记中有33个标记位点偏向母本3338，占40.2%，49个标记位点偏向父本Altgold，占59.8%。这些偏分离标记在图谱上的分布有两种：成簇分布和孤立位点的偏分离。在5条不同染色体上发现6个偏分离热点区域，这些偏分离热点区域的形成可能与配子体选择有关。     

小麦及其部分近缘种属Puroindolines蛋白的分离与检测*

通过对104份普通小麦（Tritium aestivum）及其近缘种属材料puroindolines蛋白（包括PinA和PinB）的初步研究，提出一种改进的Urea-SDS-PAGE凝胶系统用于此蛋白的分离和检测。结果表明，和普通的SDS-PAGE相比，可以清晰地分开PinA和PinB，分辨率较高，检测效果较好。改进的凝胶系统也可用于其它蛋白，特别是小分子量且等电点和分子量相近蛋白组分的分离和检测。在所分析的材料中，普通小麦的PinA和PinB蛋白变异较丰富，斯卑尔脱小麦（T.aestivum ssp．spelta）、密穗小麦（T.aestivum ssp．compactum）、西藏半野生小麦（T.aestivum ssp．tibeticum）和山羊草（Aegilops tauschii）中未发现变异；野生二粒小麦（T.turgidum var．dicoccides）、长穗偃麦草（Thinopyrum elongamm）未检测出puroindolines蛋白。     

小麦叶锈菌毒性及分子多态性分析

以来自河北、江苏两地的22株小麦叶锈菌作供试菌株，用27个小麦抗叶锈近等基因系品系作为鉴别寄主进行毒性测定。毒性多态性分析结果为：22个菌株通过聚类被分为两组，第一组17个菌株主醚自河北，第二组5个菌株全部来自江苏，表明毒性与地理来源密切相关；菌株间遗传相似系数较高并且差异不大，为0.6296-0.9259之间，说明两地的小麦叶锈菌所含的毒性基因差异不大，应用RAPD技术，从65个随机引物中筛选了12个扩增多态性较好的随机引物，用于分子多态性分析，共扩增出DNA条带102条，其中多态性条带54条，RAPD分析结果为：22个菌株被分为两组，第一组菌株主要来自河北，第二组菌株主要来自江苏，说明DNA多态性与地理来源间具有一定的相关性；菌系间遗传相似系数相差较大，为0.3889-0.9074之间，说明两地小麦叶锈菌群体遗传结构丰富而复杂，比较22株小麦叶锈菌在27个鉴别品系上的毒性特征和54个RAPD标记建立的聚类分析树状图，发现以RAPD标记为基础的分子多态性与毒性多态性相关性不强。     

22个甘薯品种（系）遗传背景的RAPD图谱分析

通过１０个随机引物的ＤＮＡ扩增，首次报道了２２个甘薯品种的ＲＡＰＤ多态性，不同品种具有不同的ＤＮＡ扩增带型，反映了不同品种遗传背景上的差异，计算了２２个甘薯品种的Ｎｅｉ‘ｓ相似系数与遗传距离，建立了它们的ＵＰＧＭＡ系统树，并通过聚类分析与对应分析，讨论了２２个甘薯品种间的亲缘关系，ＲＡＰＤ多态性分析从分子水平上反映了甘薯品种复杂的遗传背景，并为育种的亲本选配提供了依据。     

利用RAPD技术检测转绿型白化突变系W25基因组的变化

转绿型白化突变系Ｗ２５系γ射线辐照籼型温敏核不育水稻２１７７ｓ获得的一个叶色突变体。在整个生育阶段，其叶色呈现白色－转绿－返白－复绿规律变化。ＲＡＰＤ分析结果表明，７０个随机引物中有３个引物不能扩增出多态性ＤＮＡ，共扩增出４９３条ＤＮＡ条带，平均每个引物７．４条，其中引物Ｈ０５能扩增出Ｗ２５和２１７７ｓ多态性产物，２１７７ｓ表现出缺失２条特异性ＤＮＡ条带。     

普通小麦与无融合生殖披碱草属间杂种F1的产生及其分子鉴定

本研究以普遍小麦品种Ｆｕｋｕｈｏｋｏｍｕｇｉ为母本，以无融合生殖披碱草Ａ．Ｌｏｖｅ ｅｔ Ｃｏｎｎｏｒ；２ｎ＝６ｘ＝４２）品系１０５０为父本进行杂交，利用胚拯救技术，对杂种幼胚进行愈伤组织诱导、植株再生、获得了生长正常的属间杂种Ｆ１。对所获杂种在幼苗期用ＲＡＰＤ标记进行鉴定，结果表明，有２１个引物的扩增产物Ｆ１呈现共显性，占扩增引物总数的２０．５９％，有６１个引物的扩增产物Ｆ１偏向父本，占扩增引和     

利用小麦SSR标记分析鸭茅种质资源的遗传多样性

使用小麦(Triticum aestivum)SSR引物和扩增程序,以中国春小麦(T. aestivum)品种为对照,利用SSR标记对来自国内外的45份鸭茅(Dactylis glomerata L.)种质资源进行遗传多样性研究.结果表明,20对引物扩增出295个条带,多态性条带为187条,多态性条带比率为61.15%,鸭茅种质资源的遗传相似系数范围为0.7848～0.9513.聚类分析和主成分分析将供试材料分为6大类,聚类结果不仅能反映鸭茅生态适应性特征与其生长发育状况及生产性能相关,还显示出国产鸭茅品种遗传基础较为狭窄.研究表明将小麦SSR引物用于检测鸭茅遗传多样性行之有效.     

应用RAMP标记研究黑麦属遗传多样性*

对黑麦属(Secale L．)10个野生居群和11个栽培居群共21份材料进行了RAMP(random amplified microsatellite polymorphism)标记分析，结果表明，被测材料间RAMP标记多态性较高。80个：RAMP引物中，有41个引物(占50．5％)可扩增出清晰且具多态性的条带。这41个引物共扩增出445条带，其中428条(占95．9％)具有多态性，每个引物可扩增出3—19条多态性带，平均10．4条。RAMP标记遗传相似性系数(GS)变异范围为0．266-0．658，平均值为0．449。RAMP标记可将所有21份黑麦材料完全区分开，聚类结果与材料的地理分布有一定关系，但与黑麦属传统的系统分类体系存在明显差异。据此认为，RAMP标记可以有效地评价黑麦属植物的遗传多样性，并为其物种亲缘关系的界定提供信息。     

马铃薯遗传资源多样性的SRAP分析

采用SRAP分子标记，对44份马铃薯品种的遗传多样性进行了分析。结果显示, 随机抽取27对SRAP引物，对基因组DNA进行特异扩增，其中23对引物扩增出多态性条带，共获得104个多态性条带, 多态性引物比率达85.2%, 平均每对引物产生4.5个多态性条带，表明SRAP标记具有较高的多态性比率。44份种质资源的SRAP标记遗传距离为0.147-0.741。当遗传距离D=0.67时，将44份种质资源分为四大类群，包括一个复合类群和三个独立类群。其中复合类群可进一步分为7个亚群。从而在DNA水平上证明了所研究马铃薯种质资源具有丰富的遗传多样性。     

来自斯卑尔脱小麦新的抗条锈病基因YrSp的分子标记定位

摘要： 利用SSR分子标记技术，鉴定抗源来自斯卑尔脱小麦(Triticum spelta L.)的杂交组合分离群体温6/cp90.0.2.4.1(169/T.sp.al //宝丰7228)所携带抗条锈病(Puccinia striiformis Westend f. sp. tritric )基因是否为新基因，并对其进行染色体定位研究。经过对150对微卫星引物的筛选，发现位于3A染色体长臂上的Xgwm155引物所扩主带Xgwm155-147bp 与该基因表现连锁，连锁距离为40.5 cM，说明其位于3A染色体上。由于来自斯卑尔脱小麦的已知抗条锈病基因Yr5位于2B染色体长臂上，研究定位的位于3A染色体上的抗条锈病基因不同于Yr5，暂定名为YrSp。     

南瓜属三个种的亲缘关系与品种的分子鉴定研究

用随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术,对南瓜属三个主要栽培种即美洲南瓜、中国南瓜（Ｃ。ｍｏｓｃｈａｔａＤ．）和印度南瓜（Ｃ．ｍａｘｉｍａＤ．）的２３个品种（系）及种间杂交后代进行亲缘关系与品种（系）的分子鉴定研究。从２００个随机引物（１０ｂｐ）筛选出１７个引物,对２３个南瓜品种（系）的染色体组ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增,共产生８０条扩增带,其中７７条在南瓜属三个种间表现出差异,可作为遗传标记（ＲＡＰＤ标     

小麦M染色体组的RELP标记

利用２９个小麦ＲＦＬＰ探针与６种限制性酶切的Ｍ染色体组ＤＮＡ进行分子杂交，获得了５５个Ｍ染色体组的ＲＦＬＰ标记，其中１５个与小麦ＡＢＤ染色体组相同，４０个染Ｍ染色体组的特殊标记，在顶荒山羊草和小麦－顶芒山羊草双二倍体以及小麦顶芒山羊草异代换系中稳定遗传     

水稻三系及其杂种的RAPD指纹图谱分析

从三套三系及它们的杂种共１０个水稻材料无菌苗叶片提取ＤＮＡ，用随机的ＤＮＡ引物分别做ＰＣＲ扩增（ＲＡＰＤ）。扩增产物在琼脂糖胶上电泳产生可重复的指纹图谱。４７％的引物产生的图谱可以把不育系和恢复系区别开来，它们各自的特异带可以作为品种鉴定的分子标记，同时这种标记能够用来检测亲本系间的遗传距离，从而为强优势组合的亲本选配提供分子水平的依据。     

小麦AB基因组中一个重复序列的分离、定位与应用

利用102对微卫星引物对5份黑麦（Secale）、4份普通小麦（Triticum aestivum）和1份分枝小黑麦（Triticale）进行SSR分析,引物Xgwm614能在分枝小黑麦中扩增出一个387bp的特异DNA片段（记为FZ387,GenBank登录号为EF179137）,而黑麦未能扩增出。序列比对结果显示该片段与一粒小麦（T. monococcum）（AY485644）和栽培二粒小麦（T. turgidum）（AY494981）A基因组中Gypsy Ty3-LTR反转座子fatima的一部分分别有94%和95%同源性。根据序列同源性比对结果,在FZ387内部设计1对特异引物FaF和FaR。引物Xgwm614F和FaR能在含有A基因组的物种中扩增出约350bp的条带（记为A350）,而其不含A基因组的物种都未扩增出该条带。利用小麦二体和端体代换系材料对其进行定位,结果显示该片段分布在所有A染色体的长臂和断臂上。此外,引物FaF和Xgwm614R能在含有A、B或AB基因组的物种中扩增出约350bp的条带（记为AB350）,而不含AB基因组的材料未扩增出目标条带。利用这两对特异引物对小麦属近缘物种进行PCR扩增,发现只有中国春能够扩增出A350和AB350。序列比对结果和FZ387两侧SSR引物结合区的规律性变化表明该反转座子在进化上可能存在属间多样性和属内相似性。A350和AB350也可以分别作为分子标记检测A染色体和AB染色体。