马病毒性动脉炎血凝及血凝抑制试验研究与应用

在RK-13细胞上培的马动脉炎病毒在4℃、室温和37℃条件下，用各种动物的红细胞进行血凝试验，证实病毒在不同温度下均可凝集小鼠和鸡的红细胞，但不能凝集牛、绵羊、山羊、马、猪、豚鼠、仓鼠、兔及鹅红细胞，病毒用吐温-80和乙醚处理后，血凝活力会显著增强，其血凝滴度比未经处理的病毒高4-8倍，且血凝像更加清晰，最适处理条件是病毒在冰、浴状态下用终浓度0.06%-0.125%(V/V)二温-80振荡处理15min-60min，再加50%（V/V）乙醚振荡作用5min-15min。用EAV免疫SPF豚鼠，4周后采血做HI和NT试验，显示HI抗体和NT抗体产物成正相关，对550份来自新西兰、吉尔吉斯、内蒙古、新疆的马血清做EAV的抗体检测，比较两个试验，二者符合率为97.8%，血凝抑制抗体与中和抗体效价呈显著的正相关，但抗体效价略低于后者。     

犬细小病毒血凝抑制抗体效价胶体金免疫层析检测方法的建立及应用

试验旨在利用胶体金免疫层析技术建立快速检测犬血清中犬细小病毒（canine parvo virus, CPV）血凝抑制（haemagglutination inhibition, HI）抗体效价的方法,用于CPV疫苗免疫效果评价。采用双抗体夹心法,以抗CPV血凝相关抗原的单克隆抗体制备CPV抗原检测试纸条;将犬血清进行不同比例系列稀释后,分别与定量CPV抗原充分反应,滴入CPV胶体金试纸条,根据试纸条检测线（test line,T线）消失时的血清最高稀释倍数判断血清中CPV抗体的HI效价;用此方法检测86份犬血清样品,并与传统血凝抑制试验方法进行分析比较。结果显示,成功制备CPV抗原检测试纸条,确定了试纸条检测犬血清CPV-HI效价的反应条件和结果判定标准。结果表明,在检测不同稀释倍数犬血清反应后的CPV抗原时,能使试纸条T线消失时的血清最高稀释倍数与HI效价具有正相关性,犬血清最高稀释倍数乘以4即为HI效价;两种方法的符合率达90.7%。本试验初步建立了胶体金试纸条检测CPV血凝抑制效价的方法,为检测CPV-HI效价提供了一种操作简单、快速的试验方法,可用于CPV疫苗免疫效果评价。     

中山病毒的血凝和血凝抑制试验

中山（Chuzan)病毒能凝集包括牛在内多种动物的红细胞，对牛红细胞的血浆（HA）活性依赖于NaCl克分子浓度，当该浓度为0．6M时最强，但与PH和温度无关，从2头母牛和库蒙中分离到2株中山病毒，其HA抗原性难以区分，所有感染该病毒的牛的血凝抑制HI抗体 价都升高，其变化与中和试验（NT）抗体效价相似，HI和NT抗体的相关性很高，抗体可保持1年以上，因此，HA试验可代替NT试验用于检测牛的中山病毒感染。     

应用微量血凝抑制试验和气管环中和试验检测传染性支气管炎抗体…

应用家兔Ａ型魏氏梭菌培养液处理的鸡传染性支气管炎病毒作血凝抑制抗原，建立了血凝抑制（ＨＩ）试验方法，监测ＩＢ疫苗的免疫鸡血清ＨＩ效价，结果表明与气管环中和试验测得的中和抗体效价呈正相关，ｒ＝０．５２５，两组抗体效价ｔ检验差异极不显著（Ｐ＜０．０１）。用其监测卵黄抗体、灭活的血清抗体以及用高岭土处理的血清抗体，结果与相应示处理的血清抗体效价一致，用以对江苏、山东两省的７个未作ＩＢ疫苗免疫的鸡场２０个     

鸡传染性支气管炎微量血凝抑制试验方法的研究

用胰酶处理鸡传染性支气管炎病毒(IBV)制成血凝(HA)抗原,HA＝1:16384,用此抗原建立了微量血凝抑制试验(HI)方法检测IBV阳性血清。IBV阳性血清鸡胚病毒中和试验(NT)结果与HI效价呈正相关,相关系数r＝0.29,HI效价达1:8以上可保护鸡胚抵抗200个MLD的IBV攻击,表明HI抗体是保护性抗体,该方法具有较大的实用价值。     

猪细小病毒血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清的制备与鉴定

猪细小病毒（Porcine Parvovirus,PPV）血凝抑制试验抗原、阳性血清和阴性血清在猪细小病毒制品的效力检验中不可或缺,对猪细小病毒相关生物制品的质量控制至关重要。试验采用PPV 7909株病毒同步接种PK-15细胞制备血凝抑制试验抗原,用制备的抗原乳化后免疫豚鼠制备阳性血清,同时用未免疫的阴性豚鼠制备阴性血清。对抗原、阳性血清和阴性血清进行鉴定,结果表明,制备的PPV血凝抑制试验抗原HA效价达1:512;阳性血清HI效价达1:1024;阴性血清HI效价＜1:8,且特异性均良好。利用制备的血凝抑制试验抗原、阳性血清与不同PPV疫苗株的灭活抗原、阳性血清进行交叉反应试验,结果表明,制备的抗原与阳性血清具备良好的血清学交叉反应性,可用于PPV制品的统一评价。     

冻干细胞检验鸡新城疫血清抗体的试验

冻干（醛化）红细胞和新鲜红细胞与同一份鸡血清分别做鸡新城疫（ND）的血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验，二者血凝抑制价基本符合率达98．72％，相关系数为0．9288，冻干红细胞完全可以代替新鲜红细胞做血凝抑制试验检测鸡新城疫抗体效价。     

H9型禽流感毒株免疫对H5型禽流感抗体检测的干扰试验

利用禽流感病毒（AIV）美国H9型毒株，江门H9型毒株和广东某厂厂家生产的含AIV毒株的几种禽用商品疫苗分别免疫40日龄的肉用鸡，通过首免和超免疫后采集首免血和超免疫血分离血清，分别用自制H5型抗原（美国毒株），广州H5型抗原（香港毒株）和中国农业科学院哈尔滨兽医研究所H5型抗原对上述免疫鸡血清进行血凝抑制试验（HI），测定这些H9型毒株免疫的抗血清对H5型抗体检测的影响，试验结果表明，单纯的H9型毒株免疫的抗血清不构成对H5型抗体检测的影响，而含AIV抗原的商品疫苗免疫的鸡血清部分显示H5型抗体阳性，说明某些商品疫苗中含H5型抗原，用美国H5型毒株免疫的鸡血清进行反向验证试验，也未发现对H9型抗体检测的影响，表明H5和H9型AIV不存在同源抗原，因而在二者抗体检测中不存在相互干扰的问题。     

浅谈血凝试验（HA）和血凝抑制试验（HI）影响因素及应用

血凝试验（HA）和血凝抑制试验（HI）是目前兽医实验室常用的检测方法,作为血清诊断技术之一,是利用某些病毒具有凝集红细胞的特性,且这种特性能被特异性抗血清抑制的原理,用于已知病毒检查血清中相应抗体状态和已知血清鉴定未知病毒的一种兽医实验室最常用的实验方法。HA和HI试验具有特异性好、操作方便、可同时进行大量样本试验、对试验环境要求不高等优点,     

猪乙型脑炎间接ELISA与血凝抑制试验方法的比较

用血凝抑制试验和间接ELISA两种方法检测乙脑阳性血清均呈阳性反应,检测乙脑阴性血清均呈阴性反应。用间接ELISA对来自9个猪场74份送检血清进行了猪乙脑病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）抗体检测,并与血凝抑制试验（HI）进行对比,两种方法检测总符合率为85.1%(63/74),经统计分析,检测结果差异不显著(P＞0.05)。对来自无猪乙脑病猪场24头健康猪的血清进行检测,两种方法结果均为阴性,符合率为100%。对10份阳性血清进行检测,ELISA检测效价较HI效价高,表明ELISA比HI敏感。结果表明,ELISA与HI检测结果相符,前者更适用于猪血清中乙脑IgG抗体的大规模检测。     

间接血凝抑制试验检测血清和卵黄中鸡毒支原体抗体的研究

将13只正处于产蛋期的试验鸡在接种疫苗前后分别采血、分离血清；收集鸡蛋，分离蛋黄，并分别用16％NaCl、8％柠檬酸纳和氯仿处理后，检测鸡毒支原体(MG)间接血凝抑制(HI)抗体。结果表明：接种疫苗前的血清和16％NaCl、8％柠檬酸钠和氯仿处理卵黄抗体平均效价分别为4.7，4．4，4．1和4.2 log2；第一次接种疫苗后的血清和16％NaCl、8％柠檬酸纳和氯仿处理卵黄抗体平均效价分别为7．4、6．7、7．1、6．9log2；第二次接种疫苗后第1次采集的血清和16％NaCl、8％柠檬酸钠、氯仿处理卵黄抗体平均效价分别为10．4、9．6、10．1、9．710g2，第2次采集的血清和16％NaCl、8％柠檬酸钠、氯仿处理卵黄抗体平均效价分别为7．9、7.1、7．6和7．4log2。8％柠檬酸钠处理后的卵黄抗体效价最高，与血清抗体效价最接近。血清HI抗体效价与卵黄HI抗体效价具有良好的一致性和相关性，用卵黄可以代替血清进行HI试验。     

影响鸡IBV血凝因素及HI试验抗原制备的研究

选择没有自然血凝性的三个标准IBV毒株(M41、Gray、T株)和四个由西北农大禽病研究室分离的陕西省地方株[X、Fu、W和H株(有自然血凝性)]，在非免疫鸡胚上增殖后，用蔗糖透析法浓缩10倍，再分别采用三种方法处理，制备IBV-HA抗原：1)用浓缩4倍的兔A型魏氏梭菌培养液滤液(R．W．F．C4)处理IBV；2)用2．5U／mlI型磷酸酯酶C(PLC1)处理IBV；3)用1％胰酶处理IBV。结果显示，除T株仍不具有血凝性外，其余毒株都有了较高的血凝价。IBVM41株、X株HA效价株高达2^8，Fu、Gray、W、H株的HA效价也达2^7—2^9。但是，用方法3)来制备HA抗原没有任何实用价值。因为1％胰酶本身具有非常强的非特异性凝集作用，非特异性HA价高达8log2。而采用R．W.F．C4和2．5U／ml PLC1处理IBV浓缩毒制得的IBV—HA抗原，除T株外，均能凝集鸡红细胞，且该凝集作用可被特异的IBV抗血清所抑制，而不能被ND、EDS—76、IBD等其它鸡病阳性血清所抑制，说明该抗原具有较强的特异性。本试验还对影响IBV血凝试验和血凝抑制试验的各种因素进行了研究。比较了用R．W．F．C4和用2．5U／ml PLC1处理IBV制备HA抗原血凝价，结果显示二者的血凝价是一致的，所以完全可以用廉价的兔A型魏氏梭菌培养液代替昂贵的PLC1作为抗原处理液。本试验还采用IBV—M41株和陕西省地方肾型株X株制备IBV—HA双价抗原，结果表明，用上述IBV—HA二价抗原所测出的各毒株抗血清的HA效价和用各毒株所制得的IBV—HA单价抗原所测出的相应毒株抗血清的HI效价差异不显著，说明IBV二价HA抗原的抗原交叉性广泛，可用于IB的免疫监测和诊断。本试验还将在同一条件下获得的免疫鸡血清分别采用HI和CEKC—SN二种方法所测得的抗体效价进行了比较，结果经统计学分析表明：HI效价与CEKC—SN效价呈正相关，相关系数为0．6585，且HI法比ECKC—SN法省时、省力。     

新版国家标准《新城疫诊断技术》血凝和血凝抑制试验的理解与操作实践

血凝（HA）和血凝抑制试验（HI）主要是用于新城疫病原鉴定和抗体效价测定,新版《新城疫诊断技术》（GB/T16550-2020）对HA和HI试验判定结果进行了修改和细化,使其更加标准和规范。为尽快理解新版标准要求,熟练掌握操作要领,对新、旧版标准中HA和HI试验进行了比较,新版标准增加了对HA和HI试验4HAU抗原配制的标定、静置时间以及结果判定的改变。新版标准在操作步骤上更为精准详细,4HAU抗原配置更加准确,从而使得HI试验结果更加科学。本文结合实际检测,为广大实验室检验人员、大专院校学生及科研人员更好地理解新版标准,更熟练地操作,从而为提高试验结果准确性提供了参考。     

监测和诊断禽流感

常规鉴定禽流感病毒的方法是血凝试验 (HA)，血凝抑制试验 (HI)，琼脂扩散试验 (AGP)以及病毒中和试验 (NT)等。 　　检测采取的病料主要是血液、鸡蛋、肝脏等。 　　琼脂扩散试验可以检测出各种血凝亚型的病毒，但检出率较低，往往检测为阴性的鸡群，并不能保证没有感染禽流感。血凝抑制试验可以用于区别禽流感的血清亚型，且敏感性高，但一种血凝抗原只能检出相应的抗体，而不能查出其他血清亚型抗体。不过一个地区流行的禽流感病毒，其血清亚型在一定时间内是相对稳定的，所以用该地区流行的病毒株抗原做血凝抑制试…     

应用微量血凝抑制试验和气管环中和试验检测传染性支气管炎抗体的研究

应用家兔Ａ型魏氏梭菌培养液处理的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）作血凝抑制抗原，建立了血凝抑制（ＨＩ）试验方法，监测ＩＢ疫苗的免疫鸡血清ＨＩ效价，结果证明与气管环中和试验测得的中和抗体效价呈正相关，ｒ＝０．５２５，两组抗体效价ｔ检验差异极不显著（Ｐ＜０．０１）。用其监测卵黄抗体、灭活的血清抗体以及用高岭土处理的血清抗体，结果与相应未处理的血清抗体效价一致，用以对江苏、山东两省的７个未作ＩＢ疫苗免疫的鸡场２０个鸡群进行流行病学调查，结果有１８个鸡群ＴＢ阳性，阳性率达８３％。     

用鸽鸡红细胞进行禽流感血凝抑制试验的比较

分别用1％鸽红细胞和1％鸡红细胞,对经H5亚型禽流感疫苗免疫过的鹅、鸽、鸡的血清,按照不同血清处理方法,进行禽流感血凝抑制试验.结果表明,鸽红细胞作指示细胞,检测鸽免疫血清HI抗体效价效果优于鸡红细胞,但不适于检测鹅、鸡的免疫血清的HI抗体效价.     

猪血凝性脑脊髓炎病毒不同佐剂灭活疫苗免疫BALB/c小鼠的比较试验

用血凝/血凝抑制试验（HA/HI）检测自制的猪血凝性脑脊髓炎病毒（HEV）氢氧化铝胶灭活苗和蜂胶佐剂灭活苗免疫BALB/c小鼠后的抗体效价,依据小鼠抗体效价比较不同免疫佐剂的效果。结果表明,用氢氧化铝胶佐剂配制的疫苗可刺激接种动物产生快速免疫应答反应,抗体产生效价高、维持时间长,其效果优于其它佐剂,有望成为HEV灭活疫苗的候选佐剂。     

血凝与血凝抑制试验4单位病毒抗原配置与标定

为了解决基层兽医实验室检测人员在血凝与血凝抑制（HA和HI）试验中4单位病毒抗原的配置和标定问题的困扰，本试验对GB/T 18936-2020《高致病性禽流感诊断技术》中规定的4单位病毒抗原的配置和标定方法进行了探讨，试验结果表明，通过标定调整的4单位病毒抗原准确性高，从而减少血凝抑制实验的误差。     

两种血凝抑制试验检测鸡新城疫病毒抗体效价结果的比较分析

用常量法和微量法血凝抑制(HI)试验检测了130份鸡血清样本中的鸡新城疫病毒(NDV)抗体效价,经统计学方法分析表明,用两种方法测得的抗体效价差异不显著(P>0.05)。     

云南省鸡减蛋综合征的血清学调查

从云南省10个养鸡场采集不同日龄、品种、性别和不同用途鸡的血清样品103份，以血凝抑制（HI）试验检测鸡群的减蛋综合征（EDS）血清抗水平，结果，10周龄以下鸡的EDS血清抗体阳性率为16．7％，其阳性率随着日龄的增加而增高；不同品种鸡群中，迪高鸡和地方土鸡的EDS血清抗体阳性率较低，而伊萨褐鸡阳性率高达100％；公鸡EDS血清抗体阳性率为55．6％，母鸡为73．4％；商品鸡EDS血清抗体阳性率为68．95，种鸡阳性率为62．5％；全部检测各的平均阳性率为67．9％，多数血清EDS HI效价为1：32－1：1024之间，最高的达1：4096。