香蕉愈伤组织及体细胞胚诱导过程中的组织学观察

将巴西蕉(Musa AAA Cavendish)的未成熟雄花接种在MI培养基(MS+4mg/L2,4-D+1mg/L生物素+1mg/LIAA+1mg/LNAA+100mg/L谷胺酰氨+100mg/L麦芽抽提物+30g/L蔗糖+7.5g/L琼脂粉)上进行愈伤组织诱导,对愈伤组织诱导过程中的各个阶段进行组织学观察。结果表明,未成熟雄花外植体脱分化的起始部位是表皮下层的维管组织细胞,启动时间为外植体接种后4～5周;外植体接种8周后获得分生小球体;胚性愈伤组织形成于分生小球体的表面,主要由具有细胞核和核仁比大、细胞质丰富的胚性细胞组成。随着培养时间的延长,胚性愈伤组织的表面形成一些由多细胞组成的体细胞原胚,有时还可观察到二分体的存在,这表明香蕉体细胞胚可能是单细胞起源的。     

菠萝愈伤组织中体细胞胚起源过程的组织细胞学观察

以菠萝（Ananas comosus）‘神湾’品种为材料,采用石蜡切片法对其愈伤组织中球形胚形成过程进行了组织细胞学观察。结果表明,非胚性愈伤组织转入到MS + 4.0 mg · L-1 2,4-D + 0.5 mg · L-1 6-BA培养基培养后,愈伤组织中先出现一些胚性细胞;然后单个胚性细胞分裂形成一个由多细胞组成的原胚。原胚细胞分生能力强,与周围的母体组织之间形态差异显著,界限明显,其下部形成一个类似胚柄的结构。随着原胚不断生长,其形状由长椭圆形发展成倒卵形,最后逐渐形成表面较光滑、外观近球形的球形胚,并在‘胚柄’基部与母体组织连接处形成离层。与此同时,球形胚内出现细胞分化。菠萝体细胞胚发生具有内、外两种起源方式,另外愈伤组织中体细胞胚发生普遍存在着不均匀、不同步和次生胚等现象。     

菠萝非胚性愈伤组织的类型及其器官发生

以菠萝[Ananas comosus(L.)Merr.]非胚性愈伤组织为材料,利用离体培养及组织细胞学等方法研究了其在增殖、分化过程中的特性和再生规律。在增殖培养基上经过3次以上继代培养后,非胚性愈伤组织形态上逐渐表现出一定差异。根据其形态结构、分化能力和组织细胞学特征,可把非胚性愈伤组织分为节瘤状组织、薄壁组织团、致密深层愈伤组织和表面疏松愈伤组织4种类型;在增殖培养基MS+3.0mg/LBA+2.0mg/LNAA上,一种类型的非胚性愈伤组织通常只会生长出同类型的非胚性愈伤组织,但通过改变培养基配方等方法可使不同类型之间发生转换。同时,增殖继代过程中的器官发生现象很常见,通常是在薄壁愈伤组织表面细胞分化成具有分生能力的细胞,然后进行不定芽的分化。4类非胚性愈伤组织都可以通过拟原球茎、多芽体以及不定芽的形式进行器官发生;也可以经胚性诱导由体细胞胚发生途径再生成植株,其中拟原球茎产生体细胞胚的能力最强,多芽体其次。生长素及细胞分裂素对非胚性愈伤组织的形态结构、分化途径以及增殖能力有很大的影响。     

影响洋葱愈伤组织及胚性愈伤组织诱导的因素研究

以洋葱雄性不育系种子(10-8F)为外植体,研究了蔗糖浓度、暗处理及取材时间对洋葱愈伤组织及胚性愈伤组织诱导的影响,以期优化胚性愈伤组织的形成条件,为转基因提供良好受体并为建立高频再生体系奠定基础.结果表明:40 g/L蔗糖及光培养最适合愈伤组织的诱导;50 g/L蔗糖及暗培养最适合胚性愈伤组织的诱导,最适宜的取材时间为45 d.     

橄榄胚性愈伤组织的诱导初探

橄榄 (ＣａｎａｒｉｕｍａｌｂｕｍＲａｅｕｓｃｈ )属于橄榄科橄榄属 ,为福建的特产名果。可鲜食 ,也可加工制成各种风味佳美的蜜饯 ,而且还有药用价值。由于橄榄树体高大 ,童期长 ,且缺乏遗传背景研究资料 ,常规育种遇到很大困难。本文报道诱导橄榄胚性愈伤组织的有效途径 ,以期为利用现代生物技术改良橄榄品种及快速繁殖苗木打下基础。1　材料与方法花后 40～ 5 0ｄ的橄榄幼果采自闽侯村下橄榄园 ,供试品种为福建省的主栽品种惠圆 ,树龄为 2 0年左右。橄榄幼果先用 75 %的酒精浸泡 1ｍｉｎ ,再用 0 1 %的升汞浸泡消毒 1 0ｍｉｎ ,无菌水…     

荔枝胚性愈伤组织的诱导和保持

以荔枝绿沙，兰竹，东刘一号三个品种的４－７周幼胚为外植体，培养胚性愈伤组织的发生，结果表明，以２，４－Ｄ２ｍｇ／Ｌ和ＢＡ０．５－１ｍｇ／Ｌ配合使用，可使以上三个品种的胚性愈伤组织诱地率分别为绿沙２３－２７％，兰竹２８．６－３０５．％，东刘一号２９－３３．７％。采用有激素和无激素培养基交替继代可以长期保持兰竹，东刘一呈的胚性愈伤组织。     

枣幼胚愈伤组织诱导和胚状体发生

以陇东马牙枣盛花后50～60d的幼胚为试材,采用三步培养法诱导胚状体。结果表明:诱导愈伤组织适宜的培养基为Nitsch培养基上附加BA 1.0mg/L+2,4-D 1.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂4.0g/L。诱导胚状体培养基宜选用,MS+BA 1.0mg/L+IBA 0.2mg/L+LH0.5mg/L+VC 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂4.0g/L,并获得完整植株。     

本地早胚性愈伤组织耐盐性研究

柑桔是对盐分极度敏感的植物,盐分可导致柑桔焦叶、枯枝,生长抑制和品质变劣等,砧木对盐分也十分敏感,土壤中可溶性盐分的存在与增加,往往成为柑桔栽培的限制因子,因此,研究柑桔的耐盐性及选择耐盐品种类型,对柑桔栽培具有十分重要的意义。     

南丰蜜桔胚性愈伤组织的诱导

以南丰蜜桔"杨小—26"花药为外植体,培养诱导胚性愈伤组织。结果表明:在不同取材时期和培养基条件下,胚性愈伤组织发生率是不同的。南丰蜜桔花药培养的取材最佳时期是单核靠边期;培养基LP+TDZ3.0mg/L+A1.03.0mg/L+NAA1.0mg/L+10mg/LAgNO3较适于胚性愈伤组织再生,再生率高达20.3%;培养基配方中AgNO3对胚性愈伤组织再生无显著影响。本研究首次报道了南丰蜜桔花药离体培养,诱导出胚性愈伤组织。     

侧柏胚性愈伤组织的诱导研究

以侧柏未成熟合子胚、胚根为试材,研究了基本培养基、不同外植体、植物激素、合子胚发育阶段等因素对侧柏愈伤组织诱导的影响.结果表明:未成熟合子胚、胚根在适宜的培养基上都能诱导出愈伤组织,DCR+2.0 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L 6-BA+0.5 g/L谷氨酰胺是未成熟合子胚诱导愈伤组织的最佳培养基,诱导率高达96.67％.DCR+1.0 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L 6-BA+0.5 g/L谷氨酰胺是胚根诱导愈伤组织的最佳培养基,诱导率高达93.33％.最佳采样时期为7月3日前后.     

从菠萝薄细胞层切片直接诱导体细胞胚

 以菠萝(Ananas comosus L. Merrill) 杂交种MD1 无菌苗为材料, 通过培养薄细胞层切片 (Thin cell layer, TCL) 的方法, 研究直接再生胚的固体培养体系。结果证明, 预培养的设计2 (在预培养基PT上黑暗预培养无菌苗1周后, 从预培养苗茎顶端切取TCL, 在MS + 2, 4-D 2 mg·L ^{- 1}或1 mg·L ^{- 1}胚诱导培养基EI2上黑暗培养1周, 然后转到光照条件下继续诱导胚1周, 再在成熟胚培养基EM上培养2周, 最后转入幼苗培养基PL上培养) 是直接诱导获得体胚的最佳途径; 诱导的体胚最初均来自于薄细胞层上微管束附近的细胞; picloram有利于芽的诱导, 2, 4-D有利于直接再生胚, 但如果球形胚形成后一直培养在较高浓度的2, 4-D培养基中, 将阻碍球形胚和心形胚进一步发育为成熟胚, 反而促进芽的生成。     

分葱组织培养体细胞胚胎发生的研究

利用分葱茎尖培养成功地诱导了体细胞胚胎发生。具体步骤如下：Ⅰ．在ＭＳ＋２，４－Ｄ１ｍｇ／Ｌ＋ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ培养基上诱导愈伤组织；Ⅱ．在ＭＳ＋２，４－Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ培养基上进行愈伤组织的继代培养，继代培养３次以后，转变为胚性愈伤组织；Ⅲ．在ＭＳ＋２，４－Ｄ０．２５ｍｇ／Ｌ＋ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ培养基上进行胚状体的诱导；Ⅳ．在无任何激素的ＭＳ培养基上使胚状体再生植株。切片观察表明，胚状体大多数起源于愈伤组织表层及其以下细胞。     

菠萝微卫星指纹图谱的构建

初步构建了菠萝种质的SSR指纹图谱,为菠萝种质鉴定提供了依据.从菠萝EST-SSR开发的20对微卫星引物扩增31份不同的菠萝种质,筛选出能够稳定扩增且带型差异明显的SSR引物.挑选5对多态性高、分辨率高、重复性好的SSR引物对,作为标准引物对材料进行扩增.每对引物得到的多态性带数8~15个,平均为11条;引物的多态信息...     

适于制作人工种子的一品红体细胞胚的培养

 MS + 2,4-D 2.0 mg·L ^{- 1} + 6-BA 0.5 mg·L ^{- 1}固体培养基较适合一品红苞片诱导愈伤组织。MS+ 2,4-D 1.0 mg·L ^{- 1} + 6-BA 0.5 mg·L ^{- 1} +水解酪蛋白80 mg·L ^{- 1}固体培养基上体细胞胚分化率最高。活性炭、MS培养基和悬浮振荡培养有利于高频率体细胞胚发生。球形、心形及梨形胚及时转入添加NAA 0.2 mg·L ^{- 1}、6-BA 0.5 mg·L ^{- 1}及水解酪蛋白80 mg·L ^{- 1}的MS液体培养基中, 有利于高质量体细胞胚发生。子叶期胚及时转入添加ABA 0.5 mg·L ^{- 1}的上述培养基中, 会提高正常体细胞胚的百分率。用高质量(子叶期) 的一品红体细胞胚包埋制作人工种子, 在无菌条件下萌发率为58.1%。     

柑橘体细胞胚发生的组织细胞学研究

以伏令夏橙长期继代培养的愈伤组织诱导体细胞胚发生。切片观察表明:胚性愈伤组织由胚性和非胚性细胞组成,体细胞胚发生以单细胞外起源方式为主,也可能来自胚性细胞团。胚性细胞分裂产生两个细胞,进而分化发育成多细胞原胚、球形胚、心形胚及子叶胚。次生胚和畸形子叶胚的产生较常见。通过PAS反应发现,胚性细胞和球形胚时期有两次淀粉积累高峰,淀粉的消长与体细胞胚发生的能量供应密切相关。     

菠萝DNA的提取及AFLP反应体系的建立

为了应用AFLP分子标记对菠萝种资源进行种质鉴定、分类及亲缘关系等方面的研究,最重要的是要获得高质量的DNA,菠萝叶片革质化程度较高,且纤维、多糖、多酚等次生代谢物质含量较多,严重干扰DNA的抽提或影响其后的AFLP双酶切及其扩增反应,本研究以菠萝叶片为材料,利用改良CTAB法得到了39个高质量的菠萝分类群的DNA基因组,并进行了AFLP分析,得到了条带清晰、多态性好的菠萝品种指纹图谱,这为菠萝基因库的建立、优良品种选育以及亲缘关系的系列研究提供理论依据。     

无子西瓜郑抗4号的体细胞胚诱导及植株再生(英文)

以无子西瓜(CitrulluslanatusMansfeld)郑抗4号无菌苗子叶为外植体,进行了体细胞胚发生及植株再生的研究,结果表明,无菌苗应先进行3d暗培养,然后采取光照16h/d和黑暗8h/d培养3d;将子叶的叶面朝下放置于培养基上的愈伤组织诱导率高于叶面朝上的培养方式;子叶诱导胚性愈伤组织的最适培养基配方为MS+6-BA2.0mg/L+KT1.0mg/L+GA31.0mg/L;诱导需要在黑暗条件下启动,进行7d暗培养,而生长分化于光照16h/d和黑暗8h/d条件下培养7d;继代3次得到的胚性愈伤组织最多;最适生根培养基配方为1/2MS+IBA0.3mg/L。体细胞胚胎诱导率最高为25%。胚性愈伤组织经进一步培养发育为成熟的体细胞胚胎,生根成为完整植株。