牛冷冻受精卵移植的研究(摘要)

关于牛的冷冻受精卵移植的研究(胚胎移植)。供卵牛是经过超排处置的10头黑白花牛和2头黑毛和牛,另外对2头自然发情的牛自其桑椹胚采取66个胚泡供本次试验使用。冻结的容器采用6×70mm的玻璃安瓿,用1.0摩尔的甘油作冻结保护物质。冻结法:35℃～-5℃以1℃1分的速度冷却(置于-5℃的冰中),再以0.3℃/分的速度冷却至-36℃。然后由-36℃直接移入液氮中保存;其融解的方法是置于37℃温水中融解。融解后,66个受精卵中有39     

马胚冷冻到低温的成活力

对马胚冷冻到0°、-10°、-15°和-20℃或贮存在20°,-5°和-196℃的存活力,通过非手术移植到母马的方法进行了测定。6日胚,7日胚和8日胚(排卵后6,7,8天)用非手术法采集,用 Dulbecco 氏缓冲磷酸盐液冲洗,用1.5M 二甲亚砜(DMSO)或1.0M 甘油在室温平衡,然后以0.5—1.0℃/分的速度冷却到-5℃,放入晶种后保持10分钟,再以0.12—0.27℃/分的速度冷冻到-70℃,然后投入液氮里。在贮存1～214天后,给胚加温,以1.4—10.3℃—/分速度从-70℃加温到-10℃,再以     

公猪精液保存时间与人工授精受胎率的关系

作者用一分公猪精液,加入二分鸡蛋黄-葡萄糠-重碳酸钠稀释剂,保存于7℃的环境中。然后用保存1/2小时,1天,2天及3天的精液为母猪作人工授精,结果受胎率如下:     

鸡精液的冷冻速度对精子受精力的影响

从以精子耐冻性为指标而选择的公鸡和普通公鸡中采精,按1℃/分和6℃/分的速率将精液冷冻至-70℃然后投液氮保存。解冻后这两种公鸡精子的受精力不同。经过选择的公鸡,其精液以1℃/分的速率降至-70℃,解冻后受精率最高。而以6℃/分的速率冷冻时,两种公鸡精液的受精率没有差异。这一结果表明,可以用精子的耐冻性为指标进行公鸡的选择,而且在冷冻这种公鸡的精液时,冷冻速     

山羊胚胎简易冷冻试验

用RPE冷冻器冷冻20枚山羊桑椹胚和囊胚。冷冻液为1M甘油杜氏磷酸盐缓冲液(PBS)。胚胎装于0.25ml塑料细管内,0℃时置入冷冻器。以1℃/分降温,-6.5～-7℃诱发结晶,再以0.5℃/分(0.3～0.8℃/分)降温至-30℃,然后投入液氮保存5～12天。35℃水浴解冻。20枚胚胎冻后形态正常率为65％(13/20)。将13枝形态基本正常的胚胎移植给5只受体羊,结果4只受体羊妊娠,产羔7只,冻胚存活率为35％(7/20)。除1只冻胚羔产下后90分钟死亡外,另6只冻胚羔生长发育正常。     

我国首例冷冻“试管牛犊”出生

我国第一头冷冻体外受精胚胎的雄性“试管牛犊”于1989年9月在江苏农科院出生。该试验是将奶牛卵母细胞体外培养成熟,再与解冻后的精子体外受精。受精卵在体外培养发育至囊胚,然后冷冻並保存在-196℃的液氮中。     

奶牛胚胎超低温长期保存成功

用6～7日龄奶牛胚胎进行超低温冷冻保存试验。有10个胚胎在1.5MDMSO中以1℃/分从室温降到-7℃,诱发结晶后,以0.3℃/分降温到-60℃,然后放入液氮内保存373～375天。解冻时从液氮取出,以4℃/分的速率(-50℃到-10℃)升温到-10℃,直接放入20℃水中。除去DMSO后,有5个形态正常。把8个(其中3个异常)移给4头受体后,有2头妊娠,1头生下1对双胎(1母1公),另1头产1母犊。试验比较了不同冷冻保护剂和不同方法冷冻保存奶牛胚胎后的结果。40个胚胎在1.5M DMSO中用缓慢冷冻—解冻方法冷冻保存2-375天后,有17个形态正常(42.50％)。把20个胚胎移给13头受体,有2头妊娠(15.38％),63个胚胎在1.0M甘油中用快速冷冻—解冻方法冷冻保存1-297天后,找回的57个中有30个形态正常(52.63％)。把29个胚胎移给22头受体没有1头受孕。试验表明,奶牛胚胎在1.5M DMSO中用缓慢冷冻—解冻方法冷冻保存1年后仍然存活。解冻后正常胚胎的百分率和在1.0M甘油中用快速冷冻—解冻方法冷冻保存的胚胎解冻后的正常胚胎百分率没有显著差异。但后一种冷冻方法冷冻的胚胎移植后没有成功。应再进一步试验研究。     

非手术采集和移植骡胚的研究

选择已经配种的供体母马18匹,非手术冲洗子宫20次,其中排卵后4～5天的母马,冲洗5次,冲洗液平均回收率为94.80％,但未采到卵;排卵后5(1/2)～7(1/2)天的,冲洗15次,冲洗液平均回收率为85.66％,采到受精卵(骡胚)14个,采卵率为93.00％。结果表明,在排卵5(1/2)天之前,用非手术子宫采卵法未采到母马受精卵,而排卵5(1/2)天之后,非手术子宫采集马受精卵是有把握的。此外,另选没有配种而确切排卵的母马12匹,于排卵后5(1/2)～9天,回收马的未受精卵,虽冲洗液的平均回收率为89.30％,但也未采到未受精卵。显然,未受精的马卵没有进入子宫角,仍停留在输卵管中。经非手术采卵和二次重复采卵的母马都能按期发情,正常排卵。将14个骡胚中的7个以非手术法移植给7匹受体母马,结果一匹妊娠,妊娠率为14％。妊娠的受体母马生下一匹母骡驹,借腹怀胎350天。排卵同步差为-1(1/2)天。     

猪的稀释精液配制技术

随着我国养猪生产的发展和产业化进程的推进,人们对猪人工授精重要性的认识越来越深刻,在现代化养猪生产和育种工作中,人工授精正成为一种非常重要的手段。近年来,由于高度集约化的现代化畜牧业的出现,更进一步地促进了人工授精技术的应用和发展。在此期间,对冷冻精液进行了深刻的研究,并开始应用于生产和育种实践之中。我国猪的精液稀释、保存与应用,在20世纪70-80年代已在各省区推广应用,效果良好。1精液品质检查采得精液后,要将其迅速置于30°C左右的恒温水浴中,以防止温度突然下降对精子造成低温打击。然后取样进行综合全面的分析,确定…     

浓缩马冻精研制报告

我场研制的浓缩马冻精每头份含精子6～7亿,冷冻容积压缩到一毫升,解冻后活力在0.4以上,复活率达70％以上,生存72小时以上,在7～10℃保存12小时活力不变。六个小时内保有良好的受精能力,解冻后可以远途运输配种。1978年又研究了压缩冷冻容积方法,把相同密度的冷冻容积压缩到0.75毫升。     

马精液冷冻保存技术研究进展

马精液冷冻保存是一种将种公马精液加入抗冻保护剂,再进行一系列处理,最后保存在超低温中(液氮、干冰)的技术。近年来该技术随着马冷冻精液在许多国家马匹繁殖育种中逐渐应用而得到了较好的发展。作者综述了马精液冷冻保存技术的精液稀释、离心、再稀释、降温平衡、分装剂型、降温冷冻、液氮保存的研究进展,旨在对马精液冷冻保存技术的进一步研究提供一定的参考,以期推动中国现代马业的健康可持续发展。     

乳牛繁殖技术展望

繁殖本是从一对雌雄家畜产生仔畜,由于生物工程的发展,已丰富了这一领域的内容概念。家畜中的乳牛繁殖,由于利用冷冻精液人工授精,延长了种畜繁殖期限。近来,有关受精卵移植、胚胎冷冻保存、分割胚胎无性繁殖(如人工的同卵双生)以及雌雄鉴别等技术的出现,对今后牧场经营说来,应探求如何应用这些技术获取较大的经济效果。现将这些最新技术介绍于下。     

下期预告 猪冷冻精液标准化生产

正我国是农业大国,其中畜牧业产值占我国农业总产值的34%。随着我国生猪产业的集约式发展,猪人工授精技术已被普遍接受并广泛运用于生猪生产和育种实践中。人工授精所用的精液要求精液品质高,活力好。使用精液大多是新鲜精液,其保存时间短,运输过程影响精子活力,易交叉感染的缺点使人们把研究的目标转移到冷冻精液上。冷冻精液可以实现不同地区,甚至不同     

猪冷冻精液标准化生产

正我国是农业大国,其中畜牧业产值占我国农业总产值的34%。随着我国生猪产业的集约式发展,猪人工授精技术已被普遍接受并广泛运用于生猪生产和育种实践中。人工授精所用的精液要求精液品质高,活力好。使用精液大多是新鲜精液,其保存时间短,运输过程影响精子活力,易交叉感染的缺点使人们把研究的目标转移到冷冻精液上。冷冻精液可以实现不同地区,甚至不同     

母猪后期胚胎的获取与冷冻保存方法的研究

猪胚胎冷冻保存的关键是获取后期胚胎冷冻进行保存。已有3位研究者使用扩展囊胚或者孵出囊胚获得了猪冷冻胚的后裔’（Hagashi1989,F…inn1993,Kameyama1990）,而使用其它发育阶段冷冻胚胎几乎都没有获得成功。本项研究旨在探讨猪后期胚胎的获取方法以及胚胎冷冻方法。l材料与方法1．1母猪的超数排卵处理方法体重80～90kg杂交处女母猪,分别采用以下2种方法进行超排处理：（）第一天上午注射PMSG孕马血清促性腺激素）1000IU,第四天上午（间隔70～74小时）,注射HCG（人类绒毛膜促性腺激素）1000IU,母猪发情后人工授精2—3次;（2…     

几种冷冻条件对牛体外受精卵发育率的影响

试验比较了乙二醇 (EG)、丙二醇 (PG)、二甲基亚砜 (DMSO)、甘油 (G)和不同的投液氮温度 (- 33℃或 - 4 0℃ )对牛体外受精卵冷冻后发育率的影响。结果 :投液氮温度无论是 - 33℃或 - 4 0℃ ,均以 1.5 mol/ L EG的冷冻效果为最好 ,与 1.5 mol/ L PG相比 ,受精卵的发育率差异显著 (39.7% vs19.2 % ;4 7.8% vs2 4 .7% ,P <0 .0 5 ) ;同 1.5mol/ L DMSO和 1.5 mol/ L G相比 ,受精卵的发育率差异极显著 (39.7% vs 16 .1% or 13.3% ;4 7.8% vs 19.2 % or17.3% ,P <0 .0 1)。 - 4 0℃投液氮 ,受精卵冷冻后的发育率略高于 - 33℃ ,但差异不显著 (P >0 .0 5 )。以 2 5 % EG 2 5 % PG作为细胞外玻璃化溶液对牛体外受精卵进行冷冻 ,冷冻后受精卵的发育率达 5 8.9% ,高于用 1.5 mol/ L EG冷冻在 - 4 0℃投液氮这一处理 (47.8% ) ,但无统计学上差异 (P >0 .0 5 )。然而 ,试验组冷冻后受精卵的发育率均极显著低于对照组 (80 .6 8% ,P <0 .0 1)。结果表明 ,投液氮温度以 - 4 0℃为较好 ,防冻剂以 EG的冷冻效果为最佳。玻璃化冷冻法完全可以应用于冷冻牛体外受精卵     

使用冻精对黄牛实施配种应注意抓好的六个环节

目前牛的冷冻精液人工授精正在农村兴起,逐渐得到群众的共识,但母牛配种后能否受胎极大地影响其繁殖利用率,所以,为保证冷冻精液的受胎率,根据我们多年实践,提醒读者在实施过程中注意抓好以下六个环节: 一、把好冷冻精液的保存、分发和运输关 冷冻精液在保存过程中,如果温度上升到一定程度,将会造成精     

家蚕精子顶体酶活性分析及冷冻精液的人工授精

采用改良Kennedy s法测定了家蚕精子顶体酶活性,得到了适合家蚕精子顶体酶活性测定的最佳条件,即:孵育温度为25℃,孵育时间为4 h;精液体外4℃存放随时间延长其顶体酶活性呈下降趋势,酶活性的测定应在15 h内进行。虽然冷冻精液随着冷冻时间的延长其酶活性下降,但是不同冷冻方式之间酶活性变化趋势不同,-80℃保存时酶活性直线下降,120 d后酶活性下降了61%。液氮中保存的精液虽然在30 d后的酶活性为冷冻前的58%,但在其后的几个月中酶活性下降不明显。此外,顶体酶活性的高低与精液人工授精产卵数及受精卵率相关,酶活性越低其产卵数越少,受精卵率也越低,提示顶体酶活性的高低可以在一定程度上反映精液的品质。     

猪冷冻（—20℃）胚胎在我国移植成功

实验Ⅰ将129枚猪胚胎,用于冷冻-解冻-体外培养研究。以含有1.5M甘油的PBS液为冷冻液,以1℃/分的速率从35℃降至-7℃,在-7℃自动诱发给冰,然后以0.3℃/分的速率降至-35℃,再以0.1℃/分的速率降至-36℃,立即投入液氮(-196℃);胚胎解冻在37℃水浴中进行、分步脱出甘油后以改进的mBMOC-Ⅱ为培养液进行体外培养。结果,囊胚、扩张囊胚、刚孵出囊胚和孵化出后期囊胚、解冻后体外培养存活率分别为0％(0 /2)、64％(16/25)、0％(0/9)。在液氮中(-196℃)保存80～103天,扩张囊胚、刚孵出囊胚和孵出后期囊胚解冻后,体外培养存活率分别为41.6％(5/12)、63.7％(7/11)和0％(0/70)。结果表明,在液氮温度(-196℃)保存下,刚孵出囊胚有较高的耐冻性和存活能力。实验Ⅱ进行猪冷冻胚胎解冻后体内发育能力研究。96枚扩张囊胚和刚孵出囊胚,分批冷冻和保存在-20℃、-35℃和-196℃。解冻后移植3头受体,其中2头返情,1头妊娠并于1990年7月31日产仔2头,公母各1头,初生重均为1.35kg,妊娠期为116夭。该结果为我国首例猪冷冻(-20℃)胚胎移植成功,并为今后开展猪胚胎超低温(-196℃)冷冻保存技术研究奠定了基础。     

马受精卵的冷冻和贮藏试验

日本北海道大学农学院畜牧系的研究人员把排卵6天和8天后通过非外科手术采集的马受精卵,在0°,-10°,-15°或-20℃条件下冷藏,或在20℃条件下贮藏8分钟～9.2小时、-5℃条件下贮藏10分钟,或在-196℃下贮藏1～30天。并且对8天和6天的受精卵分别使用经磷酸盐缓冲的含抗生素盐溶液(PBS)和添加20%母马血清的 PBS(PBS S)。