番茄红素对山羊精液冷冻保存效果的影响

为研究番茄红素对山羊精液冷冻保存效果的影响,在山羊精液冷冻稀释液中添加不同质量浓度(0、0.5、1.0、2.0、4.0mg/mL)的番茄红素,检测冷冻-解冻后精子的活率、顶体完整率、质膜完整率、线粒体活性,并用试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性。结果表明,1.0mg/mL组的冷冻保存效果最好,精子活率、顶体完整率、质膜完整率和线粒体活性分别达到52.04%、51.33%、53.57%和49.31%,显著高于对照组,且SOD、CAT、GSH-Px的活性也显著高于对照组;0.5mg/mL组与2.0mg/mL组的精子活率、顶体完整率、质膜完整率、线粒体活性及CAT和GSH-Px活性差异不显著;4.0mg/mL组的精子活率、顶体完整率、质膜完整率、线粒体活性及SOD和CAT活性与对照组差异不显著。因此,在山羊精液冷冻稀释液中加入1.0mg/mL的番茄红素对山羊精液具有显著的保护作用,能进一步提高山羊冻精品质。     

不同抗氧化剂对金华猪精液冷冻保存效果的影响

为了观察冷冻稀释液中添加不同浓度的抗氧化剂谷胱甘肽(GSH)、绿茶多酚(GTPs)、维生素E(VE)和超氧化物歧化酶(SOD)对金华猪精液冷冻保存效果的影响,分别在冷冻稀释液中添加0.125、0.25、0.5 mmol.L-1的GSH,10、15、20 mmol.L-1的GTPs,1、2、4 mg.mL-1的VE和1 000、2 000、4 000 I U的SOD,采集活率较高的金华猪精液,用上述含抗氧化剂的冷冻稀释液稀释后进行冷冻保存,分别检测4个处理组精子4℃平衡后的活率和解冻后精子活率、质膜完整性、顶体完整率。结果表明,在金华猪精液的冷冻稀释液中分别添加15 mmol.L-1GTPs、2 mg.mL-1VE、4 000 I U SOD可显著提高猪精子4℃平衡后的活率、解冻后精子活率和质膜完整率(P0.05)。     

猪精液冷冻与常温保存技术的研究

为研究冷冻保存和常温((17±0.5)℃)保存后猪精子活率、活力和顶体完整率,比较了猪精液冷冻稀释液中2种甘油含量细管法的快速冷冻效果,以及不同解冻温度对冷冻精液的影响,采用细胞计数法、FDA-PI双重染色法与Giemsa染色方法检测精子的活率、活力和顶体完整率。结果显示:3%(体积分数,下同)甘油冷冻解冻后精液的活率、活力(38.54%、52.24%)显著(P<0.05)高于2%甘油组(15.63%、28.22%),但3%甘油组顶体完整率(11.55%)显著(P<0.05)低于2%甘油组(21.71%)。38℃水浴解冻后的精子在39℃培养箱中4 h内活率高于0.3,而50℃水浴解冻后1 h后的活率低于0.3。精液稀释液Anderohep和BTS在常温((17±0.5)℃)保存新鲜猪精子的活率与顶体完整率上效果相似,保存3 d内精子活率达0.6以上,保存6 d内精子活率为0.3以上。结果表明,使用3%甘油冷冻保存及2种常温保存稀释液均可以较好地保存精子。     

胆固醇和磷脂酰胆碱对山羊精液冷冻保存效果的影响

为探究胆固醇(CHL)和磷脂酰胆碱(PC)对山羊精液冷冻保存效果,分别在精液冷冻稀释液中添加不同浓度的CHL(1.0、2.5、5.0、10.0 g/L)、PC(10、15、20、25 g/L),以15%卵黄(EY)作为对照。通过测定冷冻解冻后精子的活力、顶体完整率、精子运动参数、质膜完整率、精子磷脂和胆固醇含量来判断保存效果。结果表明,精液冷冻显著降低山羊精子磷脂和胆固醇含量,分别添加5 g/L CHL和10 g/L PC,精子冷冻解冻后,在活力、顶体完整率、质膜完整率和运动参数与对照组差异不显著。进一步将CHL和PC混合添加发现,4 g/L CHL+16 g/L PC解冻后精子活力、曲线速率、平均路径速度和顶体完整率均显著高于对照组(P<0.05),且可以改善冷冻后精子磷脂和胆固醇含量。运用4 g/L CHL+16 g/L PC冷冻保存精子进行山羊人工授精,其受胎率和产仔率与EY组差异不显著,冷冻稀释液中添加4 g/L CHL+16 g/L PC显著提高山羊精液冷冻保存效果。     

黑山羊精液冷冻稀释液配方的筛选

为筛选出提高黑山羊冷冻精液质量的最佳冷冻稀释液配方,试验分别用4个不同的稀释液配方,对15只湘东黑山羊进行精液的冷冻处理,通过观测平衡后精子活率、解冻后精子活力、顶体完整率、精子畸形率等几个特征性指标,可以看出稀释液配方Ⅳ效果最好,是用于黑山羊精液冷冻的最佳稀释液配方。其配方Ⅳ冷冻保存精液解冻后活力平均为0.3627、冻后顶体完整率为42.93%、精子畸形率为12.93%。     

不同抗氧化剂对马鹿精液冷冻保存效果和抗氧化指标的影响

本研究旨在分析不同抗氧化剂(海藻糖、维生素E、半胱氨酸)对马鹿精液冷冻保存效果和抗氧化指标的影响。选取健康成年伊河马鹿公鹿15头、采用电刺激采精法采集精液,分别使用含不同浓度的海藻糖(0、25、30、35、40 mg/mL)、维生素E(0、0.2、0.4、0.6、0.8 mg/mL)和半胱氨酸(0、1、2、3、4 mg/mL)的冷冻保存稀释液按1∶5比例(精液与含有抗氧化剂的稀释液之比为1∶5)稀释精液后,经过降温平衡-冷冻-解冻后,检测冻精样品中的精子活力、顶体完整率、质膜完整率以及精液中过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活性。结果表明,与对照组相比,海藻糖浓度为35 mg/mL,维生素E浓度为0.6 mg/mL,半胱氨酸浓度为3 mg/mL时,精液中的精子活力、质膜完整率、SOD活性显著提高(P<0.05),通过提高SOD酶活性,对精子氧化应激产生保护作用,提高马鹿精液冷冻-解冻后质量。     

牛精液中药复方稀释液配方筛选研究

在种公牛精液商业稀释液的基础上,按6%、12%、24%和48%的4个水平向稀释液中分别添加4种中药复方提取液,制作0.25 ml细管冻精,解冻(40 ℃,10 s)后比较分析精子活率、顶体完整率、质膜完整性3个指标,以确定较优的中药稀释液配方.结果表明:添加了中药复方提取液的稀释液能更有效的冷冻保存牛精子细胞.其中,复方一和复方二的冷冻效果最佳.复方一在添加量为12%时精子活率、顶体完整率及质膜完整率分别为41.50%、40.14%和38.16%(P＜0.05),分别比对照组提高了10.67%、3.92%和5.50%;复方二在添加量为6%时,精子活率、顶体完整率、质膜完整率3项指标分别达到41.33%、41.59%和40.00%(P＜0.05),分别比对照组提高了10.50%、5.37%和7.34%.     

大豆卵磷脂稀释液中添加原花青素对山羊冻精效果的影响

为研究大豆卵磷脂稀释液中添加原花青素(proanthocyanidin, PC)对山羊精子的冷冻保护作用,以20%卵黄为对照(EY组),分别在大豆卵磷脂为基础稀释液的冻精稀释液中添加最终浓度为0、10、20、40、60μg·mL~(-1)的PC(分别命名为SL0、SL1、SL2、SL3、SL4组),冷冻-解冻后分别对精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性、抗氧化和凋亡指标进行检测。结果表明,当大豆卵磷脂稀释液中PC添加浓度为40μg·mL~(-1)(SL3组)时,解冻后精子活力、活率、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性最高,分别达58.49%、53.45%、50.46%、55.37%和55.16%,显著高于其他PC添加组和EY组(P0.05)。SL3组解冻后精子的超氧化物歧化酶(SOD)(224.87 U·mL~(-1))和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)含量(129.6 U·L~(-1))最高,总caspase凋亡率(54.33%)和TUNEL凋亡率(41.36%)最低,与EY和SL0组差异显著(P0.05)。当PC的添加浓度提高至60μg·mL~(-1)(SL4组)时,解冻后精子质量显著下降,表现为对精子毒性作用。综上,在山羊精液冷冻中,大豆卵磷脂稀释液中添加PC浓度为40μg·mL~(-1)可降低精子氧化损伤和细胞凋亡,提高冻精品质。该研究改善了无动物源稀释液在山羊精液冷冻中的应用效果,提高了山羊冻精的生物安全性和应用前景。     

巴马香猪精液冷冻过程中精子内抗氧化酶活性与精子质膜完整性关系研究

猪精液冷冻过程中,精子质膜往往因受到活性氧(ROS)的氧化而发生损伤,精子品质也随之下降.精子 ROS水平受抗氧化酶活性的影响,然而冷冻过程中精子细胞内抗氧化酶活性变化与细胞膜完整性的关系还缺乏报 道.该试验将巴马香猪精液冷冻保存降温过程中的精子分为4种状态,即鲜精、15 ℃精液、5 ℃精液和冷冻解冻 后精液,检测了各种状态下精子的运动参数、质膜完整性(PMI)和顶体完整性(AI),分析了超氧化物歧化酶(SOD) 活性、谷胱甘肽过氧化物酶(Gpx)活性和ROS(丙二醛MDA)水平.结果表明:15 ℃精子各项指标和鲜精无显著 差异(p>0.05);5℃精子运动能力、质膜完整性和抗氧化酶活性低于鲜精(p<0.05),而精子细胞内MDA 水平与 鲜精无显著差异(p>0.05);冷冻解冻后精子的运动能力、质膜完整性和抗氧化酶活性均低于其他各组(p< 0.05),精子MDA水平显著高于其他各组(p<0.05).同时,SOD和Gpx活性与精子PMI和AI之间的相关性均达 到了显著水平(p<0.05).可见,当精子降温至15℃以下直至冷冻时,SOD和GPX活性逐渐降低,精子细胞清除 ROS的能力随之下降,精子质膜脂质过氧化反应增强,质膜受损,内容物外渗是精液品质降低的重要原因.     

添加V_(B_(12))、V_E、V_C对无角道塞特绵羊精液冷冻效果的影响

探讨在无角道塞特绵羊冷冻精液稀释液中添加VB12、VE、VC对精子冷冻品质的影响。在无角道塞特绵羊冷冻精液稀释液中添加不同质量浓度的VB12、VE、VC制作细管冻精,解冻后观察精子的成活率和顶体完整率等指标。结果显示,VB12添加0.003 g/L时能够显著提高解冻后的精子活率(P0.05)和精子顶体完整率(P0.05);VE添加2.5 g/L时,能够极显著提高解冻后的精子活率(P0.01)和顶体完整率(P0.01);VC的添加4.4 g/L时能够显著提高解冻后的精子活率(P0.05),但对冷冻后精子的顶体完整率无影响。在稀释液中添加VB12、VE和VC能使解冻后精子品质得到提高。VE添加后能够极显著提高冷冻精子的顶体完整率,应该优先考虑添加。     

不同糖类对蓝狐精子常温及冷冻保存特性的影响

人工采取6只优质芬兰雄性蓝狐精液,利用含有不同性质糖成分的Tris-卵黄-柠檬酸钠-甘油稀释液稀释后,常温保存及制成细管冻精,荧光免疫方法检测蓝狐鲜精液常温保存及冷冻复苏后冻融精子的质量,目的在于比较不同性质糖在蓝狐精子常温及低温冷冻保存中的作用。结果表明,常温保存时,果糖、木糖及海藻糖试验组精子活力、质膜完整率及顶体完整率较高,与对照组差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01);超低温冷冻保存时,果糖、海藻糖稀释液有利于提高冻融精子质量,活力(44.6%、43.7%)与对照组(35.6%)差异显著(P<0.05),质膜完整率(50.6%、51.2%)、顶体完整率(53.2%、54.1%)与对照组间(39.6%、43.5%)差异极显著(P<0.01),而其他糖分试验组与无糖对照组差别不显著(P>0.05)。结果提示:果糖、木糖、海藻糖亦可作为蓝狐精液常温保存的稀释液成分,而果糖、海藻糖为蓝狐精液超低温冷冻保存较理想的保护剂     

猪精液预处理稀释液与冷冻基础液的配伍效应

采用6种预处理稀释液对猪精液进行预处理,然后用3种冷冻基础液冷冻保存,研究精液预处理稀释液和冷冻基础液对精子冷冻保存效果的影响,以及其间的配伍效应。结果表明,不同的预处理稀释液对解冻后精子活力的影响差异显著(P<0.05),而3种冷冻基础液对冻后精子活力的影响差异不显著(P>0.05)。不同的预处理稀释液与冷冻基础液之间存在明显的配伍效应,并且用含甘油的稀释液对平衡不同时间的精液冷冻时,其配伍效应又有所不同。猪精液中去除精清可显著提高精子冻后活力和顶体完整率(P<0.05),有利于提高精液品质。     

除去精浆、添加维生素E及水浴平衡对莎能奶山羊精液冷冻效果的影响

主要探讨精液离心、添加VE及平衡方法对山羊细管冻精冷冻-解冻后活力、顶体完整率等的影响,为提高山羊精液冷冻保存效果提供依据.试验1:将鲜精稀释后分为3组,第1组为稀释精液1 000 r/min离心6 min,去掉一半的上清液;第2组用相同的方法反复离心3次,完全去掉精浆;第3组不离心,做为对照.试验2:在稀释液中添加15 g/L VE,以不添加组作为对照.试验3:采用纱布包裹和水浴平衡两种方法.试验结果表明,离心去掉部分精浆组和离心去精浆组精子冷冻-解冻后的活力比不离心组高,差异显著(P＜0.05).精子顶体完整率和畸形率有所下降,但与对照组相比较差异不显著(P＞0.05).离心去掉部分精浆组和离心完全去精浆组相比,精子冷冻一解冻后的活力、顶体完整率和畸形率差异不显著(P＞0.05).冷冻稀释液中添加VE组的顶体完整率显著提高(P＜0.05),畸形率变化与对照组无差异(P＞0.05),精子活力提高效果也不明显(P＞0.05).精液冷冻前平衡方法以水浴法为好,与纱布包裹平衡组相比,水浴平衡组的活力和顶体完整率高(P＜0.05),精子畸形率较低(P＜0.05).可见,精液离心后去掉适量精浆可显著提高冷冻后精子的活力;添加VE可显著提高精液冷冻后精子的顶体完整率;与纱布包裹平衡法相比,水浴平衡法可显著提高精液冷冻后精子的品质.     

湖羊精液稀释液及冷冻保护剂的筛选

试验旨在研究不同稀释液对湖羊精液的4℃保存效果,同时探讨不同种类及浓度的冷冻保护剂对湖羊精液冷冻保存效果的影响。选择6种常见的绵羊精液稀释液配方,检测湖羊精液稀释后精子活力变化,分析精子存活时间及生存指数;另选取6种常见的精子冷冻保护剂,分3组浓度(5%、10%、15%)添加,检测细管冻精解冻后的精子活率。结果表明,6种稀释液对湖羊精液的4℃保存效果存在显著差异,其中F稀释液保存效果最佳。冷冻保护剂的种类和添加比例对湖羊精液的冷冻保存效果都存在影响,稀释液中添加5%的丙三醇对湖羊精液的冷冻保存效果最佳。     

原花青素对湖羊冻精抗氧化能力的影响

在湖羊冻精基础稀释液中分别添加原花青素(PC),使其最终质量浓度为0μg/mL (CK)、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL,经冷冻解冻后对精子质量进行检测,探讨原花青素对湖羊精液冷冻效果的影响。结果表明:当PC的质量浓度为10μg/mL时,解冻后精子的活率、活力、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性最高,分别达58. 91%、56. 03%、50. 03%、53. 42%和50. 19%,其中活力和质膜完整性显著高于对照组;SOD值和GSH-PX值分别为212. 60 U/mL和125. 04 U/L,均显著高于对照组; ROS和MDA值分别为363. 05 U/mL和7. 02 nmol/L,显著低于对照组; NO和NOS值分别为8. 22μmol/L和35. 90μmol/L,其中NOS值显著低于对照组。当PC的质量浓度提高至40μg/mL时,精子解冻后质量显著下降,表现为促氧化损伤。在湖羊精液冷冻中,添加10μg/mL的PC可降低精子氧化损伤,提高冻精品质,当PC质量浓度提高至40μg/mL时,对精子具有毒副作用。     

不同抗氧化剂组合对蒙古马精液冷冻保存效果和抗氧化相关指标的影响

为研究不同抗氧化剂对蒙古马冷冻精液的品质和抗氧化相关指标的影响,选取10匹蒙古公马作为试验动物,以INRA82作为基础稀释液(对照组),分别添加谷胱甘肽(0、5.0、7.0、10.0和20.0mg/mL)、海藻糖(0、25.0、35.0和50.0mg/mL)和联合添加谷胱甘肽+海藻糖((0+0)、(5.0+35.0)、(5.0+50.0)、(7.0+35.0)和(7.0+50.0)mg/mL)制备成含有不同氧化剂的冷冻保护液,将浓缩处理后的马精子分别置于稀释液中稀释、冷冻和解冻,利用精子常规品质检测方法和酶联免疫分析法,检测运动精子比例(TM)、前进运动精子比例(PM)、质膜完整率(MI)、顶体完整率(AI)及丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和谷胱甘肽还原酶(GR)的活性。结果显示:1)5.0mg/mL谷胱甘肽对马精液TM、PM和MI均有提高,可降低精液中MDA含量,可显著提高CAT和GSH-PX活性(P0.05);35.0和50.0mg/mL海藻糖可提高精子TM、PM、AI和MI,且35.0mg/mL海藻糖可显著降低MDA含量(P0.05);2)联合添加5.0mg/mL谷胱甘肽和35.0mg/mL海藻糖可显著提升马精液的TM、PM、AI和MI(P0.05),还可显著降低MDA含量(P0.05),提高SOD活性和GSH-PX活性。综上,联合添加5.0mg/mL谷胱甘肽和35.0mg/mL海藻糖一定程度上可通过改变酶活性,对精子氧化应激产生保护作用,提高马精液冷冻-解冻后质量。     

圆筒形贮存管对猪精液冷冻保存效果的影响

试验研究了用圆筒形贮存管冷冻猪精液时不同漂浮时间和解冻时不同解冻温度、时间对冷冻保存效果的影响。猪精液冷冻时,圆筒形贮存管在放入液氮罐前,先置液氮面上3 cm处,分别漂浮熏蒸5、10、15、20 min后投入液氮中保存。精液解冻时,分别在37℃＋1.5 min、52℃＋1.0 min、70℃＋0.5 min解冻处理。结果表明,漂浮15 min处理可显著提高猪精液冷冻后的精子活率、质膜完整率和顶体完整率。52℃＋1.0 min处理组的猪精液冷冻后精子活率、质膜完整率和顶体完整率显著高于其它2个处理组。试验结果还证实,用圆筒形贮存管冷冻猪精液是可行的,所获得的冷冻后最高精子活率与用0.25 mL麦管获得精子活率无显著差异。     

添加剂在猪精液冷冻保存中的应用

猪精液的冷冻保存显著影响猪精子的运动学参数,损伤精子质膜、顶体和DNA完整性,降低解冻后精子活率和受精能力.近年来,在以甘油和蛋黄作为冷冻保护剂的基础上,为了有效降低冷冻-解冻对精子的损伤,提高解冻精液的受精能力,研究人员将OEP、抗氧化剂(甲基黄嘌呤、丁羟基甲苯、谷胱甘肽、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、褪黑素和维生素E等)、2-羟丙基β环糊精以及透明质酸等物质作为添加剂应用于猪精液的冷冻保存,结果表明这些物质在保护精子质膜和顶体完整性,提高解冻后精子活力、活率和受精能力等方面均有显著作用.     

十二烷基磺酸钠对山羊精液冷冻效果的影响

在山羊冷冻精液稀释液中添加浓度分别为0.05%、0.10%、0.15%、0.20%、0.25%、0.30%的十二烷基磺酸钠(SDS),探讨SDS对山羊精液冷冻品质的影响。结果表明,在冷冻精液稀释液中添加SDS可显著提高山羊精子活率、顶体完整率和质膜完整率,添加量为0.10%时精子活率最高,为73.90%;添加量为0.20%时顶体完整率最高,为58.46%;添加量为0.10%时精膜完整率最高,达54.13%。随着SDS添加浓度的增加,冻后精子质量也随之改善,但添加量至0.20%时,冻后精子质量显著下降(P<0.01)。本次试验SDS的最佳添加量为0.10%。     

猪0.5 mL细管冷冻精液的人工授精试验

【目的】制备猪0.5mL细管冷冻精液,并对其输精效果进行检测。【方法】制备猪0.5mL细管冷冻精液,解冻后对其品质(活力、快速直线游动精子比例、质膜完整率、顶体完整率)进行检测。将36头母猪随机分为8组:A-1、A-2组(各5头)均输新鲜精液精子4×109个,稀释至80mL,其中A-1组采用常规输精,A-2组采用子宫内人工输精;B-1、B-2组(各4头)均采用子宫内人工输冷冻精液,精子数量分别为1×109和2×109个,均稀释至20mL;C-1、C-2组(各5头)均采用子宫内人工输冷冻精液精子2×109个,C-1组稀释至60mL,C-2组稀释至80mL;D-1、D-2组(各4头)均采用子宫内人工输冷冻精液精子4×109个,D-1组稀释至60mL,D-2组稀释至80mL。人工授精后记录妊娠率、受胎率及产仔数量。【结果】制作的猪0.5mL细管冷冻精液解冻后,活力最高的达到(42.4±0.9)%,质膜完整率为(47.2±0.3)%,顶体完整率为(46.8±0.4)%。新鲜精液平均妊娠率为100%,产仔数为9.00±0.63;冷冻精液平均妊娠率为72%,产仔数为6.64±0.82,新鲜精液妊娠率和产仔数均显著优于冷冻精液。【结论】新鲜精液人工输精效果优于冷冻精液;冷冻精液采用60和80mL稀释液体积对产仔率、产仔数没有明显影响;冷冻精液通过子宫内人工输精,效果最佳的精子数为2×109个,稀释液体积为60mL。