三肽囊素分子生物学研究进展

综述了三肽囊素分子生物学方面研究近况。三肽囊素作为一种重要的活性物质，其生物学活性和作用机理得到广泛研究，但有关分子生物学方面研究近几年才开始。     

禽法氏囊三肽囊素免疫生物学及其同功能单链抗体研究进展

法氏囊（BF）是禽类特有的免疫器官，为B细胞发育、成熟提供微环境，是免疫球蛋白基因转变场所；其免疫活性物质为三肽囊素（Bursin)；它不仅分布于BF，还存在于胸腺Hassall小体、哈德氏腺、脾脏、BF T细胞区及骨髓；它能诱导家禽和哺乳动物B细胞前体分化；其靶器官是BF，能够拮抗IBD疫苗对BF的损伤，提高ND弱毒疫苗及油苗产生抗体水平；人工合成Bursin作用的靶器官也是BF，可促进BF发育、抗体的产生、维持母源抗体作用。     

三肽囊素研究进展及应用前景

三肽囊素是从法氏囊中提取的一种活性因子,其化学成分已被确定．为更好地研究和利用囊素的免疫活性，主要对三肽囊素的化学本质、生物活性、作用机理、分子生物学研究及应用前景进行了的阐述。     

三肽法氏囊素的制备技术研究进展

囊素是存在于禽腔上囊中的小分子肽类物质,其化学组成为三肽Lys-His-G1y-NH2.大量的研究证实囊素对禽类及哺乳动物具有免疫增强作用,并在疫苗佐剂、饲料添加剂、感染性疾病的辅助治疗、免疫缺陷病、抗肿瘤等方面显示了广阔的应用前景.囊素的大量制备已成为目前研究的热点并已取得很大的进展.这些技术有组织提取法、化学合成法、原核表达法、抗独特型抗体法等.本文对这些技术的原理、方法、优缺点、产物的生物活性等方面的研究进展做一综述.     

法氏囊三肽囊素在鸭体中的组织学定位及功能的研究

以抗法氏囊三肽素(Bursin)单抗,采用免疫组化法及个体发生早期以该单抗阻抑Bursin效应,检测Bursin在鸭体定位分布及其受阻抑后所致生物学效应。结果表明,BF髓质内周缘呈现阳性细胞层、髓质中央部分有稀少阳性细胞、FAE及FAESE呈阳性、IFSE中阳性细胞散在性呈团簇状分布;Th中阳性细胞相对集中于髓质中类似Hassall小体的区域或较高密度弥散于髓质中;Sp中阳性细胞弥散于GC中或无特征性散在性分布;HG中阳性细胞呈团块状散在分布于腺泡、腺管基底膜中;LN则阳性细胞特征性存在于淋巴小结中,少数散在淋巴细胞聚集区或淋巴组织索中。不同剂量抗Bursin单抗对鸭体细胞免疫功能有较强阻抑效应,高浓度单抗阻抑作用更显著(P<0 01);对体液免疫功能亦有较强阻抑效应,不同剂量单抗间未见显著差异(P>0 05);对BF指数有较强影响,高剂量组更明显(P<0 05),且高剂量对Sp指数有一定影响;较强地抑制BF滤泡发育,高剂量组BF发育更不良。     

囊素三肽的基因克隆和表达

以合成的BS1、BS2为引物扩增囊素三肽（BS）8串联片段（BS8）,克隆至pBAD/Thio-TOPO载体,用pBAD/TOPO（R）Thio大肠杆菌表达系统进行表达,含BS8融合蛋白的分子量大小约为19 kD,BS8融合蛋白主要以可溶形式存在.用蛋白质纯化树脂50%Ni-NTA纯化融合蛋白,高纯度的融合蛋白经透析除咪唑、浓缩后,再经胰蛋白酶水解获得大量BS单体.高压液相色谱分析表明,经过DEAE阴离子交换层析,获得纯化的BS单体.     

囊素三肽的研究进展

<正>法氏囊是家禽体内的中枢免疫器官,在免疫反应中发挥着重要作用。Glick[1]首次发现了法氏囊提取液能够使在胚胎期切除法氏囊的小鸡法氏囊复生并且具有恢复产生特异性抗体和免疫球蛋白的能力。Audhya[2]通过高效液相色谱(HPLC)分析发现,法氏囊提取液中发挥主要作用的是一种三肽,是存在于禽法氏     

噬菌体展示三肽囊素模拟肽的研究

本研究分离纯化抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2),利用噬菌体环7肽库筛选抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)结合肽,测定阳性克隆ssDNA序列,并与Bursin序列进行同源性分析,通过ELISA法检测其结合活性和竞争ELISA法检测其抗原性,以Busin为对照,验证阳性克隆(№4)在鸡体内的生物学效应.序列分析表明,"LNXT"短肽序列可能为结合抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)的保守序列,但与Bursin无同源性;噬菌体(№1)在序列中含有K、H、G.ELISA和竞争ELISA检测,表明Bursin对阳性克隆1、4、5、6号和抗Bursin单克隆抗体(2F9-4/HU2)的结合有一定的抑制作用:生物学活性初步验证表明,阳性克隆(№4)与Bursin具有类似作用,能促进抗体产生,有望成为一种模拟Bursin新型的免疫增强剂.     

抗三肽囊素单克隆抗体的制备

为研制抗三肽囊素(bursin,KHG-NH₂)的单克隆抗体,本试验采用EDC法将三肽囊素分子赖氨酰(K)上的氨基与载体蛋白(BSA或OVA)定向偶联,分别制备三肽囊素免疫抗原(BSA-KHG-NH₂)和检测抗原(OVA-KHG-NH₂)。以BSA-KHG-NH₂免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术,筛选到18株能稳定分泌抗三肽囊素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。这18株单克隆抗体与三肽囊素人工抗原的结合均能被三肽囊素、GKHG-NH₂四肽阻断,但不能被KHGK四肽阻断,表明18株单抗与三肽囊素分子的结合具有高度特异性。以本研究制备的单抗2D2建立间接竞争ELISA方法,检测三肽囊素含量,检测下限为4 ng/mL,线性范围为4~500 ng/mL,加标检测回收率为85.0%~92.4%。     

合成囊素三肽对猪瘟疫苗免疫效果的影响

为验证囊素三肽对猪瘟疫苗的免疫增强作用,通过3个剂量、2种与疫苗配伍方式进行细胞源和脾淋源猪瘟疫苗的猪体免疫试验.于免疫后14d、28d和42d采血,测定猪瘟抗体阳转率.结果表明,囊素三肽可以显著提高猪瘟疫苗(细胞源或和脾淋源)的免疫应答效果.推荐使用剂量为100μ g/头份,肌肉注射,安全无毒.     

人工合成的法氏囊活性肽对新城疫弱毒疫苗免疫效果影响的研究

应用人工合成的法氏囊活性肽给鸡两次注射,再应用新城疫弱毒活疫苗,结果表明：应用人工合成的法氏囊活性肽后短期内能够促进法氏囊的生长发育,这种促进作用的大小与应用剂量呈正相关,对脾脏生长发育没有影响。人工合成的法氏囊活性肽能够使血清中新城疫母源抗体保持较高水平和较长时间,对弱毒疫苗诱导产生抗体也有一定促进作用     

法氏囊活性肽对新城疫弱毒疫苗免疫效果影响的研究

本研究通过给鸡两次注射法氏囊活性肽后,接种新城疫弱毒疫苗,观察法氏囊活性肽对新城疫弱毒疫苗免疫效果的影响,结果表明：纯化的法氏囊活性肽能够提高新城疫弱毒疫苗所诱导产生的血清抗体水平,试验组比对照组平均高１～２个滴度;使血清母源新城疫抗体水平维持较高水平;促进法氏囊的生长发育,对抗传染性法氏囊弱毒疫苗（ＩＢＤ）对法氏囊的损伤,和（或）促进损伤后的法氏囊的修复,对脾脏的生长发育没有影响。     

鸭胚腔上囊的组织结构发育动态研究

对孵化15-25日龄的鸭胚腔上囊进行连续动态研究，结果表明，从腔上囊形成开始到出壳的鸭胚尚法治形成较完整的具体体液免疫功能的组织结构；非炎性状态下腔上囊淋巴滤泡内出现的嗜异形细胞在腔上囊的分化发育中起着重要的组织改建作用。     

禽类法氏囊结构与功能发育研究进展

法氏囊为鸟类特有的中枢免疫器官,是B淋巴细胞成熟与分化的场所。论文从法氏囊组织结构发育、发生与退化、相关传染性疾病及病理机制进行综述,并着重从存在于法氏囊中的相关免疫活性因子来阐述其生理功能的发育,同时提出了增强法氏囊免疫生理功能的几点措施,为今后对法氏囊生理功能的进一步研究提供基础资料。     

囊素的研究进展

为更好地研究和利用囊素的免疫调理活性，从囊素的产生、存在部位、生物活性及其作用机理等方面论述了囊素的研究现状，指出了有关囊素的亟待解决的问题和应用前景。     

三肽囊素对环磷酰胺诱导的免疫器官细胞凋亡的影响

研究了三肽囊素对环磷酰胺诱导的鸡免疫抑制模型中免疫器官细胞凋亡的影响。将180只1日龄粤黄鸡随机分成环磷酰胺组、正常对照组、三肽囊素组以及三肽囊素 环磷酰胺组。利用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dTUP缺口末端标记法(TUNEL)，对不同组鸡的免疫器官细胞凋亡进行计数。结果发现，环磷酰胺组细胞凋亡数比对照组明显增多(P＜0．05)，而三肽囊素 环磷酰胺组细胞凋亡数显著少于环磷酰胺组(P＜O．05)；三肽囊素组的细胞凋亡数比环磷酰胺组少，且差异显著(P＜0．05)。由此可知，三肽囊素对环磷酰胺所诱导的细胞凋亡具有抑制作用。     

鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗对1日龄低母源抗体水平雏鸡免疫效果的研究

将鸡传染性法代囊病病毒(IBDV)BX株抗原和IBDV高免血清按一定比例混合,初步制备了无菌的鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗1~5(分别含有32、8、4、0.5及0.125单位IBDV中和抗体),用鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗1~5及BX株活疫苗分别免疫1日龄低母源抗体水平雏鸡,免疫后9 d观察法氏囊病变,免疫后28 d采血测定IBDV中和抗体,并用强毒攻击,计算各组疫苗保护率。结果显示,免疫后9 d,复合物疫苗1~3免疫组鸡法氏囊正常,复合物疫苗4、5免疫组和BX株活疫苗免疫组分别有2/10、4/10和5/10的试验鸡法氏囊出现了病变;免疫后28 d,复合物疫苗1~5免疫组和BX株活疫苗免疫组IBDV中和抗体效价分别为8.34log2、9.60log2、9.21log2、7.88log2、9.50log2和9.12log2,攻毒保护率分别为90%、100%、100%、80%、90%和80%。试验结果表明鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗2、3(分别含8、4单位IBDV中和抗体)免疫1日龄低母源抗体水平的雏鸡效果最好,攻毒保护率能达到100%。