副猪嗜血杆菌aroA基因自杀载体的构建

为了构建副猪嗜血杆菌aroA基因插入突变自杀载体,试验采用自杀质粒介导的同源重组方法首先构建了自杀质粒pSD,根据副猪嗜血杆菌aroA基因设计PCR特异性引物,上游引物5'末端加BamHⅠ位点,下游引物5'末端加SalⅠ位点,PCR扩增aroA基因后连接到T载体,经酶切位点分析发现在aroA中有1个HindⅢ位点,将氯霉素表达盒通过该位点,构建T-aroA-cm载体,再通过BamHⅠ和SalⅠ将aroA-cm定向克隆到自杀质粒pSD中。结果表明:成功获得aroA基因插入突变自杀载体。说明进一步进行同源重组,从而构建副猪嗜血杆菌aroA基因插入突变株。     

副猪嗜血杆菌病疫苗研究进展

副猪嗜血杆菌病又称猪革拉泽氏病,副猪嗜血杆菌主要引起猪的多发性浆膜炎、纤维素性心包炎、关节炎和脑膜炎。目前预防该病主要是灭活疫苗,但不同血清型之间交叉保护性不强或无交叉保护作用。因此,发展新的广谱疫苗是未来的趋势。文章对副猪嗜血杆菌病的疫苗及其研究现状进行了分析综述。     

6株副猪嗜血杆菌基因组DNA的PCR指纹图谱研究

根据肠道菌基因闻重复一致序列，设计了一对特异性引物，采用ERIC-PCR和RAPD技术，研究了副猪嗜血杆菌6个分离菌株的指纹图谱和DNA多态性。结果表明，6个分离株的PCR指纹图谱与15个标准血清型指纹图谱相比较可分辨出4种血清型；6个分离株的RAPD研究结果均表现出多态性。有意义的是，6个菌株的多态性DNA片段也能明显将其分为4种类型的副猪嗜血杆菌，与特异性引物PCR结果相一致。该研究可作为流行病学调查和该菌的分子分型快速诊断方法的基础。     

副猪嗜血杆菌抗原性研究进展

副猪嗜血杆菌是猪格拉瑟氏病的病原,主要引起SPF猪和断奶前后仔猪的纤维素性多发性浆膜炎、多发性关节炎和脑膜炎等。其抗原主要有荚膜、脂多糖和外膜蛋白等,不是所有的菌株都存在荚膜抗原,外膜蛋白抗原是刺激机体产生体液免疫的主要抗原,菌株抗原性的高低与毒力的强弱呈正相关,副猪嗜血杆菌的毒力因子至今仍不清楚,推测其荚膜、外膜蛋白、菌体细胞膜表面的自动传输三聚体蛋白等与副猪嗜血杆菌的毒力有关。至今已经定型的副猪嗜血杆菌有15个血清型,还有约30%为未定型的菌株,其中血清5型副猪嗜血杆菌为强毒力代表菌株,常作为研究副猪嗜血杆菌抗原性的代表菌株。副猪嗜血杆菌抗原性的深入研究必将为新型、高效疫苗的研究奠定坚实的基础。     

副猪嗜血杆菌毒力因子研究进展

副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis)是引起猪革拉泽氏病(Glsser’s disease)的病原,能在特定的条件下侵入机体而引起严重的全身性疾病,以纤维素性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为主要特征。副猪嗜血杆菌的毒力因子仍不十分清楚。H.parasuis的全基因组测序工作的完成和遗传操作系统的建立极大促进了毒力因子、致病机制和基因功能的研究。近年证实了H.parasuis的外膜蛋白(Omp)和脂多糖(LPS)与毒力有一定的联系,特别是OmpP2、OmpP5和LPS的庚糖基转移。为了进一步鉴定毒力因子,利用在体外模拟体内感染环境和比较基因组学等方法鉴定了H.parasuis潜在的毒力因子。论文对H.pa-rasuis的毒力因子进行综述,以供参考。     

副猪嗜血杆菌感染诊断方法和最新基因分型方法的研究进展

副猪嗜血杆菌可引起猪格拉塞病和其它许多疾病,对与该茵有关的疾病进行诊断通常依赖于临床症状、病理变化和细菌分离,但由于有无毒菌株(nonvirulent strain)的存在及其在健康仔猪上呼吸道上的早期定殖,使得对该菌的诊断变得较为复杂.而且,在同一猪场甚至是同一只猪体内可能存在多种不同的菌株,因此确定可导致临床发病的特定菌株显得尤为重要.最近,科研人员开发了一些针对副猪嗜血杆菌的基因分型方法,目的是确定该茵的基因型与其毒力强度之间的关系.由于缺乏副猪嗜血杆菌完整基因组序列及其致病因子(virulence factor)的知识,因此将副猪嗜血杆菌的基因型与其毒力联系起来极富挑战性.     

Update on the diagnosis of Haemophilus parasuis infection in pigs and novel genotyping methods

Haemophilus parasuis causes Gl?sser's disease as well as a number of other diseases in pigs. The diagnosis of H. parasuis-associated disease is usually established by clinical signs, pathological findings and bacterial isolation but diagnosis is complicated by the existence of non-virulent strains and the early colonisation of the upper respiratory tract of healthy piglets. Moreover, several strains can be found on a farm and even within a single animal so it is important to determine the specific strain that is causing the clinical outbreak. Recently, genotyping methods have been developed with the goal of correlating genotype with the degree of virulence of H. parasuis strains. The association between genotype and virulence in H. parasuis is challenging due to the lack of knowledge of the complete genomic sequence and virulence factors of this bacterium.     

副猪嗜血杆菌冻干保护剂的研究

采用冻存实验筛选出一种冻存存活率为100％的副猪嗜血杆菌保护剂(HPS-d),通过冷冻干燥实验测定HPS-d冻干存活率为25.94％.利用单因素分析实验优化保护剂HPS-d基质,在HPS-d中添加3种保护剂基质,结果显示:当海藻糖比例为1％、L-精氨酸盐酸盐比例为3％、BHI培养基/保护剂比例为1∶2时,冻干存活率达73.65％ ～77.61％.Plackett-Burman实验设计考察了保护剂8种组分的保护效果,结果显示:D-山梨醇、L-精氨酸盐酸盐和D-海藻糖是影响冻干存活率的显著因素.冷冻干燥验证实验证明优化后保护剂HPS-d平均冻干存活率达74.77％.     

副猪嗜血杆菌转铁结合蛋白研究进展

副猪嗜血杆菌是猪革拉泽氏病的病原体,该病是近年来严重危害养猪业的细菌性传染病之一,呈世界性分布。副猪嗜血杆菌相关致病性毒力因子的研究目前很少,关于转铁结合蛋白更是鲜为人知。在此对副猪嗜血杆菌转铁结合蛋白的结构、形成机制、影响因素及其免疫原性进行综述,对阐明致病菌的慢性感染机理有一定的生物学意义。     

百迪康消毒剂对副猪嗜血杆菌的杀灭试验

为了解一种主要成分为戊二醛、癸甲溴铵溶液的消毒剂百迪康对副猪嗜血杆菌3个血清型菌株的杀灭效果,采用悬液定量杀灭试验、能量试验等方法进行试验。结果显示:将该消毒剂稀释到1:1 000后,作用10min,对副猪嗜血杆菌的杀灭率可达到100%;在稀释1 500倍和2 000倍时,杀菌率效果良好,仅作用2min,杀菌率均可达到98%以上。表明百迪康对副猪嗜血杆菌均有较好的杀灭效果。     

副猪嗜血杆菌人工感染猪的病理学观察

用副猪嗜血杆菌分离株感染断奶仔猪,发病仔猪临床表现为体温中度升高、精神不振、被毛粗乱、站立不稳、厌食、呼吸困难。尸体剖检,可见胸腹腔纤维素渗出严重,有大量的渗出液、肺出血及脑充血等;病理组织学表现为,肺脏、心脏、脾脏等脏器含有大量的中性粒细胞的纤维蛋白性多发性浆膜炎、脑膜炎及支气管肺炎。结果表明,此分离株为一高致病潜力的菌株。     

某猪场副猪嗜血杆菌病的紧急流行病学调查

2017年4月27日,某猪场仔猪突然出现严重呼吸道症状,并伴随大量死亡。为探寻病因,继而提出有效控制措施,开展了紧急流行病学调查。通过现场调查、临床剖解、实验室检测,确定疫病由副猪嗜血杆菌引起。调查发现,寒冷应激、生长日龄短、饲养密度大是重要的风险因素,其共同作用导致疫病发生。采取对发病猪隔离淘汰、猪群全群药物防治等干预措施,最终使疫病得到了有效控制。     

广西副猪嗜血杆菌病流行病学调查

本研究于2009年5月至2010年11月调查了广西南宁、桂林、玉林、钦州4个市60个猪场发生副猪嗜血杆菌病的情况。采集病猪组织样品共86份进行副猪嗜血杆菌分离;对疑似菌株进行形态学观察、培养特性、生化特性和PCR鉴定;最终分离鉴定到26株副猪嗜血杆菌,分离率为30.2%;对分离菌株进行血清型鉴定、致病性和药敏试验。结果表明26株分离株中血清4型有5株,5型3株,9、11、13、14、15型各1株,有1株与2、9、10、11型血清均有凝集,其余12株未能鉴定出血清型。血清型5、13、14菌株和5个未能定型的菌株能引起小白鼠全部死亡,其他菌株对小白鼠致病性不强。药敏试验结果表明70%以上的菌株除对恩诺沙星和氟苯尼考高度敏感外,对其他药物敏感性不高。本调查结果将对广西副猪嗜血杆菌病的防治提供指导。     

副猪嗜血杆菌毒力因子的研究进展

副猪嗜血杆菌是猪上呼吸道的一种常在条件性致病菌,以纤维素性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为主要特征,该菌引起的革拉氏病流行和危害日渐严重,严重危害了仔猪和青年猪的健康。本文对副猪嗜血杆菌的主要毒力因子包括荚膜多糖、脂多糖、脂寡糖、外膜蛋白、转铁结合蛋白、神经氨酸酶、生物被摸、cAMP依赖性自然转化系统和毒力相关活性酶进行了综述,对新技术运用于其毒力因子的研究作了简要介绍,并对今后的相关研究提出展望。     

副猪嗜血杆菌研究进展

近年来 ,国内外许多猪场出现了一种以多发性浆膜炎和关节炎及高死亡率为特征 ,严重危害仔猪和青年猪的传染病。经细菌分离培养、生化鉴定和分子生物学试验证明 ,该传染病主要是由副猪嗜血杆菌所引起。为了更加全面地认识该病原体 ,文章对其流性病学、理化特性、分子生物学、诊断及防制作了较为全面的概述。     

副猪嗜血杆菌高密度发酵工艺研究

旨在建立副猪嗜血杆菌高密度发酵工艺。通过对TSB、BH1、LB培养基进行比较,选择TSB培养基进行优化,利用优化后的培养基对副猪嗜血杆菌在10L发酵罐中进行高密度发酵培养。结果表明,血清4型JS株的活菌数达到2．5×10^10CFU／mL,血清5型ZJ株的活菌数达到2．5×10^10CFU／mL,且通过批次补料与流加相结合的工艺使关键成本血清的使用量降低了1／2。在1000L发酵规模上进行连续3批的发酵试验．经验证该工艺可用于副猪嗜血杆菌灭活疫苗抗原的规模化生产。对3批发酵抗原利用替代动物豚鼠进行动物实验,结果显示抗原均合格。研究结果为国内副猪嗜血杆菌流行菌株血清4型和5型二价灭活疫苗的规模化生产提供了理论依据。     

Effect of marbofloxacin on Haemophilus parasuis nasal carriage

Haemophilus parasuis is a colonizer of the upper respiratory tract and the causative agent of Gl?sser's disease in swine. This study focused on the nasal carriage of H. parasuis after treatment with marbofloxacin. Three marbofloxacin treatments (three doses of 2mg/kg body weight [bw] every 24h, two doses of 4 mg/kg bw every 48 h and 8 mg/kg bw in one single shot) were used and all of them reduce significantly (p<0.05) the nasal carriage of H. parasuis as compared to control animals. Moreover, H. parasuis was not detected in the nasal cavities of piglets after administering the highest dose. The effect of a dose of 8 mg marbofloxacin/kg bw in one shot was further studied in a farm with clinical cases of Gl?sser's disease using a longitudinal study. Statistically significant reduction of nasal carriage of H. parasuis was detected during the first week after treatment in comparison with the control group. However, a clear relationship between the minimum inhibitory concentration (MIC) of the different strains, their putative virulence or the treatment group (antibiotic or control) from which they were isolated was not detected. Finally, the effect induced by the antibiotic treatment on the bacterial strains seemed to be transitory, since diverse H. parasuis strains (with high and low marbofloxacin MICs) were observed 7 days after finishing the treatment.     

Development of a genetic manipulation system for Haemophilus parasuis

Haemophilus parasuis is a member of the family Pasteurellaceae and an important respiratory-tract pathogen of swine, which is the etiological agent of Glasser's disease. Because no genetic manipulation system is available for H. parasuis so far, in vivo studies about the role of its genes involved in virulence are unfeasible. Here we demonstrate that H. parasuis has a cyclic AMP (cAMP)-dependent natural transformation system that enables the uptake of DNA in which the ACCGAACTC sequence signal must be present. After improving DNA transformation parameters, such as cAMP and DNA concentration and exposition time of the exogenous DNA, a knockout mutant of H. parasuis defective in the thy gene, encoding the thymidylate synthase enzyme, has been constructed. Data presented in this work open the possibility for the functional analysis of genes involved in the infectious process of this animal pathogen.     

副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素CdtC亚基的克隆表达及细胞毒性分析

细胞致死膨胀毒素(CDT)由CdtA、CdtB和CdtC三个亚基构成,是细菌的一种重要毒力因子.为研究副猪嗜血杆菌(H.parasuis) CDT的CdtC亚基的功能,本研究根据GenBank中cdtC基因序列设计引物,扩增cdtC基因,并克隆到原核表达载体pET-28a(+)中进行诱导表达.SDS-PAGE和western blot检测目的蛋白主要以包涵体形式存在,分子量约为25 ku.将纯化后的重组蛋白复性后进行体外细胞毒性试验.结果表明,CdtC蛋白对Vero细胞和PK-15细胞有较强的细胞毒性作用.本研究为研究细胞致死膨胀毒素CDT的致病机制奠定了基础.