用SSR标记对水稻品种的分类研究

用20对SSR引物对培矮64s、N422s、108s、LS2s等4个不育系和55份严自不同生态型的恢复系进行分类研究，结果表明：供试材料DNA籼粳分化明显，聚类分析结果和用RFLP对供试材料的籼粳分化明显。聚类分析结果和用RFLP对供试材料的籼粳分类结果基本一致，而且者与形态分类的结果也基本一致，在所用的20对SSR引物中，有5对是籼粳特异的，其灿粳分辨率均在90％以上。     

利用InDel标记鉴定水稻育种材料的籼粳属性

准确高效鉴定水稻材料的籼粳属性对于开展水稻籼粳亚种间杂种优势利用有着重要意义.利用19对基于籼稻(9311)和粳稻(日本晴)全基因组DNA序列比对获得的差异片段而设计的特异插入/缺失(Insertion/Deletion,InDel)引物,对48份育种上常用的籼稻、粳稻和中间型材料(品种)进行了InDel 标记的籼粳属性分析,利用DNA样品在这19对InDel位点上的籼型或粳型基因频率,结合聚类分析和主成分分析,确定了这些材料的籼粳属性,通过比对程氏指数法的籼粳鉴定结果检验了InDel分子标记法在水稻籼粳属性鉴定上的有效性.结果表明,InDel分子标记法与传统的程氏指数法的总体吻合率为89.58％,在典型籼稻或典型粳稻材料上两者的吻合率为100％;在具有复杂遗传背景的中间型材料上,InDel分子标记法比程氏指数法具有更高的准确性.因此,InDel分子标记法是真正鉴定籼粳的特异方法,比传统方法具有更高的灵敏性和准确度,可以用于籼粳属性鉴定及遗传分化研究.     

粤北普通野生稻籼粳分化的SSR分析

本文利用28对籼粳特异性SSR引物对174个粤北普通野生稻个体进行分析。28对引物均有多态性,平均每对引物扩增出的等位变异数和基因型数分别为10.6和28。粤北普通野生稻群体有较高的遗传多样性(0.7681),除了能扩增出典型的籼、粳特异基因,还能扩增出野生稻特有的基因。遗传一致度聚类分析表明粤北普通野生稻存在初步籼粳分化;2份(1.15%)材料偏籼,172份(98.85%)材料偏粳,群体以偏粳为主。基因组水平上整个粤北群体没有发现原始类型。     

两系杂交水稻主要性状配合力与亲本籼粳分化关系的研究

选用4个光温敏核不育系及54个常规品种（系）,按NCII设计配制杂交组合,以籼粳特异RFLP标记及形态指数法检测供试品种（系）的籼粳分化程度,研究两系杂交水稻主要性状一般配合力及特殊配合力与双亲籼粳分化的关系。结果表明,①多数品种的籼粳遗传分化和形态分化相一致,只有个别品种不一致;②组合间一般配合力方差大于特殊配合力方差,基因加性效应更重要;③亲本的一般配合力效应及其特殊配合力效应对F     

Frankia共生固氮基因的分离与克隆

利用ＤＮＡ－ＤＮＡ杂交方法，分离细枝木麻黄的Ｆｒａｎｋｉａ菌株Ｃｏ０１的ｎｉｆ克隆ｐＣｃ１ＧＸ，赤杨内生菌株Ａｔ４的ｎｉｆ克隆ｐＡｔ１ＧＸ及沙棘的ＦｒａｎｋｉａＨｒ１８的ｎｉｆ克隆ｐＨｒ１８ＧＸ、ｐＨｒ１１－③ＧＸ。用基因功能互补法，从Ｆｒａｎｋｉａ菌株Ａｔ４的基因文库中分离到二个可能可互补豌豆根瘤菌ｎｏｄ基因功能的克隆ｐＡｔ２ＧＸ、ｐＡｔ３ＧＸ，并制作了ｐＡｔ２ＧＸ、ｐＡｔ３ＧＸ的亚克隆，予进一步实验，获得充分的证据证明ｐＡｔ２ＧＸ、ｐＡｔ３ＧＸ是否带有Ｆｒａｎｋｉａ菌株Ａｔ４的ｎｏｄ基因．     

花生条纹病毒外壳蛋白基因cDNA的合成、克隆及全序列测定

自田间采集的花生病叶中提取花生条纺病毒（ＰＳｔＶ）总ＲＮＡ,人工合成引物Ｐ１、Ｐ２,通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增合成ＰＳｔＶ－ｃｐ的ｃＤＮＡ,并将其克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体上。经限制酶谱分析后进行全序列测定,结果表明：该布１０８４个核苷酸组成,包含了ＰＳｔＶ－ｃｐ ｃＤＮＡ完整的８６１ｂｐ编码序列（编码２８７个氮基酸）以及３＇端２２３ｂｐ非编码序列,与文献报道的４个ＰＳｔＶ－ｃｐ基因具有较高的保守性。     

云南地方稻种资源核心种质的微卫星分析

摘要：以来自云南地方稻(Oryza sativa L.)种资源核心种质中的113份材料为研究对象，运用36对微卫星引物，研究了籼(indica )粳( japonica )两个亚种间和云南5个稻作生态区间的遗传多样性分布趋势，并筛选了籼粳亚种、水陆生态型和不同生态区的特异指纹标记。结果表明，粳稻的遗传多样性大于籼稻，遗传分化水平较低；而5个生态区中滇西南水陆稻区遗传多样性最大，遗传分化水平较低；滇东北高原粳稻区的遗传多样性最小。这种遗传多样性的分布趋势与前人在形态和同工酶水平上对云南稻种资源多样性的考察，以及云南地方稻种资源核心种质在形态和同工酶水平上的遗传多样性分布趋势基本一致。另外，在所出现的416个指纹标记中，分别发现籼粳特异指纹标记6个，水陆特异指纹标记15个，不同生态区特异指纹标记3个。初步认为，云南地方稻种资源核心种质代表了云南省地方稻种资源的遗传多样性；从DNA水平上看，云南地方稻种资源的遗传多样性中心在云南省的西南部，粳稻的分化水平低于籼稻。微卫星标记是种质资源遗传多样性检测、分类和生态型确认以及核心种质研究中有用的工具。     

外源芸苔素内酯对不同基因型杂交稻开花期耐热性的影响

为了明确不同基因型杂交稻对高温耐受性的差异及芸苔素内酯(BR)对提高不同类型杂交稻耐热性的作用效果,本研究以杂交籼稻、偏籼型籼粳杂交稻和偏粳型籼粳杂交稻各2个品种为材料,在开花期设置常温、高温和高温下喷施0.15%BR 3种处理,分析其对水稻产量及产量构成因素、花粉活力和抗氧化能力等的影响。结果显示,高温导致杂交稻的结实率、单株产量和花粉活力显著下降,其中杂交籼稻耐热系数为0.73,显著高于偏粳型籼粳杂交稻(耐热系数0.47)。而高温下喷施BR可以显著提高水稻结实率、单株产量和花粉活力,杂交籼稻、偏籼型和偏粳型杂交稻恢复系数分别为1.23、1.43和2.00,以偏粳型杂交稻的缓解效果最明显。喷施BR降低了高温处理下不同基因型杂交稻的超氧阴离子含量,并提高了甲基乙二醛酶(GlyⅠ)活性及抗坏血酸(AsA)、谷胱甘肽含量(GSH),同时改变了抗氧化酶相关基因OsAPX1、OsCATB、OsGPX3和OsGLYI8的表达水平。综上可知,杂交籼稻常温下产量表现低于籼粳杂交稻,但具有较强耐热性,高温下喷施BR对杂交籼稻产量下降的缓解效果明显低于籼粳杂交稻;籼粳杂交稻尤其是偏粳型,尽管对高温表现敏感,但与BR的相互作用可有效抵御高温胁迫,喷施后产量可接近或达到常温对照水平。本研究结果为提高杂交水稻开花期耐高温能力的研究提供了理论基础和实践经验。     

鼠伤寒沙门氏菌I相鞭毛蛋白基因fliC^i的克隆,鉴定

以提纯的鼠伤寒沙门氏菌８７０５染色体ＤＮＡ为材料，经ＥｃｏＲ Ｉ消化，过柱（ＳｅｐｈａｒｃｙｌＳ－４００），得到大于４００ｂｐ的酶切片段；然后随机克隆到质粒ｐＧＥＭ－３Ｚｆ（－）中，转化大肠杆菌ＬＣ２ａ（ｈａｇ＾－，ｒｅｃＡ＾－）；在氨苄青霉素平板上共得到６０１３个转化子，从中筛选出１个有动力的克隆，小量制备质粒ＤＮＡ，经酶切电泳鉴定，该克隆的外源片段大小为１５．３ｋｂ，将其命名为ｐＧＩ４０１５。     

传染性法氏囊病病毒VP2基因的克隆及其重组鸡痘病毒转移载…

根据已发表的ＩＢＤＶ基因组序列设计并合成一对特异扩增ＩＢＤＶ ＶＰ２ｃＤＮＡ的引物，以纯化的ＩＢＤＶ－Ｄ７８弱毒疫苗株基因组为模板，利用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增出约１．５ｋｂ产物。将ＰＣＲ产物克隆到ｐＵＣ１９的Ｓｍａｌ位点，经酶切图谱分析等方法鉴定出重组ＶＰ２ｃＤＮＡ质粒（ｐＶＰ２）。将ＶＰ２基因正向插入ＦＰＶ启动子ＬＰ２３Ｐ２下游，连同痘苗病毒启动子Ｐ１１启动的ＬａｃＺ报告基因盒插入ＦＰＶ转移载体中     

甜菜坏死黄脉病毒新疆分离物外壳蛋白基因的序列分析

用根据国外已报道的甜菜坏死黄脉病毒（ＢＮＹＶＶ）的ＲＮＡ２的序列合成的两个引物，通过对ＢＮＹＶＶ新疆分离物的ＲＮＡ逆转录获得了ＢＮＹＶＶ的外壳蛋白基因的ｃＤＮＡ，经ＰＣＲ扩增后用Ｔ４聚合酶补平两端，克隆到ｐＧＥＭ－７Ｚｆ（＋）质粒的ＳｍａＩ位点，转化大肠杆菌ＤＨ５α，经筛选得到正向插入的重组质粒ｐＧＥＢ３。用ＰＣＲ扩增和酶切均得到５９０ｂｐ的ＤＮＡ片段。用ＡＢＩ３７０Ａ型ＤＮＡ全自动序列仪测出该ｃ     

籼粳杂种后代支链淀粉结构及其与稻米糊化特性相关性分析

为了探讨利用优质粳稻改良灿稻品质的可行性,以食味品质极佳的粳稻品种越光为母本、食味品质差的籼稻品种桂朝2号为父本构建的重组自交系群体(RIL)为试验材料,研究了籼粳杂种后代的支链淀粉结构变异特征及其与稻米胶稠度、起始成糊温度和RVA谱特征值的相关关系。结果表明,在RIL群体中,所有性状呈现连续分布,且双向超亲分离明显,双亲平均值除最高粘度和崩解值低于低亲值外,其余性状均介于双亲之间。RIL群体中支链淀粉短链(6≤DP≤11)分配比率表现为籼型偏籼型偏粳型粳型,中链(12≤DP≤24)分配比率表现为籼型偏籼型偏粳型粳型,存在极少量短链分配率较高而中链分配率较低的灿型株系,说明利用优质粳稻与籼稻杂交,其后代的籼粳特性对稻米支链淀粉结构有较显著影响,但通过加强后代选择,也可以选到支链淀粉结构象粳型的优良株系。在RIL群体中,支链淀粉短链分配率与起始成糊温度呈极显著负相关,中链分配率与起始成糊温度呈极显著正相关,长链分配率与消减值呈极显著负相关关系,而支链淀粉链长与胶稠度和RVA谱其他特征值的相关性表现因种植地点不同而有差异。研究结果为灿粳亚种间杂交育种的品质改良提供了理论参考。     

Bt水稻“克螟稻”杂光后代中转基因的遗传表达及育种利用

利用ＧＵＳ反应检测了Ｂｔ转基因粳稻（克螟稻）与籼稻、粳稻杂交的不同世代群本的叶片染色情况,结果发现粳粳交Ｆ２出现抗性株与非抗性株的３：１的分离,籼粳交的ＢＣ１出现１：１分离,籼粳交的ＢＣ１Ｆ２出现３：１分离,表明转基因在杂交后代的传递属单基因显性遗传。利用Ｗｅｓｔｅｒｎ点杂交技术结果发现Ｆ１、Ｆ２和ＢＣ１代的Ｂｔ蛋白表达量均超过转基因株供体,呈现出表达能力上的杂种优势。农艺性状考察结果发现,无论是     

江西省“籼改粳”发展现状及问题分析

近年来,"籼改粳"逐渐成为水稻研究领域的一个热门话题,我国各水稻种植大省纷纷开始籼稻改粳稻领域的探索。江西省作为我国一个水稻种植大省,在"籼改粳"领域的研究中取得了不错的成效。基于此,概述江西省当前推行"籼改粳"工程的现状,结合江西省地理位置和自然条件,分析江西省发展"籼改粳"的优势条件,并对比周边省市粳稻发展经验,提出在推行"籼改粳"过程中存在的部分问题以及建议。     

猪生殖和呼吸综合征病毒中国分离株B13株ORF5基因在杆状病 …

本研究将ＰＲＲＳＶＢ１３株ＯＲＦ５基因克隆到杆状病毒转移载体质粒ｐＶＬ１３９３中,构建了重组转移载体质粒ｐＶＬ１３９３－ＯＲＦ５。用该重组转移载体质粒与线性化苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＭＮＰＶ－ＳＶＩ Ｇ）基因组ＤＮＡ（ＢａｃｕｌｏＧｏｌｄ Ｌｉｎｅａｒｉｚｅｄ Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ ＤＮＡ）共转染草地夜蛾（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ,ｓｆ９）细胞,得到重组病毒ＡｃＭＮＰＶ     

水稻白叶枯病菌dsp基因的克隆,同源性和功能分析

以经转座子Ｔｎ５诱变的水稻白叶枯病菌ｄｓｐ基因突变体ＸｏｏＭ３１０４为材料，构建了ｄｓｐ基因探针质粒ｐＶＩＲ３。采用分子杂交法，从基因文库克隆中筛选出１个ｄｓｐ基因克隆ｐＮＡＸ３１１１，含２２ｋｂ的外源ＤＮＡ插入片段，具有４个ＫｐｎＩ酶切位点，其中３．０，２．０ｋｂ两个片段与探针质粒中Ｔｎ５侧翼的ｄｓｐ基因序列同源。以ｐＮＡＸ３１１１为探针与Ｘｏｏ日本系统、中国系统及菲律宾系统的菌株，细菌性条斑病     

脑钠肽与谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白的表达与分离纯化

用ＰＣＲ技术扩增获得脑钠肽－９５ｃＤＮＡ,再由它获得脑钠肽－３８ｃＤＮＡ（ＢＮＰ－３８ｃＤＮＡ）选用融合蛋白表达质粒ｐＧＥＸ－３Ｘ作载体,构建成谷胱甘肽巯基转移酶（ＧＳＴ）和ＢＮＰ－３８的融合基因,该基因在大肠杆菌ＪＭ１０９中表达的最佳体系是：以１：１０扩大培养４ｈ加入终浓度为０．５ｍｍｏｌ／Ｌ的诱导剂ＩＰＴＧ诱导培养４ｈ,诱导表达的融合蛋白量可达５６μｇ／ｍＬ,培养液,是国外文献的３．７３倍,用     

固氮粪产碱菌中nif,ntr和gln基因鉴定及nifA克隆

本工作采用＾３２Ｐ标记的与固氮（ｎｉｆ）和一般氮代谢（ｎｔｒ和ｇｌｎ）系统有关的基因探讨，对不同限制性内切酶完全酶解的粪产碱菌Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｆａｅｃａｌｉｓ总ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析，证明在粪产碱菌中存在与ｎｉｆＨ、ｎｉｆＤＫ、ｎｔｒＡ，ｎｔｒＣ、ｇｌｎＢ、ｇｌｎＤ同源的ＤＮＡ序列。以Ａｚｏｓｐｉｒｌｌｕｍ ｂｒａｓｉｌｅｎｓｅ Ｓｐ７ ｎｉｆＡ ＤＮＡ为探针，经三轮杂交筛选。     

固氮粪产碱菌nifH基因的亚克隆及其启动子的核苷酸序列分析

采用＾３２Ｐ标记的巴西固氮螺菌Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ ｂｒａｓｉｌｅｎｓｅ Ｓｐ７ ｎｉｆＨ ＤＮＡ探针，对不同限制性内切酶完全酶解的粪产碱菌Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｆａｅｃａｌｉｓ Ａ１５０１总ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析，证明在粪产碱菌中存在与ｎｉｆＨ同源的ＤＮＡ序列。在不同ＮＨ４＾＋浓度下测定ｎｉｆＨ－ｌａｃＺ融合基因在粪产碱菌结合子中的β－半乳糖苷酶活性，结果证明该融合基因的表达受     

辣椒钙调蛋白cDNA克隆

本研究根据几种已克隆的植物钙调蛋白ｃＤＮＡ翻译启始密码子和终止密码子附近高度保守的碱基序列设计引物,用辣椒叶在紫外线诱导作用下表达的ｍＲＮＡ构建的ｃＤＮＡ文库为模板,通过严格的聚合酶链式反应,扩增出一条４５０ｂｐ左右的ｃＤＮＡ片段,将该片段克隆到ｐＢＳＫ（－）上并进行测序和序列分析,结果表明,所扩增到的片段为一长度为４５３ｂｐ的全长的ｃＤＮＡ,含有长度为１４８个氨基酸的开放读码框架,在碱基序列和推