江苏玉米粗缩病病原病毒的RT—PCR检测

玉米粗缩病毒和水稻黑条矮缩病毒均可由灰飞虱传播并侵染玉米使其发生粗缩病。两种病毒相似之处较多,常规方法很难区分。本研究根据以往已发表的这两种病毒的核酸序列,分别合成了两病毒的特异引物,利用一步法反转录－聚合酶链式反应（ＴＲ－ＰＣＲ）建立了玉米粗缩病病原病毒的快速检测和诊断的方法。对江苏省盐城地区田间自然感病玉米的ＲＴ－ＰＣＲ检测结果和扩增片段序列分析表明：在该地区玉米粗缩病病样中只检测到水稻黑条矮     

应用RT-PCR及RFLP技术对鸡传染性支气管炎病毒进行诊断与分型的研究进展

本文概述了近年来国内外应用ＲＴ－ＰＣＲ及ＲＦＬＰ技术对对外开放传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）进行诊断与分型的研究进展。介绍以ＩＢＶ通用引物的ＲＴ－ＰＣＲ进行诊断及其应用、型特异引物的ＲＴ－ＰＣＲ及其应用以及ＲＴ－ＰＣＲ结合ＲＦＬＰ分析技术进行分型的应用,而且还展望了这上结技术在临床诊断及分子流行病学研究上的应用前景。     

建兰花叶病毒外壳蛋白基因序列分析及病毒检测

以建兰花叶病毒海南分离物ＲＮＡ为模板,通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增其外壳蛋白基因,克隆并测序。测出此基因大小为６６６ｎｔ,核苷酸顺序与文献报负源性为８８．８％～９６．１％,推算同的氨基酸同源性为７５．６％～９１．０％,餐过同蛋白亚基氨基酸顺序差异主要在近Ｃ－端部分。另外,利用反转录－ＰＣＲ法检测香草兰上的建兰花叶病毒。     

传染性支气管炎病毒S1纤突糖蛋白基因的克隆及部分序列分析

大纤突Ｓ糖蛋白是传染性支气管炎病毒重要的免疫相关性蛋白之一，参考已发表的ＩＢＶ－Ｂｅａｕｄｅｔｔｅ株Ｓ１基因ＤＮＡ序列，合成一对特异性引物，以ＩＢＶ－ＲＮＡ为模板，应用ＲＴ－ＰＣＲ方法，获得传染性支气管炎病毒上海分离株Ｓ２Ｔ２－Ｓ１纤突糖蛋白基因，长度１．６５ｋｂ，利用引物设计中的ＢａｍＨ和ＨｉｎｄⅢ位点将其克隆到载体ｐＳＩ（＋）中。对该基因进行限制性酶发分析，结果与已报道的相一致。     

黄瓜花叶病毒赤豆分离物外壳蛋白基因序列分析及原核表达

根据已报道的黄瓜共上壳蛋白基因序列合成引物,经ＲＴ－ＰＣＲ扩增并克隆了我国黄瓜花叶病毒赤豆分离物的外壳蛋白基因,序列分析表明,外壳蛋白基因全长６５７个核苷酸,编码２１８个氨基酸,其核苷酸序列与黄瓜花叶病毒亚组１的分离物有极高的同源性。     

染色体显微切割两种体外扩增方法的比较

以处一数分裂中期１的水稻三体花粉母细胞为材料,对额外染色体进行了显微分离,通过两种体外扩增方法,即接头引物ＰＣＲＩｌｉｎｋｅｒ－ａｄａｐｔｏｒ－ＰＣＲ,ＬＡ－ＰＣＲ）和简并寡聚核苷酸引物ＰＣＲ（ｄｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ－ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ－ｐｒｉｍｅｄ－ＰＣＲ,ＤＯＰ－ＰＣＲ）,研究了这两种ＰＣＲ方法在本研究所采用的微分离染色体体外扩增中的优缺点,认为两种方法都可以有效地体外扩增,但扩增     

鸡传染性法氏囊病毒Ts,OH毒株,鱼传染性胰脏坏死病毒DRT …

用幼鸡成纤维细胞繁殖鸡传染性法氏囊病病毒（ＴＢＤＶ）Ｔｓ毒株,病毒颗粒经提纯后提取基因组ｄｓＲＮＡ。根据已报道的加拿大ＯＨ株序列设计引物,用ＲＴ－ＰＣＲ进行ｃＤＮＡ扩增,获得９７６ｂｐ、７７４ｂｐ和９９７ｂｐ的三个部分重叠的片段,分别克隆于ｐＧＥＭ－Ｔｅａｓｙ载体,利用ＳＰ６,Ｔ７ 异引物及ＰＣＲ引物进行序列分析,并连接为一个寒带的大片段,结果表明,所克隆片段为２６６５ｂｐ的ＩＢＤＶＶＰ、基因的大     

猪繁殖与呼吸综合症病毒分离毒株基因型的鉴定

根据猪繁殖与呼吸综合症病毒美洲型参考毒株ＡＴＣＣ ＶＲ－２３３２株ＯＲＦ７及部分３‘端非编码区基因序列,设计合成了一对美洲型毒株特异性引物,采用反转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术成功地从６株ＰＲＲＳＶ国内分离株ＢＪ１－６株中扩增出与预期大小相同的基因片段,大小约５７１ｂｐ,与美洲型参考毒株ＡＴＣＣ ＶＲ－２３３２株扩增产物大小相似,扩增产物经限制性内切酶ｐｖｕⅡ酶切作ＲＦＬＰ分析证实ＲＴ－     

应用PCR-RFLP及PCR-SSCP技术研究我国水稻条纹病毒RNA4基因间隔区的变异

应用反转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）及限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）和单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析技术,快速检测我国水稻条纹病毒（Ｒｉｃｅ ｓｔｒｉｐｅ ｖｉｒｕｓ,ＲＳＶ）ＲＮＡ４基因间隔区（ｉｎｔｅｒｇｅｎｉｃ ｒｅｇｉｏｎ,ＩＲ）的变异。ＩＲ经ＲＴ－ＰＣＲ扩增后得到一段长约６８０ｂｐ的片段,ＲＳＶ７个分离物之间片段大小相同,应用ＡＩｕＩ、ＮｄｅＩ在它们之间检测到ＲＦＬＰ,其中ＢＳ、     

传染性法氏囊病病毒VP2基因的克隆及其重组鸡痘病毒转移载…

根据已发表的ＩＢＤＶ基因组序列设计并合成一对特异扩增ＩＢＤＶ ＶＰ２ｃＤＮＡ的引物，以纯化的ＩＢＤＶ－Ｄ７８弱毒疫苗株基因组为模板，利用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增出约１．５ｋｂ产物。将ＰＣＲ产物克隆到ｐＵＣ１９的Ｓｍａｌ位点，经酶切图谱分析等方法鉴定出重组ＶＰ２ｃＤＮＡ质粒（ｐＶＰ２）。将ＶＰ２基因正向插入ＦＰＶ启动子ＬＰ２３Ｐ２下游，连同痘苗病毒启动子Ｐ１１启动的ＬａｃＺ报告基因盒插入ＦＰＶ转移载体中     

PCR技术新应用与水产分子生物学研究

本文简述了ＰＣＲ及其新衍生技术（ＤＤＲＴ－ＰＣＲ,ＡＰ－ＰＣＲ,ＡＦＬＰ－ＰＣＲ,ＩＳ－ＰＣＲ）的原理,特点及其在水产分子生物学研究中的应用展望。     

核酸探针检测人工感染猪及死胎的猪繁殖与呼吸综合症病毒

利用反转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术扩增出猪繁殖与呼吸综合症病毒（ＰＲＲＳＶ）美洲株ＡＴＣＣ ＶＲ－２３３２ＯＲＦ６及部分ＯＲＦ７５８６ｂｐ的ｃＤＮＡ。将ＰＣＲ产物连接进线状克隆载体ｐＧＥＭ－Ｔｅａｓｙ ｖｅｃｔｏｒ后获阳性重组质粒。用ＥｃｏＲＩ及ＳｍａＩ双酶切阳性重组质粒ＤＮＡ,回收４６３ｂｐ的小片段并以此制备出地高辛标记的核酸探针。应用该探针对４头鼻内人工感染ＡＴＣＣＶＲ－２３３２的     

狂犬病病毒3aG株核蛋白基因cDNA的克隆及序列分析

从狂犬病病毒感染的ＢＨＫ细胞裂解上清液中快速提取病毒ＲＮＡ,用反转录－聚合式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法得到编码核蛋白完整结构基因的ｃＤＮＡ,进一步将此基因克隆入ｐＵＣ１８中,进行核苷酸序列分析,并与国外ＰＶ、ＣＶＳ、ＳＡＤＢ１９株以及国内５ａＧ株的Ｎ基因序列进行了同源性比较,证明所克隆Ｎ基因正确。     

我国花生矮化病毒（PSV）株系的血清学和壳蛋白基因序列分析

琼脂双扩散血清试验表明，参试的我国花生矮化病毒６个分离物和株系之间血清学关系十分亲近，而与美国ＰＳＶ－Ｅ和ＰＳＶ－Ｗ株系存在明显的差异。完成对花生致病力不同的ＰＳＶ－Ｍｉ和ＰＳＶ－Ｓ两个株系壳蛋白基因的ＲＴ－ＰＣＲ扩增，克隆和序列分析。     

马铃薯Y病毒HC-Pro基因的克隆、序列分析以及原核表达

本研究以马铃薯Ｙ病毒中国株系（ＰＶＹ－Ｃ） ＲＮＡ为模板,通过ＲＴ－ＰＣＲ克隆了ＰＶＹ－Ｃ ＨＣ－Ｐｒｏ基因,并对其进行了序列分析,测序结果表明ＰＶＹ－ＣＨＣ－Ｐｒｏ基因全长为１３６８ｎｔ,编码一个含４５６个氨基酸的蛋白。它与ＰＶＹ其它株系的同源性高于与马铃薯Ｙ病毒属其它种病毒的同源性,与所报道的ＰＶＹｎ株系的碱基及氨基酸序列同源性均为９６％,推测ＰＶＹ－Ｃ可能是ＰＶＹｎ株系或它的一个近缘株系。Ｓ     

利用PCR法从文库中快速克隆人促红细胞生成素基因

本文介绍一种利用ＰＣＲ技术从基因文库中快速克隆基因组ＤＮＡ的方法。含有１０７个克隆的人基因文库分成１０份，小量提取ＤＮＡ，利用特异性的寡核苷酸引物检测ＥＰＯ基因的存在与否。经过４轮ＰＣＲ筛选，从阳性管中取１０３个噬菌体进行铺板培养，经原位杂交获得含有ＥＰＯ基因的阳性克隆。阳性克隆的插入片段被亚克隆到质粒上。酶切分析及序列分析的结果均证明我们获得ＥＰＯ基因。ＰＣＲ－筛库法可以快速从文库中获得目的基因     

PCR技术在快生型大豆根瘤菌菌株鉴别上的应用

以基因外重复的回文因子（ｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅｅｘｔｒａｇｅｎｉｃｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ，ＲＥＰ）和肠杆菌基因间重复一致序列（ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｌｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅｉｎｔｅｒｇｅｎｉｃｃｏｎｓｅｎｓｕｓ，ＥＲＩＣ）的碱基顺序设计出的引物为引物，用ＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）技术分别扩增了８株快生型大豆根瘤菌（Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）的总ＤＮＡ，得出了具有菌株特异性的扩增产物电泳图谱，称ＲＥＰ－ＥＲＩＣＰＣＲ指纹图谱，将所得图谱进行性状编码后，用计算机数值分类系统进行平均连锁聚类分析，得出这８个菌株的聚类树状图。这一聚类结果与用其它方法聚类结果基本一致，说明ＲＥＰ－ＥＲＩＣＰＣＲ是一种鉴别快生型大豆根瘤菌菌株的经济、快速而又可靠的新方法。     

小麦染色体显微切割和微克隆方法的建立及HMW—GS1Dx5亚基基因克隆

在Ｃ－分带识别普通小麦钢８２－１２２染色体长臂的基础上，通过染色体显微切割和微克隆技术切割１Ｄ染色体，并通过ＰＣＲ扩增得到高分子量麦谷蛋白１Ｄｘ５亚基基因片段，序列分析证明其正确性。这一方法的建立为获得新基因特异性探针打下基础。     

新城疫北京强毒株融合糖蛋白（F）基因的克隆及序列分析

ＮＤＶ北京强毒株Ｆ４８Ｅ９经ＳＰＦ鸡胚增殖,超速离心纯化,异硫氰酸胍法提取病毒ＮＡ后,用ＲＴ－ＰＣＲ扩增,得到其融合糖白基因。将扩增产物与ｐＧＥＭ＾Ｒ－Ｔ载体相连接转化,经过ＡｍｐＩＰＴＧ－Ｘｇａｌ（ＡＩＸ）平板筛选,ＨｉｎｄⅢ酶切及ＰＣＲ鉴定,初步获得了含Ｆ基因的阳性克隆。用渐近法对克隆片段进行全序列分析,证明得到了作长１７４４个核苷酸的ＮＤＶ Ｆ蛋白基因。     

新城疫病毒F48E8株核衣壳蛋白基因在鸡痘病毒中的表达及其？…

通过反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增了新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４８Ｅ８株核衣壳蛋白（ＮＰ）基因,并克隆到ｐＵＣＮＰ。应用分子克隆技术,将ＮＰ基因导入鸡痘病毒（ＦＰＶ）转移载体ｐＦＧ１１７５－１中Ｐ７．５启动子的下游,得到含ＮＤＶ ＮＰ基因的质粒ｐＦＧＮＰ１１７５－１。利用脂质体转染技术,将该质粒转染ＦＰＶ疫苗株２８２Ｅ４感染３－４ｈ的鸡胚成纤维细胞,采用蓝斑筛选方法纯化多次,得到稳定的重组Ｆ