脂肪干细胞外泌体功能研究进展

脂肪干细胞外泌体(ADSCs-Exos)不含活细胞,抗原性低,性质稳定,在血管生成、组织再生、免疫调节等方面发挥了重要作用.作为一种无细胞疗法,ADSCs-Exos在组织修复与再生等方面具有广阔的应用前景.该文就ADSCs-Exos功能研究进展作一综述.     

LiCl诱导大鼠脂肪基质细胞成骨分化研究

[目的]探讨体外培养条件下,LiCl诱导大鼠脂肪基质细胞向成骨细胞分化的潜能.[方法]采用Ⅰ型胶原酶消化组织块法分离获得大鼠脂肪基质细胞,将其分为处理组和对照组,分别用25 mmol/L LiCl和25mmol/L NaCl处理3周,采用形态学、SQ RT-PCR、免疫荧光染色、碱性磷酸酶染色及茜素红染色等方法,检测大...     

骨髓基质细胞诱导的神经干细胞移植对颞叶癫痫大鼠学习记忆障碍的改善作用

   探讨骨髓基质细胞诱导的神经干细胞移植至海人酸(kanic acid,KA)致痫大鼠海马后对学习记忆障碍的改善作用,从而为干细胞移植治疗癫痫提供理论依据.体外分离大鼠骨髓基质细胞,并在特定条件下培养、诱导分化为神经干细胞.在海马内注射KA建立大鼠癫痫模型,之后把诱导的神经干细胞移植至KA致痫鼠的海马内,用Morris水迷宫测试大鼠学习记忆能力,用PCR方法检测海马内NSE、c-fos和SEZ-6基因表达,采用Western blot技术检测海马内NSE、C-FOS和SEZ-6蛋白表达.结果显示:骨髓基质细胞成功诱导分化为神经干细胞,诱导分化的神经干细胞移植到脑内可明显改善大鼠的学习记忆障碍;移植组大鼠海马内NSE、c-fos和SEZ-6基因表达下调,NSE、C-FOS和SEZ-6蛋白表达亦下调,与阳性对照组及假移植组比较,差异显著(P<0 05).说明骨髓基质细胞诱导的神经干细胞移植至KA致痫大鼠海马后对学习记忆障碍有明显的改善作用,其机制可能与NSE、c-fos、SEZ-6基因和蛋白的表达下调相关.     

皮肤组织工程的新型种子细胞——脂肪干细胞（ADSCs）

皮肤是机体与外界环境接触的屏障,具有抵御外界微生物入侵、代谢、调节体温等重要作用.皮肤缺损的修复是外科领域的一个基本问题,不仅需要创面及时和永久的覆盖而且要能最大限度地恢复功能和外观.目前常用的修复方法—自体皮移植、同种异体皮移植和异种皮移植,都存在着供区不足、免疫排斥和传播疾病等缺陷.因此,寻找一种理想的皮肤替代物成了一个亟需解决的难题[1].     

脂肪源性干细胞的研究进展

组织工程化脂肪在充填软组织缺损及外科整复方面有着广阔的应用前景。脂肪源性干细胞可作为脂肪组织再生工程种子细胞的理想来源。本文主要介绍脂肪源性干细胞的研究进展以及其在脂肪组织工程领域中的应用。     

骨髓基质细胞及在神经系统疾病治疗研究中的应用前景

中枢神经系统损伤后的再生仍然是神经科学领域的难题,因此很多研究者开始探索干细胞移植治疗神经系统疾病的可行性,而骨髓基质细胞因自身优势,倍受研究者亲睐,本文重点就骨髓基质细胞及其在神经系统疾病中的应用研究进展进行综述。     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏转化生长因子β1及细胞外基质表达的影响

目的:观察氯沙坦对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾脏转化生长因子β1(TGF-β1)和细胞外基质(ECM)―Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白(FN)表达的影响,以探讨糖尿病早期肾脏肥大和氯沙坦对糖尿病肾病(diabetes nephropathy, DN)保护作用的可能机理.方法:实验大鼠随机分为3组,每组12只:正常对照组(C组)、糖尿病组(D组)和氯沙坦治疗组(DL组).左下腹腔注射STZ 60mg/kg体重制成糖尿病模型,DL组在糖尿病模型确立后第2d予氯沙坦10mg/(kg.d)灌胃,C组与D组仅给予等量自来水灌胃.检测各组第4、8wk末(每组各取6只)的血糖、尿白蛋白、血浆血管紧张素Ⅱ含量及相对肾重;免疫组化检测肾内TGF-β1、FN和Ⅳ型胶原蛋白表达水平,图像分析系统分析光密度值.结果:DL组较D组尿白蛋白排泄量明显减少,相对肾重减轻(P＜0.01);免疫组化显示糖尿病大鼠肾内TGF-β1蛋白表达增多,肾小球FN和Ⅳ型胶原沉积增多;DL组TGF-β1蛋白表达均明显低于D组,治疗8wk后FN和Ⅳ型胶原蛋白表达低于D组 (P＜0.05).结论:肾脏ECM积聚是糖尿病肾脏肥大的重要原因;氯沙坦对糖尿病肾脏病变的保护作用机制可能部分是通过下调糖尿病大鼠肾脏的TGF-β1表达,减少ECM积聚.     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏转化生长因子β1及细胞外基质表达的影响

目的观察氯沙坦对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾脏转化生长因子β1(TGF-β1)和细胞外基质(ECM)―Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白(FN)表达的影响,以探讨糖尿病早期肾脏肥大和氯沙坦对糖尿病肾病(diabetes nephropathy, DN)保护作用的可能机理.方法实验大鼠随机分为3组,每组12只正常对照组(C组)、糖尿病组(D组)和氯沙坦治疗组(DL组).左下腹腔注射STZ 60mg/kg体重制成糖尿病模型,DL组在糖尿病模型确立后第2d予氯沙坦10mg/(kg.d)灌胃,C组与D组仅给予等量自来水灌胃.检测各组第4、8wk末(每组各取6只)的血糖、尿白蛋白、血浆血管紧张素Ⅱ含量及相对肾重;免疫组化检测肾内TGF-β1、FN和Ⅳ型胶原蛋白表达水平,图像分析系统分析光密度值.结果DL组较D组尿白蛋白排泄量明显减少,相对肾重减轻(P＜0.01);免疫组化显示糖尿病大鼠肾内TGF-β1蛋白表达增多,肾小球FN和Ⅳ型胶原沉积增多;DL组TGF-β1蛋白表达均明显低于D组,治疗8wk后FN和Ⅳ型胶原蛋白表达低于D组 (P＜0.05).结论肾脏ECM积聚是糖尿病肾脏肥大的重要原因;氯沙坦对糖尿病肾脏病变的保护作用机制可能部分是通过下调糖尿病大鼠肾脏的TGF-β1表达,减少ECM积聚.     

抑制猪支持细胞外泌体对精原干细胞自我更新及分化的影响

[目的]本文利用体外模型检测猪支持细胞分泌外泌体的能力及其对猪精原干细胞(porcine spermatogonial stem cells, pSSC)自我更新及分化状态的影响。[方法]通过两步酶消化法分离猪支持细胞和pSSC并建立猪支持细胞-pSSC体外共培养模型,抑制猪支持细胞外泌体的分泌,检测pSSC自我更新及分化指标,研究支持细胞外泌体对pSSC命运的影响。[结果]分离得到的支持细胞的Wilm肿瘤蛋白1(WT1)阳性率为(87.1±0.02)%,整合素β-1蛋白(ITGB1)阳性率为(94.2±0.01)%,分离得到pSSC的早幼粒细胞白血病锌指蛋白(PLZF)阳性率为(80.6±0.02)%;通过Western blot分析、免疫荧光检测证实支持细胞外泌体的存在;证实20μmol·L^-1 GW4869可以抑制外泌体分泌且不损害支持细胞;GW4869处理后的支持细胞与pSSC共培养发现试验组较对照组pSSC状态差异较为明显,且RT-PCR结果显示猪精原干细胞PLZF基因表达水平显著升高;肥大/干细胞生长因子受体基因(KIT)、胸腺细胞抗原1基因(THY1...     

六味地黄汤对5/6肾切除大鼠肾组织中细胞外基质的影响

目的观察六味地黄汤对慢性肾衰大鼠肾组织细胞外基质的影响,探讨其防治肾间质纤维化的可能机制。方法用5/6肾切除大鼠复制慢性肾衰模型,分空白对照组、假手术组、模型组和六味地黄汤组。术后8周,检测各组肾功能指标;HE染色观察肾脏组织病理变化,Masson染色检测肾脏中胶原纤维沉积;免疫组化法检测ColⅠ、ColⅢ、FN在肾组织中的表达;Western blot法检测PDGF-A、PDGF-B在肾组织中的蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组24 h尿蛋白、血尿素氮和血肌酐明显升高(P<0.01);与模型组比较,六味地黄汤组24 h尿蛋白(P<0.01)、血尿素氮(P<0.01)和血肌酐(P<0.05)均明显降低。模型组HE和Masson染色显示大鼠肾间质纤维化明显,大量胶原纤维沉积,六味地黄汤组肾间质纤维化程度明显减轻,少量胶原纤维沉积。免疫组化法显示,与假手术组比较,模型组肾组织中ColⅠ、ColⅢ、FN蛋白水平均明显升高(P<0.01);与模型组比较,六味地黄汤组肾组织中ColⅠ、ColⅢ、FN蛋白水平均明显降低(P<0.05)。Western blot法显示,与假手术组比较,模型组肾组织中PDGF-A、PDGF-B蛋白水平均明显升高(P<0.01);与模型组比较,六味地黄汤组肾组织中PDGF-A、PDGF-B蛋白水平均明显降低(P<0.01)。结论六味地黄汤可能通过下调PDGF-A、PDGF-B表达,从而减少肾组织中细胞外基质的积聚而抑制肾间质纤维化。     

大段骨缺损修复治疗研究进展

由于外伤、感染、肿瘤切除或先天性疾病等原因造成的骨质缺失,形成较大的间隙,称为骨缺损,是临床常见的病症,其中尤以大段骨缺损的修复治疗较为困难。目前修复大段骨缺损的方法很多如自体骨移植、异体骨移植、人工骨移植、组织工程骨、引导性骨再生、转基因工程[1]等。现就目前常用的修复方法及研究现状综述如下。     

脐带间充质干细胞及其外泌体对宫颈癌HeLa细胞的作用初探

人脐带间充质干细胞是一种多能干细胞,可用于多种疾病的临床治疗。利用从人类脐带分离的间充质干细胞,以及从该间充质干细胞的培养液中分离提取的外泌体,通过与宫颈癌HeLa细胞共培养,研究间充质干细胞及其外泌体对HeLa细胞生物学表型的影响。结果表明:脐带间充质干细胞共培养均极显著抑制HeLa细胞的增殖、迁移及侵袭等表型,并极显著促进HeLa细胞凋亡。脐带间充质干细胞来源的外泌体处理HeLa细胞后,细胞增殖、迁移及侵袭也同样受到极显著抑制,并极显著促进细胞凋亡。这一研究提示脐带间充质干细胞及其外泌体并未在体外培养条件下促进HeLa细胞的生长、迁移,相反对HeLa细胞的表型具有一定的抑制作用。     

犊牛脂肪干细胞的分离、培养与鉴定

为给奶牛营养代谢病等相关研究提供种子细胞,本试验从犊牛肾周脂肪组织中分离出脂肪干细胞(adipose-derived stem cells, ADSCs),采用组织剪碎法结合0.25%Ⅰ型胶原酶消化法消化、收集原代犊牛ADSCs,通过细胞形态学观察,使用免疫荧光染色法检测第5代ADSCs表面特异性蛋白,并使用CCK-8法测定第5、10代细胞生长曲线,观察第10代细胞的成脂、成骨分化能力。结果显示,分离出的犊牛ADSCs接种4 d后细胞呈成纤维细胞样生长;免疫荧光染色结果显示,分离的细胞Vimentin、CD34、CD44、CD90呈阳性,CD31、CD45呈阴性;该细胞在适当的诱导条件下可以定向分化为脂肪细胞和成骨细胞。本试验分离培养的细胞是犊牛脂肪干细胞,具有成脂、成骨分化能力。     

利用骨髓基质细胞与丝素蛋白修复缺损髁突软骨的研究进展

利用丝素蛋白作为支架、骨髓基质细胞作为种子细胞的组织工程技术,修复缺损的髁突软骨是目前髁突软骨修复的最新方法。此方法改变了传统骨质缺损修复模式,通过体外培养骨骼组织再植入体内的方式,可以达到理想的效果。查阅了有关丝素蛋白生物材料及诱导骨髓基质细胞分化为软骨细胞的研究文献,综述了将二者结合起来的组织工程技术修复缺损髁突软骨组织的途径和成果及利用骨髓基质细胞与丝素蛋白修复缺损的髁突软骨的现状和进展。     

牛脂肪间充质干细胞对金黄色葡萄球菌生长的影响

为探讨成体奶牛脂肪来源的间充质干细胞(bAD-MSCs)对奶牛乳腺炎来源的金黄色葡萄球菌生长的影响,首先分离纯化来自奶牛乳腺炎病例中的金黄色葡萄球菌,并通过比浊法测定其在细胞用培养基中的生长曲线,进一步通过将金黄色葡萄球菌与奶牛脂肪间充质干细胞共培养及体外平板计数法来探讨奶牛脂肪间充质干细胞对金黄色葡萄球菌体外增殖的作...     

大鼠表皮干细胞分离培养的方法研究

目的是探讨大鼠表皮干细胞的分离培养的方法。方法主要以0~7日龄SD大鼠为材料,采用中性蛋白酶和胰蛋白酶分离表皮细胞,IV型胶原黏附法对分离的表皮干细胞进行培养,观察其形态、生长情况。结果是培养后的表皮干细胞胞质近中央处有圆形核并开始形成小克隆,细胞即连接成片,紧密相靠,相互衔接,呈铺路石状。结论为该方法分离培养的表皮干细胞纯合,呈现典型的上皮型细胞形态,可用于皮肤的再生修复。     

大鼠骨髓基质细胞培养的实验研究

目的探讨利用骨髓基质细胞体外培养获得神经干细胞的方法及应用．方法体外培养大鼠骨髓基质细胞;免疫组化检测;流式细胞仪检测．结果加BME的骨髓基质细胞大量分裂,形成大量的细胞分裂球,传到4代时,90％以上的细胞表达Nestin阳性．结论BME对骨髓基质细胞有明显的促分裂作用,应用此种方法可获得神经干细胞（Neural stem cell,NSC）．     

人脐带间充质干细胞源外泌体对黑色素瘤细胞生长的影响

为探讨人脐带间充质干细胞源外泌体对黑色素瘤细胞生长的影响,利用差速超速离心法提取人脐带间充质干细胞源外泌体,并用透射电子显微镜、Western blot方法鉴定外泌体形态、粒径和蛋白质;利用CCK-8法、细胞划痕试验、Transwell试验检测不同浓度人脐带间充质干细胞源外泌体对黑色素瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响.结果表明:人脐带间充质干细胞源外泌体呈杯托状,平均粒径70 nm左右,表达标志性蛋白CD63和CD9.不同浓度人脐带间充质干细胞源外泌体对黑色素瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力有促进作用,且呈时间、剂量依赖性,并在人脐带间充质干细胞源外泌体浓度为300μg·mL-1时达到最高,而在浓度为400 pg·mL-1时促进率开始明显下降.     

猪源罗伊氏乳杆菌 LR1 对断奶仔猪肠黏膜细胞外基质动态变化的影响

【目的】初步研究饲粮添加猪源罗伊氏乳杆菌对断奶仔猪肠道细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）表达的影响,为猪源罗伊氏乳杆菌在畜牧业中的推广应用提供参考。【方法】选取 21 日龄体重相近的杜长大杂交断奶仔猪 144 头,随机分为 3 个处理组,对照组（CON）饲喂基础饲粮,抗生素组（AO）在基础饲粮中添加 75 mg/kg 金霉素和 100 mg/kg 喹乙醇,罗伊氏乳杆菌组（LR1）在基础饲粮中添加 5×1010 CFU/kg 猪源罗伊氏乳杆菌 LR1,每个处理组各分 8 栏饲养,每栏 6 头猪,试验期为 42 d,饲养试验结束时随机从每栏挑选 1 头仔猪进行屠宰,取其十二指肠（近端）、空肠（中段）、回肠（远端）样品,进行肠道胶原蛋白、纤维黏连蛋白、肌腱蛋白及其相关调控因子等 ECM 相关指标的检测。【结果】Masson 染色观察结果显示,十二指肠、空肠和回肠中胶原纤维均由肠黏膜下层向上层延伸,与 CON 组相比,LR1 组和 AO 组断奶仔猪十二指肠的胶原容积分数均显著降低（P<0.05）,LR1 组的回肠胶原容积分数也显著降低（P<0.05）。TMT 高通量蛋白质组学分析结果显示,ECM-受体互作通路是差异蛋白主要富集通路之一,且其差异蛋白 COL1A2、COL4A2、COL6A1、ITGA1 等 ECM 分子的表达在 LR1 组显著低于 CON 组（P<0.05）。与 CON 组相比,LR1 组和 AO 组断奶仔猪空肠和回肠 COL1A2、COL3A1、ITGβ2 的基因表达均显著降低（P<0.05）,且 LR1 组显著降低了空肠 COL4A2、COL5A1、COL6A1、FN1、TNC、ITGα1 及回肠 ITGα1 的基因表达（P<0.05）,但对回肠 COL4A2、COL5A1、COL6A1、FN1、TNC 无显著影响。在回肠中,与 CON 组相比,LR1 组和 AO 组断奶仔猪回肠 Collagen Ⅰ ~ Ⅵ的含量显著降低（P<0.05）;LR1 组回肠胞内调控因子 SEC6A1、PDE4D 和胞外调控因子 MMP2 的基因表达均显著降低（P<0.05）;与 AO 组相比,LR1 组的胞内调控因子 SEC6A1、细胞因子 TGF-β 的基因表达显著降低（P<0.05）。【结论】饲粮中添加猪源罗伊氏乳杆菌 LR1 可通过减少 ECM 调控因子 SEC6A1、PDE4D 等的基因表达来调节断奶仔猪肠道 ECM 的重塑。     

基质金属蛋白酶-9与慢性阻塞性肺疾病的形成

基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases,MMPs）是一种与细胞外基质降解合成密切相关的蛋白水解酶,主要作用于呼吸道的细胞外基质和基底膜。基质金属蛋白酶-9（MMP-9）是 MMPs家族中结构最复杂的成员,与慢性阻塞性肺疾病（COPD）的形成过程密切相关,是其不可逆性气流受限的重要的病理基础。该文就 MMP-9的来源、结构、生物学特性、功能及与COPD的形成关系简要综述。