鸡Ⅱ型干扰素存在亚型

采用RT－PCR法从惠阳胡须鸡克隆了Ⅱ型干扰素基因（ChIFNγ2)。ChIFNγ2是含19个氨基酸的信号肽和145个氨基酸的成熟蛋白，与已报道的鸡Ⅱ型干扰素基因（ChIFNγ)长度一致，核苷酸和氨基酸同源性分别为97％和92．7％；有12处氨基酸发生点变异。ChIFNγ2与禽类IFNγ和哺乳动物IFNγ在氨基酸水平上同源性分别为62．2％－92．7％和26．5％－31．8％。1980年国际干扰素命名委员会建议，在一特定的干扰素型别内，氨基酸序列或组成方面有差异时可确定为亚型。根据这些规定，惠阳胡须鸡ChIFNγ2可被定为一种新亚型的鸡Ⅱ型干扰素。即Ⅱ型干扰素中存在亚型。     

鸡干扰素受体基因在外周血淋巴细胞和组织中的表达

提取惠阳胡须鸡脾脏、胸腺、盲肠扁桃体、胸肌、肝脏、肾脏、心脏、未刺激的外周血淋巴细胞（PBL）和ConA刺激后的PBL的总RNA,采用RT-PCR的方法检测IFN-α/β受体α链（IFNAR1）、IFN-α/β受体β链（IFNAR2）和IFN-γ受体β链（IFNGR2）基因的表达情况.在未经刺激的PBL中未检测到IFNAR1、IFNAR2的表达,ConA刺激后的淋巴细胞中IFNAR1、IFNAR2的表达量比较高;在组织中,仅在脾脏、盲肠扁桃体、肝脏和胸腺中检测到了IFNAR1、IFNAR2的表达.在未刺激的PBL、ConA刺激后的PBL、脾脏、盲肠扁桃体、肝脏、胸腺、胸肌中均检测到了IFNGR2的表达,在肾脏和心脏中未检测到IFNGR2的表达.IFNAR1、IFNAR2、IFNGR2在刺激后的PBL、免疫器官和肝脏中分布,表明IFNAR1、IFNAR2、IFNGR2可能参与机体的免疫调节和肝脏的代谢过程.不同的干扰素受体在PBL和各组织中分布情况的差异可能与其各自功能的差异有关.     

惠阳胡须鸡IFN-α基因克隆和序列分析

根据红色原鸡IFN－A基因设计了引物对，采用PCR法克隆并测序了我国地方标准品种惠阳胡须鸡的IFN－α基因，定名为HyIFNA4.HyIFNA4与红色原鸡类IFN－α比较，FORF长度均为582个核苷酸，编码162个氨基酸，相互间同源性在97．4％－99％。UPGAM法构建鸡IFN基因系统树进一步揭示了HyIFNA4可能是一种新亚型干扰素。     

3种植物添加剂对惠阳胡须鸡肌肉氨基酸、脂肪酸组成与含量的影响

本试验旨在研究绿茶粉、桑叶粉和大蒜粉对鸡肌肉中氨基酸、脂肪酸含量和组成的影响,为植物添加剂在惠阳胡须鸡生产中的应用提供理论依据。选取120只120日龄体重相同、健康的惠阳胡须母鸡,随机分成4个处理,每个处理3个重复,每个重复10只。试验Ⅰ组,饲喂基础日粮+2%绿茶粉;试验Ⅱ组,饲喂基础日粮+4%桑叶粉;试验Ⅲ组,饲喂基础日粮+1.5%大蒜粉;对照组,饲喂基础日粮,预试验7 d,正式试验30 d。饲养试验结束后,每个处理随机选取10只鸡进行屠宰。每只屠宰鸡取同一部位胸肌100 g,通过氨基酸自动分析仪测定肌肉中氨基酸的组成和含量,通过气相色谱仪测定肌肉中脂肪酸的组成和含量。试验结果表明：①日粮中添加植物添加剂对肌肉中氨基酸的组成没有影响,但对肌肉中氨基酸的含量有影响,试验组必需氨基酸含量均显著高于对照组（P<0.05）;②日粮中添加植物添加剂对肌肉中脂肪酸的组成没有影响,但对肌肉中脂肪酸的含量有影响,对照组总饱和脂肪酸含量显著高于3个试验组（P<0.05）,而3个试验组总多不饱和脂肪酸含量/总饱和脂肪酸含量的比值显著高于对照组（P<0.05）。本试验结果表明,日粮中添加植物添加剂不影响肌肉中氨基酸和脂肪酸的组成,但影响肌肉中两者的含量,显著降低鸡肌肉中饱和脂肪酸的含量,提高多不饱和脂肪酸的比例,增加必需氨基酸含量。因此,日粮中添加植物添加剂可改善惠阳胡须鸡肌肉品质。     

重组鸡γ干扰素的抗球虫作用

鸡 γ干扰素 (Ch IFN- γ)是一种重要的细胞因子。对 r Ch IFN- γ抗球虫作用进行初步研究。在 7日龄对试验雏鸡口服接种 4× 10 4 个成熟的柔嫩艾美耳球虫卵囊时 ,结果表明 ,r Ch IFN-γ可以增加试验雏鸡的相对增重率 ,同时还发现 r Ch IFN-γ可以减少 OPG值和肠道病变记分 ,各 r Ch IFN-γ处理组中以肌肉注射 5 0 0 0 U r Ch IFN-γ组的相对增重率最高 ,为 93.0 %,其肠道病变记分和 OPG分别为 1.8和 6 .6 1万 / ml,ACI为 14 1.7     

鸡γ-干扰素的功能及临床应用

γ-干扰素(interferon gamma,IFN-γ)是干扰素的一种,是一类具有多种调节效应的细胞因子,主要由活化的T细胞和NK细胞产生,IFN-γ是动物机体最重要的细胞因子之一,是主要的巨噬细胞活化因子.由于其具有广谱高效抗病毒、抗肿瘤活性及其强大的免疫调节作用,IFN-γ已成为当今免疫学、病毒学、细胞学、分子生物学、临床医学、肿瘤学等相关领域的研究热点,被广泛应用于人类疾病临床治疗和动物疾病防控研究.文章就鸡IFN-γ的分子结构、作用机理、生物学功能、存在问题及临床应用等方面做简要综述.     

鸡传染性支气管炎病毒S1基因和鸡II型干扰素基因在重组鸡痘病毒中的共表达

将鸡II型干扰素(ChIFNγ)基因和鸡传染性支气管炎病毒S1基因同时插入到鸡痘病毒转移载体中,构建含有这2个基因的鸡痘病毒转移载体pSY-ChIFNγS1。采用脂质体法将该质粒转染鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF),经过8轮蓝斑筛选,得到纯化的能够同时表达鸡II型干扰素和鸡传染性支气管炎病毒S1基因的重组鸡痘病毒rFPV-ChIFNγS1。rFPV-ChIFNγS1接种28日龄的SPF鸡1周后,可以检测到针对传染性支气管炎病毒S1基因的ELISA抗体,重组病毒接种鸡的CD4+、CD8+和γδTCR阳性T淋巴细胞的百分比含量显著高于非免疫对照鸡(P<0.05);免疫4周后用传染性支气管炎LX4强毒株攻击,rFPV-ChIFNγS1免疫组仅有1只出现轻微的呼吸道症状(1/16),而非免疫对照组则有16只发病(16/16),并有2只出现死亡(2/16),表明rFPV-ChIFNγS1对接种鸡可以产生良好的保护效果。     

益生菌对惠阳胡须鸡的生长性能和屠宰性能的影响

本试验旨在研究益生菌（丁酸梭菌和粪肠球菌）对惠阳胡须鸡的生产性能和屠宰性能的影响。选取6 000只健康、体重均匀的70日龄的胡须鸡仔鸡,随机分成4组,分别为对照组、粪肠球菌组、丁酸梭菌组、粪肠球菌和丁酸梭菌混合组。试验鸡饲养于同一鸡舍中,所有试验肉鸡均采用相同饲养管理方法,在相同环境下进行饲养,自由饮水和采食。试验结果表明：与对照组相比,丁酸梭菌组平均总增重有所增加,混合组在12、13和15周龄的体重显著提高（P <0.05）,平均总增重高于其他组,饲料转化率有较大提高;在屠宰性能方面,丁酸梭菌组的宰前体重、半净膛重和胸肌重显著提高（P <0.05）,混合组胡须鸡的宰前体重、屠体重和半净体重有极显著提高（P <0.01）,而全净膛重、胸肌重和脚重有显著提高（P <0.05）。由此可见,在胡须鸡的日常饮水中添加丁酸梭菌制剂和粪肠球菌制剂对胡须鸡的生长性能和屠宰性能具有良好的改善作用。     

抗鸡γ-干扰素单克隆抗体的制备及定量ELISA方法的建立

将原核表达重组鸡γ-干扰素(rChIFN-γ)以100μg/只剂量免疫8周龄BALB/c小鼠,4次免疫后进行细胞融合,以昆虫细胞表达重组鸡γ-干扰素为检测抗原,筛选出阳性克隆株,经有限稀释,获得1株稳定分泌抗鸡γ-干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分泌抗体亚型为IgG1型,轻链为Κ链,命名为G1株。Western blot检测显示,该单克隆抗体与原核表达和昆虫细胞表达的rChIFN-γ均具有良好的免疫反应原性。昆虫细胞表达rChIFN-γ经该G1单克隆抗体作用后,失去抑制水疱性口炎病毒(VSV)在鸡胚成纤维细胞(CEF)复制的能力。利用纯化的单克隆抗体和昆虫细胞表达rChIFN-γ建立相对定量ELISA检测方法,取吸光度值(Y)对昆虫细胞表达rChIFN-γ的抗病毒活性单位对数(X)作回归曲线,回归方程为Y=0.1164~*X-0.1281,回归系数R=0.9539,具有艮好的线性关系。     

乳糖诱导重组鸡γ干扰素基因在大肠杆菌中的表达

本文考察了乳糖代替IPTG诱导鸡γ干扰素(ChIFN-γ)在重组大肠杆菌BL21(DE3)中表达的可行性。分别对乳糖作为诱导剂时的诱导时机、乳糖浓度、诱导持续时间和添加方式等方面进行了分析,并在最优诱导条件下与IPTG诱导进行比较。结果表明,工程菌在对数生长中后期(OD600为1.5)添加终浓度为2g/L的乳糖诱导7h对蛋白的表达和菌体量最为有利。由于乳糖本身可作为碳源被菌体利用,分批流加乳糖效果优于一次性添加。与IPTG诱导相比,乳糖诱导的蛋白表达量为29.8%,稍低于IPTG的32.3%,诱导后蛋白表达时间也有所滞后,但收获的菌体量则显著高于IPTG诱导,约为1.21倍,显示出了乳糖作为诱导剂的自身的优势。研究结果证明乳糖可以作为诱导剂应用于重组鸡γ干扰素的工业化生产,同时也为其它重组基因工程药物的生产提供了有益的参考和借鉴。     

鸡γ-干扰素基因的克隆及原核表达

参照Digby发表的鸡γ-干扰素的核苷酸序列，设计一对引物，应用RT—PCR技术，从ConA诱导过的鸡脾淋巴细胞中特异性地扩增出大小约为500bp的基因片段。将该扩增基因进行克隆测序，结果表明其序列与Digby报道的CHIFN-γ基因序列的同源性达100％。将该基因插入原核表达载体pGEX-4T-γ中构建成重组表达载体pGEX—CHIFN-γ，并将其导入大肠杆菌BL21中，诱导表达的重组蛋白经SDS—PAGE分析，分子量约为43ku，表明所克隆的CHIFN-γ基因在原核细胞中得到了表达。     

鸡γ-干扰素基因的分子克隆与序列测定

应用逆转录 -聚合酶链式反应 ( RT-PCR)技术 ,从 Con A诱导培养 2 4 h的鸡脾淋巴细胞中扩增得到了大小约 50 0 bp的基因 ,将其平端连接到 p UC1 9质粒上 ,进行质粒 PCR和 Eco RI、Hind 双酶切鉴定后 ,筛选阳性重组克隆。序列分析表明 ,该基因阅读开放框架由 4 92个核苷酸组成 ,与马和人γ-干扰素基因序列的同源性分别为 3 5%和 3 2 %,与鸡 型干扰素基因的同源性仅为 1 5%,与国外报道的鸡 γ-干扰素基因序列完全一致。表明鸡脾淋巴细胞受到有丝分裂原刺激后 ,其 γ-干扰素基因 m RNA发生了表达 ,试验成功地克隆得到了鸡 γ-干扰素基因     

惠阳胡须鸡IFN-α基因的克隆表达和重组蛋白的抗病毒活性圆二色性分析

IFN-α是一种具有很强抗病毒活性的细胞因子.从惠阳胡须鸡肝脏克隆了IFN-α基因,为新的亚型.将IFN-α成熟肽与毕赤酵母pPICZαA连接,经酶切鉴定、PCR鉴定和测序后确定目的基因无突变并且插入方向正确,将重组质粒转化到GS115中,阳性转化子经甲醇诱导表达,获得了高效分泌表达,重组IFN-α分子量约为35 kD,表达量达到了0.307 mg/ml,在CEF/VSV细胞系上的抗病毒活性为3.2×106 U/mg.圆二色实验结果表明IFN-α重组蛋白中含有53.2% α螺旋、3.1% β折叠、10.6%转角和33.1%无规谱卷曲,属于全α型蛋白.结果表明,采用毕赤酵母分泌表达了有活性的鸡IFN-α,并首次证实鸡IFN-α属于全α型蛋白.     

鸡γ-干扰素基因的克隆及原核表达

参照Digby 发表的鸡γ-干扰素的核苷酸序列,设计1对引物,应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从Con A诱导过的鸡脾淋巴细胞中特异性的扩增出大小约为 500 bp的基因片段。将该扩增基因进行克隆测序,结果表明其序列与Digby报道的CHIFN-γ基因序列的同源性达100%。将该基因插入原核表达载体pGEX-4T-1中构建成重组表达载体pGEX-CHIFN-γ,并将其导入大肠杆菌BL21中,诱导表达的重组蛋白经 SDS-PAGE 分析分子质量约为 43 ku,表明所克隆的CHIFN-γ 基因在原核细胞中得到表达。     

鸡γ-干扰素基因原核表达及多抗血清的制备

将扩增的鸡γ-干扰素基因(CHIFN-γ)克隆至原核表达载本pET30a上,构建了重组表达质粒pET-30a-CHIFN-γ.将其转入大肠杆菌BL21(DE3)中,于37℃不同时间诱导表达,经SDS-PAGE分析表明该蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,且以可溶蛋白的形式存在.蛋白通过镍离子亲和树脂进行纯化,并作为免疫原制备兔抗CHIFN-γ多抗血清.Western-blotting结果表明目的蛋白与多抗血清有免疫反应性.     

鸡干扰素分子生物学研究进展

干扰素是一类具有多种调节效应的细胞因子。干扰素对病毒的作用是非特异的，有益于相应生物制品的生产，但具有严格的动物种属特异性。随着鸡干扰素的深入研究，尤其是分子生物学方面的深入研究，干扰素类型、作用机理已经清楚，在治疗和预防疾病方面的潜力将逐渐被挖掘出来。     

干扰素对鸡胚内H9N2亚型禽流感病毒滴度的影响

为探讨干扰素在动物上的运用,笔者利用H9N2亚型禽流感病毒与不同剂量干扰素（IFN）一起接种鸡胚,运用HA方法测定病毒效价,研究了干扰素干扰H9N2亚型禽流感病毒在鸡胚内增殖的情况,试验结果表明,高中低剂量干扰素都有抑制病毒增殖的作用,而3个试验组之间没有明显差异（P>0.05）。但是在一定的时间内,高剂量组干扰素与中低剂量组相比能够明显的抑制病毒增殖,表明高剂量组干扰素在一定时间内抑制H9N2禽流感病毒的作用比较明显,这在生产中有一定的应用价值。     

表达MDV gB和/或鸡γ干扰素基因的重组鸡痘病毒免疫效力试验

将表达鸡γ干扰素基因、表达MDV gB基因、共表达MDV gB和鸡γ干扰素基因的重组鸡痘病毒进行组合免疫观察在SPF鸡、狼山鸡中的免疫保护作用。在狼山鸡中随rFPV-gB剂量的减少，保护效力逐渐下降，而在SPF鸡中10^4与10^6PFU的rFPV-gB提供相同的保护效力，但存在减缓增重的副反应；在所有的疫苗组合中，由10^6PFU的rFPV-gB、10^5PFU的rFPV-IFN-Ⅱ和4000PFU HVT组成三价疫苗的保护效力最高且不影响增重，表明鸡γ干扰素既或降低重组鸡痘病毒的减缓增重的副反应，又具有免疫佐剂作用，与重组鸡痘病毒及HVT配合成疫苗是预防MD有效的冻干制剂。