草地早熟禾愈伤组织诱导及植株再生

以成熟种子和胚轴为外植体诱导草地早熟禾愈伤组织,比较草地早熟禾四个品种的愈伤诱导情况和不同6-BA浓度、愈伤年龄等因素对愈伤组织分化能力的影响。结果表明:成熟种子的出愈率与胚性愈伤诱导率均高于胚轴;MS 2,4—D(2mg/L) 6-BA(0.1mg/L)培养基为草地早熟禾Mardona品种较为合适的愈伤培养基,其诱导率为58.3%;MS BA(3mg/L) KT(0.2mg/L)为较为适合的分化培养基,再生率高达70%;随着继代次数的增加,草地早熟禾分化能力能够继续保持。选择致密、易碎、生长迅速的愈伤继代能够保持草地早熟禾的胚性,可以为遗传转化提供长期良好的植物材料。     

影响草地早熟禾愈伤组织诱导和分化的相关因子研究

以草地早熟禾品种午夜2号,新格莱德和橄榄球2号种子为外植体,采用不同温度及浸种时间处理后进行愈伤组织的诱导和分化培养。结果表明：4℃浸种16～24h可以促进愈伤组织形成,不同品种间差异不明显;午夜2号和橄榄球2号继代1次的愈伤组织分化能力最强,新格莱德继代2次的胚性愈伤组织分化率最高。     

草地早熟禾愈伤组织诱导的多因子正交试验研究

通过多因子的正交试验,筛选出草地早熟禾Poa pratensis Baron品种的最适愈伤组织诱导培养基为MS 2,4-D(1 mg/L) 6-BA(0.1 mg/L) CuSO4(3 mg/L) 酸水解酪蛋白CH(1 g/L),各因子影响程度为2,4-D＞CuSO4＞CH＞6-BA.对于Midnight品种,最适愈伤组织诱导培养基为MS 2,4-D(2 mg/L) 6-BA(0 mg/L) CuSO4(3 mg/L) CH(1 g/L),各因素影响程度为2,4-D＞CH＞CuSO4＞6-BA.通过用所得培养基进一步诱导比较,证明通过正交设计方法获得的结果为最佳诱导配方,用正交设计筛选愈伤组织诱导培养基是一种较好、可靠的方法.同时,在愈伤组织诱导试验中,建议使用胚性愈伤诱导率作为统计指标.     

肯塔基草地早熟禾愈伤组织的诱导及再生体系的建立

以肯塔基草地早熟禾成熟种子为外植体,研究了影响愈伤组织诱导、分化以及再生苗生根、移栽的主要因素,建立了肯塔基草地早熟禾高频再生体系。结果表明,在MS培养基上,低浓度的BA(0.1mg/L)配合2,4-D(3.0mg/L)诱导肯塔基草地早熟禾种子出愈率达到74.9±7.35%;0.1mg/L2,4-D在SH培养基上诱导愈伤组织分化成芽,分化率平均每块愈伤可达8.1±0.36个芽;最适生根条件为1/2MS 1.0mg/LNAA。     

草地早熟禾午夜2号植株再生研究

以草地早熟禾(Poa pratensis L.)品种午夜2号成熟种子为外植体,进行植株再生研究,建立高频再生体系,为草地早熟禾进行原生质体培养和细胞融合奠定基础。结果表明:诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+2,4-D(1mg/L)+6-BA(0.1 mg/L)+3%蔗糖+0.7%琼脂,其诱导率为52.3%;最佳继代培养基为MS+2,4-D(1mg/L)+6-BA(0.3mg/L)+3%蔗糖+0.7%琼脂;最佳分化培养基为MS+NAA(0.5 mg/L)+6-BA(1 mg/L)+3%蔗糖+0.6%琼脂、分化率为57.5%;生根培养基同分化培养基,供体材料经100d的培养后获得再生植株。     

草地早熟禾愈伤组织遗传转化受体系统的建立

以草地早熟禾成熟胚为外植体，并去除部分胚乳，或用浓盐酸处理，选择NB＋2，4-D2mg／L为诱导培养基，NB＋6-BA2mg／L为分化培养基，1／2NB＋IAA0．5mg／L＋NAA0．5mg／L为生根培养基，建立了这些品种的胚性愈伤组织高频诱导与再生系统，确定了G418（40-50mg／L）Hpt（50mg／L）的筛选临界浓度，确定了最佳分化时间，探讨了建立草地早熟禾转化受体系统的必要条件。     

草甘膦对草地早熟禾愈伤组织生长及生理指标的影响

以草地早熟禾午夜Ⅱ号愈伤组织为试验材料,采用间接接种的方法在草甘膦浓度为0、0.02、0.04、0.06、0.08和0.10mmol/L的MS培养基上继代培养。20d后对愈伤组织进行存活率、相对生长率、褐化情况、电导率、丙二醛、可溶性蛋白、游离脯氨酸含量和抗氧化酶(SOD,POD和CAT)活性的测定。结果表明:愈伤组织的存活率随草甘膦浓度的增大而逐渐下降,相对生长率呈先上升后下降的趋势。电导率、游离脯氨酸含量及SOD,POD和CAT活性呈先上升后下降的趋势,临界点处的草甘膦浓度为0.04mmol/L。丙二醛和可溶性蛋白的临界点草甘膦浓度是0.06mmol/L。说明草地早熟禾午夜Ⅱ号愈伤组织可耐受较小浓度的草甘膦(0.04mmol/L)。     

甘肃陇西野生草地早熟禾植株的再生体系

以甘肃陇西野生草地早熟禾(Poa pratensis)成熟种子为外植体,研究不同激素及其浓度组合对愈伤组织诱导及分化的影响。结果表明,不同浓度2,4-D处理下,愈伤组织的诱导率差异明显。MS+1.0 mg·L-1 2,4-D是陇西野生草地早熟禾愈伤组织诱导的最佳培养条件,诱导率为41.40%;单独使用2,4-D,愈伤组织的诱导率和质量要优于2,4-D和6-BA配合使用的情况。2 mg·L-1 6-BA适合甘肃陇西野生草地早熟禾愈伤组织的分化,在MS+2 mg·L-1 6-BA基础上添加0.5 mg·L-1 NAA和0.2 mg·L-1 2,4-D,绿苗率显著提高(P0.05),分别为22.88%和19.72%。生根培养基同分化培养基,生根率为100%。     

草地早熟禾愈伤组织对NaCl胁迫的生理响应

以草地早熟禾(Poa pratensis)午夜Ⅱ号愈伤组织为材料,研究NaCl胁迫对其生长、细胞膜相对透性、游离脯氨酸、丙二醛、可溶性蛋白及抗氧化酶活性的影响。结果表明,低浓度NaCl胁迫对午夜Ⅱ号愈伤组织的生长有促进作用,高浓度NaCl胁迫对愈伤组织生长具有抑制作用,且当NaCl浓度高于1.5%时愈伤组织开始出现褐化的现象;随NaCl浓度的升高,其胁迫程度也随之加强,丙二醛(MDA)和可溶性蛋白含量呈现先升高后降低的趋势,游离脯氨酸(Pro)含量和细胞膜相对透性则呈现出一直增加的趋势;过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性随NaCl胁迫程度的增加呈先升高后降低的趋势,在NaCl浓度为1.5%时酶活性达到最高。研究结果为草地早熟禾愈伤组织耐盐突变体的筛选奠定了基础。     

不同激素浓度和处理方法对草地早熟禾愈伤组织诱导的影响

以草地早熟禾Poa pratensis成熟种子为外植体,以MS为基本培养基,研究了对外植体用手术刀进行切割和在不同外源植物激素2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)和6-BA(6-苄基氨基嘌呤)质量浓度下对愈伤组织诱导能力的影响.结果表明:对外植体用手术刀进行切割的方法对愈伤组织的诱导没有显著的影响;而在2,4-D和6-BA配合使用的情况下,愈伤组织的胚性和诱导率要优于单独使用2,4-D.     

紫花苜蓿愈伤组织诱导及植株再生的研究

以中牧1号紫花苜蓿的胚轴、叶片、子叶和根为外植体,研究了不同浓度细胞分裂素对胚性愈伤组织诱导的影响,以及不同分化培养基、蔗糖浓度对胚状体分化的影响。结果表明:不同外植体间的愈伤组织诱导率差异较大,以胚轴的愈伤诱导效果最好,愈伤组织诱导率高达92.2%;改良SH+2,4-D2.0 mg/L+BA 0.5 mg/L为最佳胚性愈伤组织诱导培养基;MSO1培养基适于胚状体的分化,蔗糖浓度为25~30 g/L时胚状体诱导率最大可达30.4%;MSO培养基是最佳的成苗培养基。     

黄花苜蓿愈伤组织诱导与植株再生

以黄花苜蓿下胚轴、子叶为材料,在MS+2,4—D0.5～2mg/L以及MS+2,4—Dlmg/L+6BA0.2～1.0mg/L的培养基上可诱导形成愈伤组织;将它们分别传入MS+2,4—D1mg/L或MS+2,4—D0.2mg/L+6BA0.5mg/L的培养基中3～6个月,可分化出芽或类胚体;转入无激素的1/2MS培养基后,可生根并发育为完整再生植株。     

草地早熟禾新格莱德胚性愈伤组织原生质体培养及植株再生的研究

以草地早熟禾品种——新格莱德成熟种子为供试材料,在含3.0mg/L2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、0.5mg/L6-苄氨基嘌呤(6-BA)的MB₅培养基中进行胚性愈伤组织诱导的培养。并从生长了7～9个月的胚性愈伤组织中分离出原生质体,将该原生质体置于KM₈P培养基(含3.0mg/L2,4-D、0.5mg/L6-BA、100mg/L水解酪蛋白、100mg/L水解乳蛋白、1%蔗糖、0.4mol/L甘露醇)中进行了液体浅层培养。结果表明,新格莱德原生质体在上述KM₈P培养基中培养3d后出现第1次细胞分裂,2～3周后形成小细胞团,此时添加低渗培养液2～3次,小细胞团持续分裂并形成愈伤组织。当愈伤组织块长至3～5mm时,转入固体培养基MS+3.0mg/L2,4-D+0.5mg/L6-BA和MS+0.5mg/L萘乙酸(NAA)+5.0mg/L6-BA上进行培养,使其细胞增殖和分化,且逐步形成完整的植株。     

硫酸铜,硝酸银和脱落酸对草地早熟禾胚性愈伤诱导的影响

试验以草地早熟禾4个品种的成熟种子为外植体,研究了CuSO4、AgNO3、脱落酸(ABA)对草地早熟禾胚性愈伤诱导的影响,结果表明,K3诱导培养基中添加CuSO4对草地早熟禾胚性愈伤组织的形成有促进作用,除DP192-10之外的3个品种都发生了明显的形态上的变化,DP-LF-300和2W42-117在添加5μmol/LCuSO4的培养基上诱导出了乳白色、致密的胚性愈伤组织,2W42-117的胚性愈伤率高达40%。在MS基本培养基中添加AgNO3、ABA对草地早熟禾4个品种的胚性愈伤组织的诱导没有作用。     

蒙农红豆草愈伤组织诱导及植株再生的研究

采用MS为基本培养基,对内蒙古地区特有的红豆草品种蒙农红豆草(Onobrychis viciifolia Scop.cv.mengnong)的种子进行不同预处理,统计在不同培养基培养下供试材料种子的萌发率,并在出苗后对红豆草幼苗各外植体(下胚轴、子叶、幼茎、叶片)在不同激素配比培养基中进行组织诱导培养,最终确定理想的培养基激素配方并获得红豆草再生植株。研究结果表明,在1/2MS培养基中种子的萌发率高于MS培养基,并在4℃冷藏预处理下其萌发效果最佳,萌发率达94%。不同激素配比对不同外植体的愈伤诱导和芽分化的效果有所差异。附加MS+2,4-D 2mg/L+6-BA 1mg/L+KT 1mg/L培养基下胚轴整体出愈效果最好,愈伤组织诱导率为86%;附加MS+NAA 0.1mg/L+6-BA 2.0mg/L培养基有利于芽的分化,分化率为24%。外植体出愈顺序为:下胚轴>子叶>叶片>幼茎。     

草地早熟禾成熟胚离体培养植株再生技术的研究

以大青山草地早熟禾和超级伊克利早熟禾的成熟种子为外植体材料,研究激动素和生长素及其不同配比组成的激素组合对愈伤组织诱导发生与生长状态及其绿苗分化能力的影响。结果表明,在愈伤组织诱导培养基中附加2.0mg/L2,4-D和0.2mg/LBA,诱导频率在30%-43%之间。在其继代培养基中添加1.0mg/L2,4-D和0.5mg/LBA,愈伤组织增殖速度快,且保持胚胎发生能力。在愈伤组织分化培养基中附加2.0mg/LBA或CPPU,经继代培养3代的愈伤组织的绿苗分化率保持在30%左右。在继代培养中,早代选择外表呈干燥、紧密、颗粒状愈伤组织是克服随着继代培养时间的延长愈伤组织再生植株的能力显著下降这一障碍的简易有效方法。     

高羊茅胚性愈伤组织诱导及植株再生

对高羊茅2个品种(新秀和夜明珠2号)的再生技术进行了研究,建立了高频再生体系,为遗传转化奠定了基础.该试验以成熟的种子为外植体,诱导胚性愈伤组织.结果表明,2品种胚性愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+2,4-D5.0mg/L+6-BA0.1 mg/L;愈伤组织分化的最佳培养基:新秀为MS+6-BA 2.0ms/L,夜明珠2号为MS+6-BA 1.0mg/L;生根最佳培养基为MS+NAA 0.5 mg/L.     

沙打量叶片愈伤组织诱导和植株再生的研究

本文对沙打旺叶片外植体愈伤组织诱导和植株再生进行初步研究。建立了叶片外植体细胞无性系。并获得再生植株。试验以ＭＳ为基本培养基，附加不同浓度的２．４－Ｄ、ＮＡＡ、ＩＡＡ、ＢＡ、ＫＴ和ＺＴ。单独附加２，４－Ｄ时，８５％的外植体形成愈伤组织。２，４－Ｄ与ＺＴ或ＢＡ配合使用时，形成愈伤组织的百分率虽降低，但这种愈伤组织可继代培养和诱导分化成苗。在ＭＳ培养基上附加ＢＡ和ＮＡＡ时，则获得再生苗。ＢＡ、ＮＡ和２