不同发育阶段草原红牛背最长肌FABP4基因表达水平研究

实验采用实时荧光定量PCR技术对FABP4 mRNA在1、6、12和24月龄草原红牛背最长肌组织中的表达情况进行研究。结果表明:FABP4 mRNA在所检测的4个不同发育阶段均有表达,6月龄草原红牛背最长肌组织中FABP4 mRNA与另外3个时期差异极显著(P<0.01),而另外3个阶段之间差异不显著(P>0.05)。本实验为深入研究牛FABP4基因与肉质性状的相关关系奠定基础,为牛肉质性状候选基因的选择提供理论依据。     

散养黄羽肉鸡CAPN1、H-FABP基因表达的发育性变化及其肌内脂肪含量的研究

为探讨在散养条件下黄羽肉鸡CAPN1、H-FABP基因与其生长发育和肌内脂肪(IMF)含量的关系,试验以130羽3周龄体重接近,健康商品代黄羽肉鸡母鸡为试验材料,随机分为笼养组(对照组)和散养组(试验组),采集在不同周龄(3、4、6、8、10、13 w)的胸肌、腿肌和腹脂组织样品共360份,采用实时荧光定量PCR法对不同生长阶段组织中CAPN1和H-FABP基因mRNA表达量进行检测,同时采用索氏抽提法测定胸肌和腿肌的IMF含量。结果表明:黄羽肉鸡的CAPN1、H-FABP基因在胸肌、腿肌和腹脂中均有不同程度的表达。随着周龄的增加,散养肉鸡CAPN1基因表达的整体变化趋势为增加—减少—增加—减少,且3～6 w其在胸肌和腹脂中的表达量均表现为笼养显著高于散养(P<0.05)。H-FABP基因的整体表达趋势随着周龄的增加而降低,在胸肌和腿肌中变化趋势相同,且均表现为散养显著高于笼养(P<0.05),在腹脂中表现为笼养高于散养(P>0.05)。与散养鸡相比,笼养鸡生长速度较快,腹脂率、IMF含量较高。本试验结果可为散养黄羽肉鸡CAPN1和H-FABP基因分子选育提供一定参考。     

野猪、家猪及其杂种猪CAPN1基因PCR-RFLP分析

为了进一步揭示猪CAPNl基因变异与肌肉生长的关系,试验采用直接测序的方法寻找SNPs及利用PCR-RFLP检测技术分析不同基因型在野猪、民猪、大白、长白、杜洛克及野家杂种猪中的分布规律.结果表明:在2个分别引起NaⅢ、EcoRⅡ酶切位点改变的SNPs位点,各基因型在6个品种(品系)间的分布存在着极显著差异(P<0.01),并且NaⅢ位点等位基因的分布在瘦肉型猪中以B为优势基因,在脂肪型猪中以A为优势基因,NaⅢ位点的突变可能与瘦肉率有关.     

不同发育阶段延边黄牛阉牛背最长肌差异表达基因的筛选

应用引物退火控制技术(ACP)筛选8月龄和30月龄延边黄牛阉牛背最长肌差异表达基因,寻找与延边黄牛生长发育相关的候选基因。相同饲养条件下,分别检测3头8月龄和30月龄延边黄牛阉牛背最长肌组织的m RNA表达水平变化。利用20对随机引物差异显示扩增,共获得9条ESTs。对Telethonin、MYH7、MSTN、Camk2d和SPP1基因进行荧光定量PCR检测。结果表明:MYH7、MSTN和SPP1基因在8月龄阉牛组背最长肌中的表达量显著高于30月龄(P0.05);Telethonin和Camk2d在30月龄阉牛背最长肌中的表达量显著高于8月龄(P0.05)。结果提示,这些基因可能是影响延边黄牛生长及肉质性状的重要调控基因。     

CAPN1基因PCR-SSCP多态性对鸡肉质性状的影响

为了分析寿光鸡CAPN1基因的多态性与部分肉质性状的关系,试验采用PCR-SSCP方法对CAPN1基因外显子2,3及其侧翼序列进行多态性检测.结果表明:CE2引物扩增的座位在群体检测到3种基因型即AA型、AB型和BB型,基因型频率分别为0.531,0.327,0.143;CE3引物扩增的座位在群体也检测到3种基因型即C...     

膨化全脂大豆对延边黄牛SCD基因表达及肌肉脂肪酸含量的影响

为了探讨饲喂膨化全脂大豆对延边黄牛肝脏、肌肉和脂肪组织中硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)基因表达的影响及其与肌肉脂肪酸含量的相关性。选取健康、体重相近的延边黄牛阉牛8头,随机分为两个处理组,每组4头,对照组饲喂全混合日粮,试验组用膨化全脂大豆替代全混合日粮中的豆粕,并保证日粮营养水平不变,试验期为90 d。试验结束后屠宰,采集肝脏、肌肉、脂肪组织,检测SCD基因的表达量,并与肌肉脂肪酸含量进行相关分析。结果表明:SCD基因在肌肉中的表达量试验组极显著高于对照组(P0.01);在肝脏和脂肪中的表达量试验组低于对照组,但差异不显著(P0.05);SCD基因表达量与肌肉中棕榈油酸(C161)含量呈显著正相关(P0.05),相关系数为0.999;与油酸(C181)含量呈极显著正相关(P0.01),相关系数为0.995;与亚油酸(C182)含量呈显著正相关(P0.05),相关系数为0.975。膨化全脂大豆替代全混合日粮中的豆粕增加了SCD基因在肌肉中的表达量,能够改变牛肉脂肪酸组成,使牛肉富含有益人体的不饱和脂肪酸。     

山地乌骨鸡不同组织中CAPN 1基因表达的发育性变化

本试验采用SYBR GreenⅠ荧光定量法,首次测定了四川山地乌骨鸡1d、14d、28d、42d、56d、70d、84d的胸肌、腿肌、肝脏、心、脑组织中钙蛋白酶1CAPN1基因的相对表达量。结果表明：CAPN1基因在鸡体内普遍存在,CAPN1基因在肌肉组织中的表达量与鸡肌肉组织的生长发育呈相似的变化规律。     

营养水平对杂交肉牛FABP3基因表达及IMF的影响

为研究营养水平对杂交肉牛心脏型脂肪酸结合蛋白（FABP3）基因表达及肌内脂肪含量（IMF）的影响,以西门塔尔、利木赞和夏洛莱杂交肉牛为研究对象,利用实时荧光定量PCR技术,分别测定高、中、低营养水平的3种杂交肉牛背部脂肪中FABP3mRNA表达水平,并测定其背最长肌IMF。结果：（1）高营养组中夏洛莱牛IMF高于同营养组其他2种肉牛,其背部脂肪中FABP3mRNA水平也显著高于另外2种杂交肉牛（P〈0.01）;中营养组中西门塔尔和利木赞牛IMF均高于同营养组的夏洛莱牛,但FABP3mRNA的水平无显著差异（P〉0.05）;低营养组中夏洛莱牛IMF和FABP3mRNA水平均显著低于另外2种肉牛（P〈0.01）;（2）夏洛莱杂交肉牛背部脂肪中FABP3mRNA水平与IMF具有显著的相关性（P〈0.05）,而西门塔尔和利木赞牛中FABP3mRNA水平与IMF无显著相关性（P〉0.05）。该结果表明提高营养水平影响FABP3mRNA表达并在一定程度上影响IMF,但影响显著与否存在品种差异,在肉牛育种和牛肉生产中应当同时考虑营养因素和遗传因素。     

延边黄牛及其导入1／4利木赞血牛的比较研究（2）——产肉性能的对比

试验选择延边黄牛(公牛)、含有1/4利木赞血的延边黄牛(公牛)及其去势牛(公牛)各4头,分别设为对照组、试验1组和试验2组进行产肉性能的对比研究.试验结果表明:试验1组的胴体重、屠宰率和眼肌面积最高,而试验2组的胴体重、屠宰率和眼肌面积与延边黄牛相比变化不大;牛肉一般成分中粗脂肪含量试验2组最高,其他各项指标无显著差异(P＞0.05);各处理组的脂肪酸成分均无显著差异(P＞0.05);试验1组的背最长肌中必需氨基酸、非必需氨基酸及总氨基酸含量与对照组相比有增加的趋势,而试验2组的背最长肌中各项氨基酸含量则有所下降.     

延边黄牛ACTA1基因的SNPs检测及其与肉质性状的关联分析

试验旨在研究延边黄牛ACTA1基因的遗传变异,分析其多态性对肉质性状的影响。采用PCR-RFLP和PCR-SSCP方法探讨ACTA1基因多态性及其与肉质性状的关联性。结果发现,延边黄牛ACTA1基因存在2个突变位点:A193G突变,导致氨基酸Arg → Gly的错义突变;A298G突变,导致氨基酸Lys →Arg的错义突变。χ²检验显示,A193G和A298G位点于检测群体中处于Hardy-Weinberg平衡状态（P>0.05）。关联分析显示,延边黄牛ACTA1基因2个突变位点的不同基因型与肌肉中肉豆蔻酸、油酸含量、眼肌面积、大理石花纹等级呈显著相关（P<0.05）。初步认为ACTA1基因对延边黄牛肉质性状有显著影响,可作为延边黄牛新品种早期选择的候选基因。     

不同处理玉米秸秆饲料对延边黄牛生长性能、血清生化指标的影响

试验旨在研究不同处理的玉米秸秆饲料对延边黄牛生长性能、血液生化指标的影响及效益分析,以期挑选出既能够保证育肥牛营养需要的同时又能降低成本增加收入的玉米秸秆饲料。试验选取18头月龄相近,体重为350 kg左右健康无病的延边黄牛随机分成3组,组别处理为Ⅰ组(基础精料+膨化玉米秸秆饲料),Ⅱ组(基础精料+常规青贮玉米秸秆饲料),Ⅲ组(基础精料+常规黄贮玉米秸秆饲料),试验期为130 d,分别在3、5、7月进行空腹称重和颈静脉采血,测定生长性能、血液生化指标及效益分析。结果表明:Ⅱ组与Ⅲ组的增重和平均日增重差异显著(P0.05);Ⅰ组与Ⅱ组间差异不显著(P0.05);I组与Ⅲ组间差异不显著(P0.05),但是Ⅰ组高于Ⅲ组。Ⅰ组、Ⅱ组与Ⅲ组的粗饲料采食量差异显著(P0.05);Ⅰ组与Ⅱ组间差异不显著(P0.05)。Ⅰ组、Ⅱ组与Ⅲ组血清葡萄糖差异显著(P0.05)。Ⅰ组与Ⅱ组、Ⅲ组血清碱性磷酸酶活性差异显著(P0.05);Ⅱ组与Ⅲ组间差异不显著(P0.05)。从经济效益上看,Ⅰ组的效益最高,其次是Ⅱ组,效益最低的是Ⅲ组。因此,青贮饲料育肥效果最好但是经济效益低,膨化玉米秸秆饲料育肥效果很好而且经济效益最高,常规黄贮玉米秸秆饲料育肥效果很差并且经济效益很低。     

肌联蛋白基因SNPs位点多态性与延边黄牛生长性状间的关联分析

为了研究延边黄牛肌联蛋白(Titin,TTN)基因的多态性对延边黄牛生长性状的影响,选取208头健康的32月龄延边黄牛,利用PCRRFLP和PCR-SSCP方法进行TTN基因遗传变异检测。结果表明:延边黄牛TTN基因存在2个突变位点,分别为A47751G突变,导致氨基酸Ile→Val的错义突变,C73301A同义突变;χ2检验显示,2个突变位点在所检测延边黄牛群体中处于Hard-Weinberg平衡状态(P005);关联分析显示,延边黄牛TTN基因2个突变位点的不同基因型与体高、体斜长、胸围和尻长上差异显著(P005)。将2个突变位点合并基因型分析结果表明,组合AACC基因型个体在体高和体斜长显著高于AATT型个体(P005),初步认为TTN基因对延边黄牛生长性状的有显著影响,其中组合AACC可能是影响延边黄牛生长性状的最佳基因型组合。     

延边黄牛胆绿素还原酶cDNA的克隆、表达及鉴定

为了克隆延边黄牛胆绿素还原酶(Biliverdin reductase,BVR)的CDNA序列后在大肠杆菌中表达、纯化并进行鉴定。本试验根据黄牛、马和东北虎BVR基因的cDNA序列设计引物,通过3′和5′RACE方法获得延边黄牛BVR基因全长cDNA序列。之后构建pET-28a-BVR重组质粒并转化到E.coli BL21(DE3)中表达并进行纯化。通过分光光度法检测BVR酶的活性。结果显示,所获得的延边黄牛BVR基因cDNA含有1个完整的开放阅读框,该cDNA序列阅读框由891个核苷酸组成,编码296个氨基酸。用BLAST和ClustalW软件进行同源性分析,与牛、马和东北虎的核苷酸相似性分别为98.0%,88.0%和87.0%。SDS-PAGE鉴定其相对分子质量为32 560。分光光度法检测BVR具有催化胆绿素还原为胆红素的活性。结果表明,通过克隆表达获得了有活性的延边黄牛BVR酶蛋白,为胆红素的进一步大量制备提供理论基础。     

Circulating leptin and its muscle gene expression in Nellore cattle with divergent feed efficiency

Background: Leptin has a strong relation to important traits in animal production, such as carcass composition,feed intake, and reproduction. It is mainly produced by adipose cells and acts predominantly in the hypothalamus.In this study, circulating leptin and its gene expression in muscle were evaluated in two groups of young Nellore bulls with divergent feed efficiency. Individual dry matter intake(DMI) and average daily gain(ADG) of 98 Nellore bulls were evaluated in feedlot for 70 d to determinate the residual feed intake(RFI) and select 20 animals for the high feed efficient(LRFI) and 20 for the low feed efficient(HRFI) groups. Blood samples were collected on d 56 and at slaughter(80 d) to determine circulating plasma leptin. Samples of Longissimus dorsi were taken at slaughter for leptin gene expression levels.Results: DMI and RFI were different between groups and LRFI animals showed less back fat and rump fat thickness,as well as less pelvic and kidney fat weight. Circulating leptin increased over time in all animals. Plasma leptin was greater in LRFI on 56 d and at slaughter(P = 0.0049). Gene expression of leptin were greater in LRFI animals(P = 0.0022) in accordance with the plasma levels. The animals of the LRFI group were leaner, ate less, and had more circulating leptin and its gene expression.Conclusion: These findings demonstrated that leptin plays its physiological role in young Nellore bulls, probably controlling food intake because feed efficient animals have more leptin and lower residual feed intake.     

完全混合发酵日粮对延边黄牛生长性能、肉品质及肉抗氧化指标的影响

试验旨在研究完全混合发酵日粮(TMF)对延边黄牛生长性能、肉品质及抗氧化性能的影响。选取12头健康无病的18月龄的延边黄牛公牛,平均体重为(395±10)kg,随机分为2组,每组6个重复。对照组饲喂未发酵的试验日粮,试验组饲喂混合发酵饲料,试验期为400 d。结果表明:30月龄时,与对照组相比,试验组的体重提高了8.72%(P<0.05),试验组的料重比降低了31.06%(P<0.01),而试验组的平均日增重均显著高于对照组(P<0.05)。试验组的粗脂肪值显著高于对照组(P<0.05),而两组之间水分、灰分和粗蛋白含量差异均无显著性差异(P>0.05)。与对照组相比,试验组的b*值提高了54.18%(P<0.05),MFI值提高了18.74%(P<0.01),剪切力降低了25.18%(P<0.01),而对照组与试验组的L*值与a*值不存在显著性差异(P>0.05)。宰后72、96、120 h,试验组与对照组的牛肉过氧化氢酶(CAT)和总超氧化物歧化酶(T-SOD)均差异极显著(P<0.01);宰后72、96 h,试验组牛肉中的丙二醛(MDA)含量均极显著低于对照组(P<0.01);宰后120 h,试验组牛肉的总抗氧化能力(T-AOC)极显著高于对照组(P<0.01)。由此可以说明试验组牛肉的抗氧化能力高于对照组。综上所述,TMF可以提高延边黄牛的生长性能、肉品质与抗氧化能力。     

ASB12基因SNPs位点多态性与延边黄牛生长性状关联分析

为研究延边黄牛细胞因子信号转导相关(ASB12)基因多态性与延边黄牛体尺性状的相关性,以203头同等饲养条件下延边黄牛阉牛为研究对象,采用PCR-RFLP技术检测ASB12基因的SNPs位点,并将其与延边黄牛体尺性状进行关联分析。结果:ASB12基因存在2个突变位点,分别为T709C突变,导致氨基酸Leu→Pro的错义突变;C1039T突变,导致氨基酸Pro→Leu的错义突变。χ~2检验显示,2个突变位点在所检测延边黄牛群体中处于Hard-Weinberg平衡状态(P0.05)。关联分析显示,延边黄牛ASB12基因2个突变位点的不同基因型与体高、体斜长差异显著(P0.05)。将2个突变位点合并基因型分析结果表明,组合AACG基因型个体在体高和体斜长显著高于组合BBGG型个体(P0.05)。初步认为ASB12基因对延边黄牛生长性状的有显著影响,其中组合AACG可能是影响延边黄牛生长性状的最佳基因型组合。     

甘氨酸对延边黄牛体细胞克隆重组胚发育的影响

为了提高延边黄牛体细胞克隆重组胚的发育率,研究了在体外培养液中添加不同浓度的甘氨酸对重组胚发育的影响。分别在体外培养液中添加0、7、14、21mmol/L的甘氨酸,结果表明,在体外培养液中添加甘氨酸能够显著提高延边黄牛体细胞克隆重组胚的发育率,且以7mmol/L浓度的甘氨酸囊胚的发育率最高。     

Effects of crocin on frozen-thawed sperm apoptosis,protamine expression and membrane lipid oxidation in Yanbian yellow cattle

Glycerol is used as a bovine semen osmotic cryoprotectant that greatly improves the quality of frozen and thawed bovine sperm. However, high glycerol concentrations can have a toxic effect on frozen and thawed bovine sperm. Therefore, this experiment investigated the effect of replacing a portion of the glycerol in a cryoprotectant solution with crocin on the sperm apoptosis, protamine deficiency and membrane lipid oxidation of frozen and thawed Yanbian yellow cattle sperm. The experiment included a control group (6% glycerol) and four treatment groups: I (3% glycerol), II (3% glycerol +0.5 mM crocin), III (3% glycerol + 1 mM crocin) and IV (3% glycerol + 2 mM crocin). Computer assisted semen analysis was used to detect sperm motility, Hoechst 33,342, propidium iodide, and JC-1 staining were used to analyse sperm viability and mitochondrial membrane potential, chromomycin A3 staining was used to detect protamine deficiency and DNA damage, flow cytometry was used for sperm membrane lipid disorder detection and analysis, and real-time quantitative RT-qPCR was used to detect the mRNA expression levels of protamine-related genes (PRM2, PRM3), sperm acrosome-associated genes (SPACA3), oxidative stress-related genes (ROMO1) and apoptosis-related genes (BCL2, BAX). Compared to the control group, replacing a portion of glycerol with 1 mM crocin significantly improved sperm motility, plasma membrane integrity, membrane lipid disorders (p < .05) and viability, mitochondrial membrane potential, protamine deficiency (p < .01). The expression level of PRM2, PRM3, SPACA3 and BCL2 significantly increased (p < .05), while the expression levels of ROMO1 and BAX significantly decreased (p < .05). Accordingly, the BCL2/BAX ratio significantly increased (p < .05). In summary, the substitution of a portion of glycerol with crocin in cryoprotective solution improved the quality of Yanbian yellow cattle sperm after freezing and thawing.