ART3功能及其与精子发生关系的研究进展

ADP核糖基转移酶3(ADP-ribosyl transferases 3,ART3)是ADP核糖基转移酶(ADP-ribosyl transferases, ARTs)家族成员之一,与非阻塞性无精症及癌症高度相关,干扰ART3基因或抑制该基因编码蛋白的表达,会导致精子密度降低、畸形率升高和曲细精管生精细胞脱落。ART3在精子发生过程中不可或缺,因此,深入研究其功能很有必要。目前,ART3在精子发生中的具体作用机制尚不清楚,并且相关研究报道较少。笔者综述了ARTs家族成员蛋白结构及其在精子发生中的作用,ART3蛋白结构预测及其在睾丸组织中的定位,并通过分析其在三阴性乳腺癌和黑色素瘤中的功能和作用,探讨其可能参与的调控通路,以期为揭示ART3在精子发生中的功能及作用机制提供科学参考,为提升动物精液品质、解决雄性不育等问题提供思路。     

乳蛋白质糖基化的研究进展

乳中不但含有营养成分,还含有多种生物活性物质。糖蛋白作为乳中具有生物活性的多糖复合物,能够起到防止病原菌感染、调节肠道微生物菌群和免疫防御等作用。本文综述了蛋白质糖基化的类型、研究方法、乳中主要糖蛋白的组成、糖基化位点、糖链结构及乳糖蛋白的生物学功能的研究进展,旨在为进一步研究乳蛋白质糖基化提供参考,为利用乳中具有重要生物学功能的糖蛋白提供一定的理论依据。     

禽蛋中主要糖基化蛋白质的研究进展

蛋白质的糖基化是一种很重要且普遍的翻译后修饰,在生命活动和结构功能中都具有很重要的意义,蛋白质在细胞内合成以后,超过半数会被修饰成具有独特生物活性的糖蛋白,即由蛋白质和甘露糖、岩藻糖、半乳糖等不同种类的单糖或低聚糖组成的糖链结合而成的一种化合物。     

葡萄风信子花青素3-O-葡糖基转移酶基因的克隆及其表达分析

花青素3-O-葡糖基转移酶(3GT)是花青素苷合成最后一步的关键酶,可把不稳定的花青素催化成花青素苷。本研究利用PCR技术从蓝色葡萄风信子‘亚美尼亚’(Muscari armeniacum)中克隆到一个3GT基因(Ma3GT),Ma3GT cDNA全长1 377bp,编码458个氨基酸,与其他植物的3GT蛋白序列相似性达55%~64%。进化分析表明,Ma3GT与单子叶植物3GT聚为一类,与小苍兰(Freesia hybrida)、荷兰鸢尾(Iris hollandica)3GT亲缘关系最近。荧光定量PCR分析发现,Ma3GT在‘亚美尼亚’花(S_4)中高表达,在叶片中微量表达,根和鳞茎中几乎不表达,在‘白丽人’及‘粉日出’各个组织中均不表达。在‘亚美尼亚’中,Ma3GT的转录表达受花发育调控,开花早期(S_1)几乎不表达,随着花发育表达量逐渐增加,至完全开放的时期(S_4)达到最高峰。此外,Ma3GT在不同品种的花中转录表达不同,在蓝色品种‘亚美尼亚’中高表达,而在白色品种‘白丽人’和粉色品种‘粉日出’中几乎不表达。本研究为进一步研究Ma3GT基因在葡萄风信子花瓣呈色中的功能及其花色分子育种提供基因资源和依据。     

大肠杆菌不耐热肠毒素突变体的原核表达及其活性研究

为使大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)的毒性丧失或减弱的同时仍保留其较强的免疫原性,本实验通过PCR和重叠-延伸PCR扩增,制备了突变体LTR72/G192的基因片段,经酶切和测序结果表明构建的表达载体pLTR72/G192阅读框架正确,而且相应位点氨基酸获得了替换。IPTG诱导表达目的蛋白经SDS-PAGE电泳检测,表达出突变体重组蛋白为约30 ku和10 ku的两个蛋白带,与LTA、LTB亚基分子量相吻合。Western blot检测结果表明两个蛋白亚基均可与His抗体发生特异性反应。目的蛋白经纯化后进行ADP-核酸转移酶试验及Patent-mouse毒性试验检测其酶活性与毒性,突变重组蛋白与野生型LT相比其酶活性和毒性均明显降低。纯化的目的蛋白与鸡新城疫病毒弱毒疫苗联合一起经滴鼻免疫鸡,ELISA结果显示,突变体LTR72/G192能辅助新城疫疫苗在血清和黏膜中产生较高滴度的抗新城疫病毒的IgG和IgA。     

甲型流感病毒血凝素糖基化的生物学效应

糖基化是甲型流感病毒(IAV)血凝素(HA)的一种重要翻译后修饰.HA糖基化在IAV的演化和适应过程中发挥重要作用.现从IAV的免疫应答、HA受体亲和性和病毒的适应性等角度,详述HA糖基化修饰的生物学意义,以此为创建基于HA糖基化依赖机制的新型流感疫苗提供指导.     

家蚕核多角体病毒DNA聚合酶基因的克隆

从家蚕核多角体病毒（ＢｍＮＰＶ）基因组中克隆了完整的ＢｍＮＰＶＤＮＡ聚合酶基因。详细的限制性内切酶酶谱分析表明：ＢｍＮＰＶＤＮＡ聚合酶基因的限制性内切酶图谱与苜蓿尺蠖核多角体病毒（ＡｃＭ－ＮＰＶ）ＤＮＡ的聚合酶基因图谱完全一致，且在基因组中的位置亦相似。ＤＮＡ聚合酶基因的部分测序结果显示：ＢｍＮＰＶ与ＡｃＭＮＰＶ的ＤＮＡ聚合酶有高度的同源性，远高于ＡｃＭＮＰＶ和舞毒蛾核多角体病毒（ＬｄＭＮＰＶ）两者的ＤＮＡ聚合酶间的同源性，说明ＡｃＭＮＰＶ和ＢｍＮＰＶ间的亲缘关系比ＬｄＭＮＰＶ要近，从分子进化的角度来看，用表型性状进行杆状病毒科属以下的分类似乎并不适宜。     

布鲁菌糖基转移酶对细胞炎症反应的影响

本研究旨在研究布鲁菌糖基转移酶(WboA)在诱发胚胎滋养层细胞(HTP-8)炎症反应中的作用。以羊种布鲁菌M5-90为模板,扩增WboA基因,构建pET28a(+)-WboA重组表达质粒,转化重组质粒在BL21(DE3)中表达,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定,并对重组WboA蛋白进行纯化。构建自杀载体pGEM-7zf-ΔWboA-SacB,通过同源重组的方法,筛选布鲁菌WboA基因缺失株ΔWboA,并进行PCR鉴定和遗传稳定性检测。然后将纯化的WboA蛋白与ΔWboA分别作用于胚胎滋养层细胞,ELISA检测IL-6、IL-10、TNF-α和乳酸脱氢酶(LDH)的相对变化量。结果成功纯化了WboA蛋白,构建了ΔWboA,ΔWboA侵染胚胎滋养层细胞诱导产生炎症细胞因子IL-6、IL-10和TNF-α均低于M5-90对照组,差异显著(P<0.05),WboA蛋白作用胚胎滋养层细胞时,炎症细胞因子IL-6、TNF-α和LDH均高于PBS对照组,差异极显著(P<0.01)。本研究表明WboA蛋白具有细胞毒作用,布鲁菌的致炎作用与脂多糖O链相关,为进一步阐明布鲁菌感染宿主细胞的发病机制奠定了基础。     

糖基化燕麦分离蛋白制备的工艺优化研究

采用湿法糖基化对燕麦分离蛋白(oat protein isolate,OPI)进行改性,以接枝度和溶解度为指标,通过单因素和正交试验优化改性工艺.结果表明,以葡萄糖作为糖基供体的最优改性条件为:蛋白质量浓度2％、葡萄糖:OPI(质量比)3∶1、反应时间80 min、反应温度95℃,在此条件下,糖基化接枝度为(19.82...     

糖基转移酶GalU对单增李斯特菌致病性的影响

为了探明糖基转移酶GalU对单增李斯特菌致病性的影响,本研究利用同源重组技术构建了galU基因缺失株,分析了亲本株ScottA、缺失株ΔgalU和回补株CΔgalU的生长能力、对细胞的黏附侵袭能力以及对小鼠的致病性。生长试验结果显示,galU基因缺失并不影响单增李斯特菌在BHI培养基中的生长能力。细胞侵染试验结果显示,ΔgalU对肠上皮细胞Caco-2的黏附率(0.74±0.18)%和侵袭率(0.70±0.10)%均显著低于亲本株ScottA的黏附率(2.01±0.11)%和侵袭率(2.48±0.25)%,回补株CΔgalU与亲本株的黏附侵袭率则并无显著性差异。免疫印迹结果显示,内化素InlB在ΔgalU细菌表面的锚定量显著低于亲本株,但其表面InlA的锚定量与亲本株并无显著性差异。小鼠试验结果显示,ΔgalU感染的小鼠肝脏和脾脏中的细菌载量分别为(3.76×10~7±1.41×10~7)CFU/g和(2.88×10~7±2.31×10~7)CFU/g,均显著低于亲本株感染小鼠肝脏和脾脏中的细菌载量;此外,ΔgalU感染组小鼠的存活率高于亲本株,但与回补株感染组小鼠的存活率一致。上述结...     

精子发生及冷冻过程中表观遗传调控的研究进展

表观遗传调控是不涉及DNA序列改变而引起基因可遗传变化的机制,包括组蛋白修饰、非编码RNAs的调控及DNA特定碱基结构的修饰,它在基因表达过程中起着十分重要的作用。在精子发生过程中,机体通过表观遗传修饰从而确保精子具有正常的功能。冷冻过程会造成精子不可逆的损伤,这些冷冻损伤可能与精子表观遗传变化有关。作者对精子发生及冷冻保存过程中的表观遗传调控机制进行了综述。     

Fas/FasL系统调控公牛精子发生的研究进展

牛的精子发生是一个特殊的雄性生殖细胞的分化、增殖和凋亡的过程。在这一过程中,生殖细胞总是不断地处于分化和凋亡的动态平衡之中。凋亡信号转导分子Fas和FasL组成的Fas/FasL系统不但在细胞自稳和疾病发生中具有重要作用,而且参与调控牛的精子发生。当Fas和FasL表达异常时,直接影响生殖细胞的发育和增殖。作者通过阐明Fas/FasL系统在牛精子发生过程中的调控机理,为提高种公牛的繁殖性能开创一条新的途径。     

精子发生过程中相关基因的研究进展

精子发生是一个复杂的细胞分化和形态变化过程。生殖细胞内的许多基因被证明在精子发生过程中起着至关重要的作用。文章着重对干细胞因子辕c-kit系统、细胞周期蛋白基因、热休克基因和细胞凋亡相关基因等精子发生相关基因的研究进展进行了综述。     

雌激素对睾丸发育及生精功能的影响

雌激素与睾丸的功能密切相关.人和哺乳动物体内雌激素的合成需芳香化酶(Ar)的参与,而雌激素与特异受体(ERα、ERβ)结合后才发挥生物学效应.在睾丸所有发育阶段,芳香化酶和雌激素受体几乎都有表达.在睾丸发育过程中,雌激素的缺乏对胎儿睾丸的发育有利.但对成年动物来说,大剂量的雌激素可以引起睾丸功能紊乱和生精障碍,而体外条件下小剂量的雌激素又能促进精原细胞的分裂、增生和分化,诱导精子发生和精子成熟,减少细胞凋亡.文章主要从睾丸内雌激素的来源、芳香化酶和雌激素受体的分布、雌激素对胎儿和新生儿睾丸发育以及对精子发生的影响这几个方面进行了综述.     

气象因素对种公牛精子发生的影响分析

本文采用相关和通径分析方法,分析了五项气象因子对精液量和精子活力的影响。结果显示,上两个月的月均最低温度（Ｘ４）和月均日照时数（Ｘ１）对精液量分别产生极显著（Ｐ〈０．０１）和显著（Ｐ〈０．０５）影响,当月平均温度（Ｘ２）和最高温度（Ｘ５）对精子活力产生显著（Ｐ〈０．０５）影响,降水量（Ｘ３）主要通过气温产生影响,五项气象因子对精子发生的总决定系数约３０％。这些结果对研究种公牛环境控制、精子发生有重     

增精宝对环磷酰胺致小鼠生精障碍保护作用的研究

为评价增精宝对雄性动物生精作用的影响,采用环磷酰胺致小鼠生精障碍为动物模型,考察不同剂量增精宝对环磷酰胺致小鼠生精障碍的保护作用。结果显示,高剂量组对小鼠的附睾、睾丸、储精囊和前列腺均有较显著的促进作用;低剂量组精子总密度和精子活率均差异显著(P<0.05);高剂量组精子活率差异显著(P<0.05);对小鼠睾丸各倍体生精细胞比例的影响,高剂量组小鼠睾丸生精小管较为饱满,管腔内存在大量精子,生精上皮较厚,可见各级生精细胞排列整齐,界膜明显,睾丸间质细胞排列整齐。结论表明,增精宝两种剂量均能够显著促进环磷酰胺导致小鼠生精障碍的保护作用,高剂量组对雄性小鼠的作用尤为显著。     

体外精子发生培养方法研究进展

近1个世纪以来,科研人员致力于研究在体外培养的条件下产生具有功能的精子。直到近几年,研究人员才成功利用体外组织培养的方法获得了具有受精能力的精子。体外研究精子发生的方法主要有组织培养法和体外培养分离细胞的方法,结合两种方法将分离的生殖细胞移植到睾丸组织中进行组织培养。作者回顾了体外精子发生的培养方法,为临床应用和阐明精子发生机制的基本问题提出相关见解。     

支持细胞骨架与精子发生研究进展

精子发生过程是支持细胞参与调控的一个精密的过程,支持细胞结构的完整性保证了精子发生的正常进行.支持细胞骨架包括微丝、微管和中间纤维,它们参与构成血睾屏障,为精子发生提供了物理支撑和稳定的微环境,对于维持生精上皮的完整性至关重要,影响支持细胞蛋白质的分泌,使分泌物定向转运.支持细胞骨架的损坏引起生殖细胞的凋亡和精细胞的变形及迁移异常.文章主要围绕影响精子发生的诸多因素对支持细胞骨架的作用及机制加以阐述.     

柞蚕蛹精巢内精子形成过程的显微观察

柞蚕越冬蛹解除滞育后,随着有效积温的不断增加,逐渐向成虫(蛾)发育。通过对不同发育时期精巢、贮精囊及交配囊内的精细胞形态进行观察,了解有核精子和无核精子的形成过程,为柞蚕转基因育种和良种繁育等研究提供理论依据。     

长链非编码RNA NEAT1对小鼠精子发生的影响

为研究长链非编码RNA NEAT1对小鼠精子发生的影响,构建针对NEAT1的干扰载体并包装慢病毒,通过将干扰慢病毒注射到成年小鼠睾丸曲细精管和定量PCR,H.＆E.染色等方法观测NEAT1对小鼠精子发生的影响。研究结果表明,NEAT1在睾丸组织和GC-1生殖细胞系中表达;成功构建CD513B-U6-NEAT1干扰载体,利用第三代慢病毒包装系统包装获得干扰慢病毒且干扰效果明显（NEAT1转录本水平下调69%）;慢病毒注射试验结果显示干扰病毒注射组睾丸指数轻微增加,有精子发生的曲细精管比例由97%减少为86%（P〈0.05）,表明小鼠精子发生受到影响,NEAT1具有维持雄性小鼠精子发生的作用。